Tuning une colonne sectorielle écoulement parallèle et Activation de la détection multiplexée

L’objectif global de cette procédure HPLC est d’accorder une colonne d’écoulement segmentée parallèle pour permettre la détection multiplex. Cette méthode répond à des questions clés dans les domaines de la santé et du bien-être, des sciences de l’environnement, de la criminalistique et de tous les domaines nécessitant l’analyse d’échantillons complexes tels que la découverte biologique. Cette technique permet une analyse complète des échantillons tout en fournissant des informations sur les natures chimiques et bioactives des substances contenues dans des mélanges complexes.

Les protocoles multi-détection permettent également une analyse rapide. Cette méthode permet de développer des stratégies pour définir l’empreinte chimique de mélanges complexes, tels que le café et le vin, permettant aux fabricants de faire la différence entre leurs produits et les variétés contrefaites bon marché. Au début, il peut sembler peu orthodoxe de ne pas envoyer l’échantillon entier à un seul détecteur pour une analyse précise.

Cependant, la concentration d’analyte dans chaque flux d’écoulement est supérieure à celle du flux d’écoulement total d’une colonne conventionnelle. Pour commencer, configurez l’instrument HPLC avec de l’eau 100 % UE et du méthanol pur pour les phases mobiles A et B respectivement. Si un détecteur MS doit être utilisé, ajoutez de l’acide formique à 0,1 % aux deux phases mobiles, puis purgez les pompes HPLC conformément aux instructions du fabricant.

Assembler le MS UV VS. Et les détecteurs DPPH. Selon les instructions du fabricant. Assurez-vous que les composants sont disposés de manière à ce que le volume mort dans les lignes du détecteur soit minimal.

Réglez ensuite la longueur d’onde du détecteur UV VISTA sur la longueur d’onde spécifique à l’échantillon ici. 280 nanomètres pour le détecteur MS. Utilisez le mode positif pour le comptage total d’ions ou l’analyse TIC avec la méthode de détection à balayage complet.

Équilibrez la température et le débit de gaz du détecteur MS aux valeurs suivantes. Température du vaporisateur de 500 degrés Celsius, température capillaire de 350 degrés Celsius, débit de gaz auxiliaire de 40 unités, débit de gaz de balayage de cinq unités, débit de gaz de gaine de 60 unités et tension de pulvérisation de 3,5 kilovolts. Pour préparer le réactif radicalaire DPPH, commencez par dissoudre 25 milligrammes de radical DPPH dans 250 millilitres de méthanol dans une fiole jaugée.

Ajoutez 250 microlitres d’acide formique à la solution et sonicez la solution pendant 10 minutes. Couvrez ensuite le flacon et la feuille pour éviter l’exposition à la lumière. Ensuite, purgez la pompe avec la solution radicale DPPH comme conseillé par le fabricant pour mettre en place le système radical DPPH.

Assurez-vous que la conduite de pompe est fixée à l’entrée d’une pièce en T, puis connectez la bobine de réaction de 100 microlitres à la sortie de la pièce en T. Fixez le détecteur à l’autre extrémité du boîtier ENC de la bobine de réaction, à la bobine de réaction et à une colonne chauffante. Enfin, réglez le détecteur UV V radical DPPH sur 520 nanomètres.

Pour construire la colonne de flux segmenté parallèle ou PSF, connectez d’abord l’entrée de la colonne à l’instrument HPLC. Ensuite, utilisez un morceau de tube pour connecter le port central au détecteur MS. Utilisez des tubes des mêmes dimensions pour connecter un port de colonne périphérique au détecteur UV VS et un autre à la pièce T du système de détection de radicaux DPPH.

Bloquez tous les ports périphériques inutilisés à l’aide de butées de colonne. Ajustez le débit de la HPLC à un millilitre par minute de phase B 100 % mobile pour une colonne de 4,6 millimètres, de diamètre intérieur et de 250 millimètres de longueur. Équilibrez-vous pendant 20 minutes.

Pour commencer à régler le système PSF, déchirez d’abord les récipients de collecte vides. Utilisez ces flacons pour collecter séparément la phase mobile de l’UV VS. Et les ports radicaux DPPH. Notez la période de collecte et recueillez au moins 500 milligrammes de solvant dans chaque récipient.

Ensuite, pesez les récipients de collecte pour déterminer la masse de la phase mobile et divisez la masse par la masse volumique du méthanol pour calculer le volume de la phase mobile collecté dans chaque orifice. Enfin, déterminez le débit vers le détecteur MS et calculez les proportions de débit de tous les détecteurs en pourcentage du débit total, comme indiqué dans le protocole texte. Si les proportions de débit s’écartent considérablement des valeurs idéales, ajoutez des tubes supplémentaires si nécessaire pour ajuster la contre-pression et répétez le processus de collecte et de calcul.

Enfin, réglez le débit de la pompe à réactif radicalaire DPPH pour qu’il corresponde au débit de l’orifice de sortie connecté au détecteur. Une analyse HPLC multiplexée a été réalisée sur un échantillon de café. La possibilité d’enregistrer le radical DPPH UV VS. Et Ms.Chromatograms permet simultanément aux composés de l’échantillon qui ont répondu positivement au radical DPPH d’être facilement adaptés aux réponses UV vs

MS basées sur l’alignement du temps de rétention où une réponse positive a été observée à partir du détecteur MSS TIC, la masse moléculaire du pic a été enregistrée. La facilité avec laquelle il est possible d’apparier les pics entre différents processus de détection permet une forme rapide et plus efficace de criblage et de caractérisation d’un échantillon complexe tel que le café. Une fois maîtrisée, cette technique peut être mise en place en seulement une heure environ et prête pour l’analyse des échantillons à la suite de cette procédure. D’autres détecteurs, tels que la fluorescence à indice de réfraction et la détection chimique, comme la luminescence chimique, peuvent être utilisés afin d’obtenir des informations supplémentaires sur les échantillons.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez reconnaître l’importance des processus de détection de multiplexage pour mieux comprendre un échantillon complexe. De plus, la détection multiplex à l’aide de colonnes d’écoulement segmentées parallèles est un moyen extrêmement efficace d’entreprendre une bioexploration.