Name: Tuning une colonne sectorielle écoulement parallèle et Activation de la détection multiplexée (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Apprenez à régler une colonne HPLC à écoulement parallèle segmenté pour activer la détection multiplexée. Cette méthode permet l'analyse rapide d'échantillons complexes comme le café et le vin en chimie analytique.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ce travail a été soutenu par UWS et ThermoFisher Scientific. L’un des auteurs (DK) accuse réception d’une bourse australienne de troisième cycle.

Remarque: Ce protocole contient des instructions sur la façon d&#39;utiliser une colonne de PSF sur un système HPLC couplée avec plusieurs détecteurs pour la détection multiplex. Le protocole a été écrit en supposant que le lecteur a les connaissances de base et de l&#39;expérience en chromatographie et diverses méthodes de détection HPLC. Attention: S&#39;il vous plaît se référer à des fiches de données de sécurité (FDS) pour tous les matériaux et les réactifs avant utilisation (par exemple, la fiche signalétique pour le méthanol). Assurer l&#39;utilisation de toutes les pratiques de sécurité appropriées lors de la manipulation des solvants et chromatographie liquide haute performance (HPLC) éluant. Assurer l&#39;utilisation appropriée des contrôles techniques de HPLC analytique équilibre et instrumentation du détecteur, et de veiller à l&#39;utilisation d&#39;équipements de protection individuelle (lunettes de sécurité, gants, blouse, pantalon de longueur, et des chaussures fermées). 1. Mise en place d&#39;instruments HPLC <ol><li> Préparer l&#39;instrument HPLC avec de l&#39;eau ultra-pure (par exemple, 100% d&#39;eau Milli-Q) de line A et 100% de méthanol pour la ligne B comme phase mobile et purger les pompes selon l&#39;exigence du fabricant. Si l&#39;un des détecteurs utilisés MS est, comme ici, ajouter de l&#39;acide formique à 0,1% pour les deux phases mobiles A et B. </li><li> Mettre en place la HPLC composants et capteurs instrumentaux comme illustré sur la figure 2. Ceci nécessite le placement commode de détecteurs par rapport à la colonne de façon à minimiser le volume mort entre le détecteur et la colonne. La flexibilité dans la configuration du système HPLC est souhaitable. </li></ol> 2. Mise en place d&#39;UV-Vis et Détecteurs MS <ol><li> Régler le détecteur UV-Vis à la longueur d&#39;onde souhaitée dépendante de l&#39;échantillon d&#39;intérêt (par exemple, 280 nm). </li><li> Réglez le détecteur MS en mode positif pour le comte total Ion (TIC) analyse en utilisant la méthode de détection Full Scan. Réglez également les paramètres MS suivants en conséquence: température du vaporisateur 500 ° C, la température capillaire 350 ° C, la gaine de gaz fixé à un taux de 60 unités, les flux de gaz auxiliaire40 et balayer flux de gaz à 5 unités, et la tension de pulvérisation de 3,5 kV. Ces paramètres peuvent être ajustés plus tard pour besoins spécifiques des utilisateurs qui dépendent de l&#39;échantillon analysé. </li></ol> 3. Préparation de 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl radical (DPPH •) Réactif installation de DPPH • Détecteur de système <ol><li> Peser 25 mg de DPPH • et dissoudre dans 250 ml de methanol dans un ballon volumétrique. </li><li> Ajouter 250 ul d&#39;acide formique à la DPPH • réactif. Couvrir le flacon dans une feuille pour éviter l&#39;exposition à la lumière. </li><li> Soniquer le ballon contenant le DPPH • réactif pendant 10 min. </li><li> Purger le DPPH • pompe avec le prêt DPPH • réactif selon l&#39;exigence du fabricant. </li><li> Mettre en place le DPPH • Système selon la Figure 2 par la ligne de fixation de la pompe à l&#39;entrée d&#39;une pièce en T. </li><li> Fixez une bobine de réaction de 100 ul THe sortie de la pièce en T et fixer l&#39;autre extrémité de la bobine de réaction du détecteur. </li><li> Encase la bobine de réaction dans un four à colonne et régler la température de la colonne de chauffage à 60 ° C. </li><li> Réglez le DPPH • détecteur UV-Vis à 520 nm. </li></ol> 4. Mise en place de PSF Colonne <ol><li> Relier l&#39;entrée de la colonne de PSF de l&#39;instrument CLHP. </li><li> Connectez le port au centre du détecteur MS, en utilisant une longueur de 15 cm de 0,13 mm tube ID. </li><li> Connecter un port périphérique au détecteur UV-Vis en utilisant une longueur de 15 cm de 0,13 mm tubes id. </li><li> Connecter un autre port périphérique à la pièce en T du système de détection DPPH • en utilisant une longueur de 15 cm de 0,13 mm tubes id. </li><li> Bloquer le port périphérique utilisé à l&#39;aide d&#39;un bouchon de colonne. </li><li> Ramener le taux de la pompe HPLC de flux à 1 ml min -1 à 100% de la ligne B - 100% de méthanol (acide formique à 0,1%). </li><li> Équilibrer la colonne avec le methanol mobiles ph 100%ase pendant 20 min pour une colonne de 250 x mm de longueur 4,6 mm id. Ce temps est mis à l&#39;échelle en fonction des dimensions des autres colonnes, l&#39;utilisateur peut employer. </li></ol> 5. Réglage de la colonne de PSF pour la détection multiplexée <ol><li> Mesure de la masse d&#39;au moins deux récipients de collecte vides (une pour le port connecté au détecteur UV-Vis et une pour le DPPH • Détecteur) en utilisant une balance analytique. </li><li> Recueillir la phase mobile de l&#39;UV-Vis et les DPPH • ports en deux, les navires de collecte pré-pesée distincts (5.1). Enregistrez la période de temps pour la collecte. Recueillir au moins 500 mg de solvant dans chaque récipient. </li><li> Peser les récipients de collecte et de déterminer la masse de la phase mobile. Compte tenu de la densité de 0,791 g de methanol est ml -1, déterminer le volume de la phase mobile ont été recueillies à partir de chaque port. </li><li> Par différence, qui est, débit d&#39;ensemble de la pompe nominal moins le taux d&#39;écoulement à travers le DPPH • et UV-Vis detectoorifices d&#39;écoulement r, déterminent le taux au détecteur MS de flux. Exprimer chaque partie d&#39;écoulement en tant que pourcentage du débit total. Remarque: Dans l&#39;idéal, les pourcentages de flux sont les suivantes: à la MS est de 18% du débit total, à l&#39;UV-Vis 22%, au DPPH • détecteur 60%. </li><li> Si non, ajuster les pourcentages d&#39;écoulement en modifiant la pression de retour sur le détecteur UV-Vis. Par exemple, si l&#39;écoulement à l&#39;UV-Vis est trop élevée, diminuer la proportion en ajoutant ajouter une section de 15 cm de 0,13 mm id tube à la sortie du détecteur UV-Vis. Puis répétez les étapes 5.1 à 5.5. </li></ol> 6. Conditions de configuration finale <ol><li> Fixer le taux de la DPPH • pompe de réactif à la même débit sortant de l&#39;orifice de sortie relié à la DPPH • détecteur de débit. Remarque: La colonne de PSF multiplexé avec UV-Vis, DPPH • MS et est maintenant prêt pour l&#39;analyse. </li></ol>

<ol><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+a+new+concept+chromatography+column%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">The design of a new concept chromatography column.</a> Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+separation+performance+using+a+new+column+technology%3A+Parallel+segmented+outlet+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow.</a> J. Chromatogr, A. 1232, 47-51 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+flow+management+in+preparative+chromatographic+separations%3A+A+preliminary+investigation+into+enhanced+separation+using+a+curtain+flow+inlet+fitting+and+segmented+flow+outlet%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet.</a> 35 (3), 410-415 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradient+elution+chromatography+with+segmented+parallel+flow+column+technology%3A+A+study+on+4.6mm+analytical+scale+columns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns.</a> J. Chromatogr., A. 1270, 204-211 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+HPLC+separation+performance+using+parallel+segmented+flow+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography.</a> Microchem. J. 111, 3-7 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Ritchie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmented+flow+and+curtain+flow+chromatography%3A+Overcoming+the+wall+effect+and+heterogeneous+bed+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures.</a> J. Chromatogr, A. 1335, 122-135 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+active+flow+technology+HPLC+columns+as+a+platform+for+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Evaluating active flow technology HPLC columns as a platform for multiplexed detection.</a> Microchem. J. 110, 473-479 (2013).</li>
<li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+outlet+flow+high+performance+liquid+chromatography+with+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection.</a> Anal. Chim. Acta. 803, 154-159 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns%3A+Conventional+analytical+scale+column+formats+presenting+as+a+%27virtual%27+narrow+bore+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column.</a> J. Chromatogr., A. 1262, 64-69 (2012).</li>
<li>Soliven, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+performance+of+narrow-bore+HPLC+columns+using+active+flow+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology.</a> Microchem. J. 116, 230-234 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection%3A+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Cette étude implique la caractérisation et le profilage de café en utilisant HPLC avec détection multiplex employant une colonne parallèle courant segmenté (PSF). Multiplexé HPLC en utilisant des colonnes de PSF permet la caractérisation et l&#39;identification des entités chimiques clés en réduisant la complexité des données de l&#39;échantillon tout en obtenant un degré plus élevé de l&#39;information spécifique à molécule en une fraction du temps nécessaire en utilisant des procédés multi-détection classiques. La col...

Colonnes Flow Technology actifs La technologie de flux actif (AFT) colonnes de chromatographie ont été récemment développés pour surmonter l&#39;inefficacité dans les séparations associés aux flux hétérogénéité 1-6 et également pour permettre la détection multiplex. Dans ce détail particulier de la communication, nous le processus opérationnel du parallèle segmentée flux colonne (PSF) avec détection multiplex. Les avantages fonctionnels de la colonne de fibres discontinues de polyesters sont les suivants: (1) le flux à partir de la région centrale radiale du lit de colonne est isolé de la zone périphérique ou de paroi de l&#39;écoulement, (2) le volume de la phase mobile qui doit être générée par une détection source est réduit, et les sources (3) de détection peut être multiplexé à élargir l&#39;information échantillon sans inculquer retards de détection à travers chaque processus de détection, ou ultérieurement nécessitant la division d&#39;un flux d&#39;écoulement post-colonne 7,8. La fonction clé dans la conception de la colonne de PSF qui permet à l&#39;unvantage de détection multiplexée est la nouvelle sortie assemblage de raccord et fritte. La figure 1 est une photographie de la colonne par rapport à l&#39;AFT une colonne classique. Il est important de comprendre que le processus de division obtenu en utilisant des colonnes de flux segmenté parallèles est pas le même que flux d&#39;écoulement post-colonne fractionnement. Dans un flux d&#39;écoulement post-colonne diviser toute la bande de l&#39;échantillon à partir du bord d&#39;attaque vers les extrémités de la queue est aussi échantillonnés (c.-à-axialement), ainsi, chaque flux de circulation est égale à l&#39;égard de l&#39;efficacité et de la sensibilité; l&#39;amplitude de la sensibilité étant ainsi divisée par les fentes numériques. Dans PSF, toutefois, les échantillons du procédé de fendage de la bande radialement, axialement pas. En tant que tel, les échantillons de l&#39;orifice central de la pointe de bourrage de pointe - la région la plus concentrée du pic. Ainsi, la sensibilité est la plus élevée ici que la pointe ne soit pas dilué par la région de queue diffus. L&#39;échantillon élue à partir des ports périphériques est pas aussi efficace que dans le central zone, mais, étant donné que la bande est échantillonné radialement, et non axialement, la largeur du pic est plus étroite que ce qui serait le cas pour un processus d&#39;échantillonnage que divise le pic dans la direction axiale, à savoir une fraction de post-colonne. Par conséquent la sensibilité d&#39;un détecteur dépendant de la concentration ne soit pas réduit. Dans la colonne de PSF, le raccord de sortie comporte plusieurs orifices de sortie et à l&#39;intérieur de cet embout, il est logé une fritte annulaire. La partie intérieure de ce annulaires canaux de fritte écoulement hors de la colonne par l&#39;intermédiaire de l&#39;orifice central radial de sortie, tandis que la partie radiale externe des canaux de sortie de fritte écoulement hors de la colonne par l&#39;intermédiaire des orifices d&#39;écoulement de sortie périphérique ou région de paroi. Les parties intérieure et extérieure de la fritte de sortie sont séparés par une barrière imperméable qui empêche l&#39;écoulement transversal entre ces régions d&#39;écoulement 2. En conséquence de cette conception le courant central de l&#39;écoulement radial à travers le lit de colonne est séparée des compléments d&#39;écoulement de la région de paroiide la colonne. La part relative de l&#39;écoulement de ces deux régions peut être modifiée pour presque tout rapport souhaité par la gestion de la pression afin d&#39;optimiser divers aspects fonctionnels de la technologie de la colonne, comme l&#39;efficacité de la séparation ou de la sensibilité de détection. En substance, cette conception établit efficacement dans la colonne de plus grand format d&#39;une colonne «virtuel», ayant un diamètre interne plus étroit, et donc les fonctions de colonne comme une colonne à paroi-moins vrai, en surmontant lit colonne hétérogénéité et les effets de paroi 9,10. Les principaux avantages de colonnes PSF sont des améliorations dans l&#39;efficacité de la colonne, la minimisation du traitement solvant pour la source (s) de détection et permettant la détection multiplex. Cependant, un avantage supplémentaire est que, depuis la queue et les régions bordant d&#39;une bande sont retirés de l&#39;élution profil global du soluté à élution ou la détection est présente dans une concentration supérieure, autrement, serait observée pour les mêmes solute injection de charge et concentration sur une colonne classique, en fonction du rapport de segmentation utilisé. En conséquence, il est souvent observé un gain de l&#39;intensité du signal pour les séparations menées sur des colonnes de PSF 2. En fait, si le rapport de segmentation est ajustée de telle sorte que 25% de la sortie d&#39;écoulement de chacun des quatre orifices de sortie, l&#39;intensité du signal qui est observé en utilisant Violet (UV) détection Ultra montre pratiquement exactement la même intensité de signal en tant que ressort au moyen d&#39;un conventionnel où l&#39;ensemble de colonne (100%) de la phase mobile est analysée 7. En outre, un réglage fin du rapport de sortie entre les régions d&#39;écoulement central et la paroi permet efficacité de la colonne à optimiser. Les gains en efficacité de la colonne observées en utilisant des colonnes AFT ne peut pas être déclaré à une seule valeur, étant donné que ces gains d&#39;efficacité sont fonction de trois facteurs: (1) le débit, (2) le rapport de segmentation, et (3) le facteur de rétention de soluté . Néanmoins, des gains d&#39;efficacité par rapport à conventional colonnes sont presque toujours observées, et parfois ces gains sont plus de 100% du nombre de plateaux théoriques 1,2. La possibilité de régler le rapport de segmentation permet à l&#39;analyste d&#39;adapter efficacement le diamètre de la colonne «virtuel», ce qui est un facteur important en ce qui concerne le processus de détection. Par exemple, une colonne de diamètre (id) 2,1 mm virtuel interne est établie à partir d&#39;une colonne physique id 4,6 mm lorsque le rapport de segmentation est de 21% de phase mobile d&#39;élution à partir de l&#39;orifice radial de sortie central. Dans ces conditions, la colonne virtuelle id 2,1 mm se produit avec un rendement qui peut être supérieur à 70% supérieure à la colonne classique de 2,1 mm id, en fonction du débit, et soluté facteur de rétention 10. La conception de la colonne de PSF courant qui est utilisé pour la détection multiplexée comprend un port raccord de sortie 4, mais la colonne peut être munie d&#39;un orifice 2-embout également, cependant, cette limite de détection to deux détecteurs. Le fonctionnement de base de ces colonnes est cependant le même, sauf que les quatre détecteurs peuvent être couplés simultanément à la colonne de sortie PSF 4 ports d&#39;élargir le champ de détection multiplexée. En dehors de colonne tubes conjonctif avant et après, les seules exigences supplémentaires d&#39;opérer une colonne de PSF est un tube qui peut être relié à des orifices de sortie périphériques, et un moyen par lequel la quantité de phase mobile passant à travers chaque tube peut être mesuré, typiquement soit une mesure de masse ou une mesure volumétrique. Pour la facilité de réglage, le diamètre interne de tous les tubes d&#39;écoulement de sortie devrait être la même. Le rapport d&#39;écoulement entre les orifices de sortie centraux périphériques et radiales est ensuite modifiée par l&#39;utilisation de la gestion de la pression, en changeant simplement la longueur de la tubulure situé sur la sortie périphérique montage, ou la longueur du tube de post détecteur sur l&#39;orifice central radial de sortie. Détection multiplexée Utilisation des colonnes de PSF </strong&gt; Un avantage important de colonnes de PSF est que chacun des orifices de sortie de sortie peut être relié directement à une source de détection, permettant ainsi une détection multiplexée. Dans un système de détection bien conçu d&#39;une seule analyse avec détection multiplexée peut fournir des informations importantes en ce qui concerne la nature des composants dans l&#39;échantillon. Surtout, essais destructifs et non destructifs peuvent être menées à exactement au même moment, sans délai de détection. Ceci permet l&#39;affectation de absolu, par exemple, des anti-oxydants à l&#39;aide de DPPH • réactif, avec des composants observés pour éluer avec la spectrométrie de masse (MS) Réponses 7,11 détection UV et / ou. Par conséquent, quatre détecteurs indépendants peuvent être actionnés simultanément avec des parties appropriées de flux dirigés vers chaque détecteur par l&#39;intermédiaire de l&#39;un des quatre orifices de sortie. Depuis l&#39;écoulement à travers ces ports peut être facilement réglé la quantité de soluté d&#39;atteindre l&#39;un des détecteurs peut être ajustée en fonctionla sensibilité de la source de détecteur donné. Il convient de noter, cependant, que la migration du soluté le plus efficace est observée à travers l&#39;orifice central radial de sortie. Chacun des ports périphériques offrent une efficacité de séparation équivalente, qui lorsqu&#39;il est réglé à 25% dans chaque port, est seulement légèrement moins efficace qu&#39;une colonne classique. En tant que tel, il est important que le détecteur quantitative être réglé pour analyser l&#39;échantillon de l&#39;orifice radial de sortie central. Lorsque la mise en place d&#39;une colonne de PSF dans le but de la détection de multiplexage, il ya un certain nombre de considérations qui doivent être faits pour obtenir des résultats efficaces et de haute qualité; soit les dimensions de tubes pour chaque port, le port de choix d&#39;un type de détecteur et réglage du débit. Dimensions du tube pour chaque port Dans la chromatographie la longueur du tube post-colonne joue un rôle crucial dans l&#39;efficacité et la performance de la séparation. Grand dead volume à la suite de longue ou large tubulure id de sortie de la colonne de détecteur se traduira par une perte d&#39;efficacité, la résolution et la sensibilité. Ainsi, les dimensions de tubes appropriés doivent être utilisés lors de la création de la colonne de PSF pour atteindre le potentiel maximal en fournissant une séparation efficace tout en offrant les avantages de multiplexage. Port de détecteur Figure 2 est une illustration d&#39;un exemple de configuration de la détection multiplexée (Ultra Violet-Visible (U-Vis), spectromètre de masse (MS) et de 2,2-diphényl-1-picrylhydrazyl (DPPH •) détection). L&#39;illustration montre le port central est fixé au détecteur MS, alors que le DPPH • et détecteurs UV-Vis sont fixés aux ports périphériques. Étant donné que le détecteur MS est la plus sensible des trois, ce détecteur de flux a été dirigé à partir de l&#39;orifice de sortie central. Comme DPPH • détection est sélective à l&#39;presence d&#39;antioxydants, et la moins sensible et le plus tolérant à l&#39;élargissement de bande, le débit de ce détecteur a été dirigé à partir d&#39;un port périphérique. L&#39;UV-Vis était un détecteur secondaire «générique», afin d&#39;écouler ce détecteur a été réalisé à partir d&#39;un deuxième port périphérique. Réglage du débit Une fois que le tube a été fixé appropriée à partir d&#39;un orifice de détecteur, le flux sortant de chacun des détecteurs peut être ajustée à la quantité nécessaire. Un moyen simple de mesurer la quantité de flux sortant de chaque détecteur est de peser la quantité de phase mobile qui est éluée à travers chaque port sur une période de temps donnée. Le flux de pourcentage peut donc être déterminée, et les rapports d&#39;écoulement peut être réglé par l&#39;allongement ou le raccourcissement ou l&#39;autre du tube attaché à la ligne de sortie sur les détecteurs en conséquence en fonction des besoins des détecteurs de choix. Différents détecteurs ont des exigences différentes de l&#39;écoulement, par exemple, la cellule d&#39;écoulement deun détecteur de fluorescence (FLD) n&#39;a pas le débit limité, mais des précautions doivent être prises pour éviter une surpression de la cellule d&#39;écoulement. Ainsi la commande de l&#39;écoulement à travers la FLD est habituellement atteint en ajustant la chute de pression dans les autres détecteurs et le reste de l&#39;écoulement puis traverse la FLD. Un détecteur qui est sensible à la quantité de flux qui est fourni est la MS. Généralement, les spectromètres de masse actuels haut de gamme peuvent facilement traiter environ 1 à 1,5 ml / min de la phase mobile aqueuse modérément. Au-dessus de ce débit, les inondations de la source peut faire les MS inutilisable. Cependant, la sensibilité de détection dans la plupart des spectromètres de masse est bénéficié en utilisant des débits plus faibles; donc les capacités de fractionnement de flux de PSF sont extrêmement utiles pour des applications impliquant la détection MS. Haute colonne débits volumétriques peuvent être utilisés, mais avec des charges de faible volume transporté au détecteur MS. Réglage de l&#39;écoulement vers le détecteur MS, cependant, doit être effectué en ajustant la chute de pression avant laMS détecteur, plutôt que de soumettre MS. Ici, l&#39;utilisation de tubes de forage étroite (0,1 mm id) est très utile, car la pression peut être facilement ajustée sans ajouter volume mort inapproprié. Selon le type de détecteur le réglage du rapport de segmentation peut être effectuée détecteur soit avant ou après. Si un détecteur non-destructive, tels que UV-Vis est utilisé, le pourcentage de débit serait mesurée et réglée après détecteur. Si un détecteur destructrice unique est utilisé dans le multiplex mis en place le pourcentage de débit est déterminé par le calcul de retour par rapport à d&#39;autres pourcentages de flux de port. Si un détecteur à base de réactif est utilisé comme DPPH •, le pourcentage d&#39;écoulement est mesurée d&#39;après le détecteur sans addition de réactif; et si deux ou plus destructrices détecteurs sont utilisés, alors le rapport d&#39;écoulement est mesurée pré-détecteur. Systèmes qui peuvent nécessiter des instruments supplémentaires, tels DPPH • Détection, aura la pression du système supplémentaire qui peut modifier le débitpourcentage une fois connecté au système de détection. Par conséquent, une attention particulière devrait être accordée à la pression du système d&#39;un détecteur destructrice, lors du réglage de pourcentage de débit pré-détecteur. Quel que soit le rapport de débit qui est définie par l&#39;un des ports, des informations quantitatives devrait être obtenue grâce à la normalisation appropriée. Une fois que les taux d&#39;écoulement sont fixés, cependant, ils sont robustes, et ils ne changent pas, même dans des conditions d&#39;élution en gradient à 7, Le protocole de vidéo détaillée accompagnant ce manuscrit est destiné à montrer comment utiliser et régler un fonctionnement de la colonne de PSF dans un mode multiplexé de détection.

<table><tbody><tr>Instrument <td></td><td></td><td>HPLC</td><td>Plusieurs détecteurs au choix pour la détection multiplexée. Les détecteurs de choix peuvent nécessiter des instruments supplémentaires, par exemple , pompe.</td></tr><tr><td>Colonne HPLC à flux segmenté parallèle</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Non défini</td><td>Bientôt commercialisé</td></tr><tr><td>Méthanol</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td> Tube <td>PEEK de qualité HPLC</td></tr><tr><td>N’importe</td><td>quelle marque</td><td></td><td>Différentes longueurs et insignifiance.</td></tr><tr><td>Stoppeurs de colonne</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td>Pour bloquer les ports périphériques inutilisés.</td></tr><tr><td>Coupe-tube PEEK</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Balance analytique</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Chronomètre</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Récipients de collecte d’éluants</td><td>N’importe quelle marque</td><td></td><td>Les flacons d’échantillons de 1 à 2 ml de marque peuvent être utilisés comme récipients de collecte d’éluants</td></tr></tbody></table>

tuning une colonne sectorielle écoulement parallèle et activation de la détection multiplexée

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

La technologie AFT (Active Flow) est une nouvelle forme de technologie de colonne conçue pour surmonter l’hétérogénéité de l’écoulement, augmenter les performances de séparation en termes d’efficacité et de sensibilité et permettre la détection multiplexée. Cette forme d’AFT utilise une colonne à flux segmenté parallèle (PSF). Un embout de sortie colonne PSF se compose de 2 ou 4 ports, qui peuvent être multiplexés pour connecter jusqu’à 4 détecteurs. La colonne PSF permet non seulement une plate-forme pour la détection multiplexée, mais aussi la combinaison simultanée de détecteurs destructifs et non destructifs, sans tube à volume mort supplémentaire. La quantité de débit à travers chaque orifice peut également être ajustée par la gestion de la pression pour répondre aux exigences d’un ou de plusieurs détecteurs spécifiques. Pour réaliser une détection multiplexée à l’aide d’une colonne PSF, il existe un certain nombre de paramètres qui peuvent être contrôlés pour garantir des performances de séparation optimales et la qualité des résultats ; C’est-à-dire les dimensions du tube pour chaque orifice, le choix de l’orifice pour chaque type de détecteur et le réglage du débit. Ce protocole est destiné à montrer comment utiliser et régler une colonne PSF fonctionnant dans un mode de détection multiplexé.

Une analyse par HPLC en multiplex est effectuée en utilisant une colonne AFT en mode PSF (figure 1) et mis en place comme illustré sur la figure 2. Ce type de configuration laisse un échantillon de café à analyser simultanément à l&#39;aide d&#39;UV-Vis, DPPH • et MS dans Total Ion comte de mode (TIC). Les composés de l&#39;échantillon de café qui ont répondu au DPPH • pourraient alors être facilement adaptés à la hauteur des UV-Vis et MS - Réponse...

Ici, nous présentons un protocole pour le fonctionnement et le réglage de colonnes de chromatographie en flux segmenté parallèle afin de permettre la détection multiplexée.

Tuning une colonne sectorielle écoulement parallèle et Activation de la détection multiplexée

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

L'objectif général de cette procédure de CLHP est d'ajuster une colonne à flux segmenté parallèle afin de permettre une détection multiplexe. Cette méthode répond à des questions essentielles dans les domaines de la santé et du bien-être, des sciences de l'environnement, de la criminalistique, ainsi que dans tous les domaines nécessitant l'analyse d'échantillons complexes, comme la découverte biomoléculaire. Cette technique permet une analyse complète des échantillons tout en fournissant des informations sur les caractéristiques chimiques et bioactives des substances présentes dans des mélanges complexes.Les protocoles de détection multiple permettent également une analyse rapide. Cette méthode permet d'élaborer des stratégies visant à définir l'empreinte chimique de mélanges complexes, comme le café et le vin, permettant ainsi aux fabricants de distinguer leurs produits des contrefaçons bon marché. Au départ, il peut sembler peu orthodoxe de ne pas envoyer l'échantillon entier vers un seul détecteur pour une analyse précise.Cependant, la concentration de l'analyte dans chaque flux est supérieure à celle du flux total d'une colonne conventionnelle. Commencez par configurer l'appare

tuning-parallel-segmented-flow-column-enabling-multiplexed

Research

Recherche

JoVE Journal

Chemistry

Chimie

Procédé automatisé pour identifier appropriés chromatographie d'interaction hydrophobe (HIC) médias à être utilisés dans le procédé de purification de protéine est présenté. La méthode utilise un système de moyenne pression chromatographie en phase liquide, y compris buffer blending automatisé, dynamique boucle d'injection de l'échantillon, sélection de la colonne séquentielle, multi-longueur d'onde d'analyse et de collecte de l'éluat scission fraction.

Automatisé d&#39;interaction hydrophobe Chromatographie sur colonne de sélection pour l&#39;utilisation dans la purification des protéines

Un protocole pour l’utilisation de colonnes de chromatographie liquide à haute performance en flux réactionnel pour les méthodes utilisant la dérivation post-colonne (PCD) est présenté.

Poster Colonne dérivatisation en utilisant la réaction Colonnes flux chromatographie liquide haute performance

Ici, nous présentons un protocole pour le fonctionnement et l’optimisation de la colonne AFT (Active Flow Technology) en mode Curtain Flow (CF) pour des performances de séparation améliorées.

Rideau Colonne Débit: Optimisation de l&#39;efficacité et sensibilité

Un protocole rapide pour la digestion protéolytique avec un microréacteur tryptique à flux continu construit en interne et couplé à un spectromètre de masse à ionisation par électronébulisation (ESI) est présenté. La fabrication du microréacteur, le montage expérimental et le processus d’acquisition des données sont décrits.

Fast Processing Enzymatic des protéines pour MS de détection avec un microréacteur Flow-through

La détection de fluorescence multicolore dans la microfluidique de gouttelettes implique généralement des systèmes de détection basés sur un microscope à épifluorescence encombrants et complexes. Nous décrivons ici un schéma de détection multicolore compact et modulaire qui utilise un réseau de fibres optiques pour coder temporellement des données multicolores collectées par un seul photodétecteur.

Multicolor détection Fluorescence pour Droplet microfluidique utilisant des fibres optiques

Nous démontrons une plate-forme microfluidique avec un réseau d'électrodes de surface intégrée qui combine la détection d'impulsions résistif (SRP) avec la division accès multiple par code (CDMA), pour multiplexer la détection et le dimensionnement des particules en plusieurs canaux microfluidiques.

Plate-forme microfluidique avec multiplexée Détection électronique pour le suivi spatial des particules

Ce protocole décrit la mise en place d'un système de microscopie optique à étirage temporel de détection asymétrique pour l'imagerie monocellulaire dans un flux microfluidique ultra-rapide et ses applications dans la cytométrie de flux d'imagerie.

Cytométrie de flux d&#39;imagerie microfluidique par détection asymétrique Microscopie optique à temps-étirement (ATOM)

Ce protocole montre un test de débit-stretching seule molécule simple, robuste et haut débit pour l’étude unidimensionnelle diffusion (1D) de molécules le long de l’ADN.

Une seule molécule Simple, robuste et haut débit débit étirement test mise en place pour étudier le Transport de molécules le long de l’ADN

Décrits dans les présentes sont les protocoles de fonctionnement et montage d’une plateforme de criblage microfluidique modulaire pour la caractérisation systématique des synthèses de nanocristaux semi-conducteurs colloïdal. Au moyen d’arrangements de système entièrement réglable, collection très efficace de spectres peut-être être menée dans 4 ordres de grandeur des échelles de temps de réaction dans un espace contrôlé par transfert de masse d’échantillonnage.

Une technologie Microfluidic modulaire pour l’étude systématique des nanocristaux semiconducteurs colloïdal

Nous présentons ici un protocole pour la procédure d’emballage optimisée des colonnes capillaires FlashPack. L’application d’un protocole optimisé à une configuration commune de bombe sous pression de 100 bars permet un emballage et une fabrication 10 fois plus rapides de longues colonnes capillaires ultra-haute performance.

Fabrication simple de colonnes capillaires ultra-haute performance en interne avec l’approche FlashPack

La biochimie visuelle à molécule unique étudiée à travers des chambres microfluidiques est grandement facilitée à l’aide d’un baril en verre, de seringues étanches aux gaz, de connexions stables de tubes aux cellules d’écoulement et d’élimination des bulles en plaçant des vannes de commutation entre les seringues et les tubes. Le protocole décrit deux pièges optiques qui permettent de visualiser les transactions d’ADN et les interactions intermoléculaires.

Utilisation de pincettes optiques doubles et de microfluidique pour les études sur une seule molécule

Apprenez à régler une colonne HPLC à écoulement parallèle segmenté pour activer la détection multiplexée. Cette méthode permet l'analyse rapide d'échantillons complexes comme le café et le vin en chimie analytique.

Tuning une colonne sectorielle écoulement parallèle et Activation de la détection multiplexée

Explorer plus de vidéos