Name: Améliorer 2D et 3D Skin In vitro Modèles utilisant macromoléculaire Crowding (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Apprenez à améliorer les modèles de peau 2D et 3D en utilisant l'encombrement macromoléculaire pour accélérer la génération de matrices dérivées de cellules et obtenir des cultures organotypiques matures plus rapidement.

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Ce travail a été soutenu par le Conseil de la recherche biomédicale de Singapour par le biais d’un soutien de base à l’Institut de biologie médicale et d’une subvention SPF2013/005. M.R. a été soutenu par une subvention du comité de recherche de la faculté NUS (ingénierie en médecine) (M.R.) R-397-000-081-112 et le programme d’ingénierie tissulaire de la NUS (NUSTEP). Les auteurs tiennent à remercier le professeur Irene Leigh pour avoir fourni l’anticorps de collagène VII. Les travaux de microscopie électronique ont été effectués à l’unité de microscopie électronique de l’Université nationale de Singapour.

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<li>Harve, K. S., Lareu, R., Rajagopalan, R., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+how+the+crowded+interior+of+cells+stabilizes+DNA%2FDNA+and+DNA%2FRNA+hybrids-in+silico+predictions+and+in+vitro+evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Understanding how the crowded interior of cells stabilizes DNA/DNA and DNA/RNA hybrids-in silico predictions and in vitro evidence.</a> Nucleic Acids Res. 38 (1), 172-181 (2009).</li>
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<li>Auger, F. A., Berthod, F., Moulin, V., Pouliot, R., Germain, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineered+skin+substitutes%3A+from+in+vitro+constructs+to+in+vivo+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Appl+Biochem%22%5BJournal%5D)">Tissue engineered skin substitutes: from in vitro constructs to in vivo applications.</a> Biotechnol Appl Biochem. 39, 263(2004).</li>
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</ol>

Les auteurs n’ont pas d’intérêts conflictuels à divulguer.

La matrice extracellulaire améliorée est obtenue lors de l’introduction de crowders macromoléculaires dans la culture cellulaire, en raison de l’effet de volume exclu qui augmente le clivage du propeptide par les protéinases. Il en résulte que la matrice extracellulaire, en particulier le collagène, est traitée plus rapidement et se dépose à la surface de la culture. Alors que d’autres groupes ont obtenu d’épaisses couches de cellules de fibroblastes, cela a impliqué un temps de culture de plusieurs semaines20...

La peau forme une barrière protectrice en empêchant la perte d&#39;eau et de l&#39;entrée de l&#39;agent pathogène. Il est constitué de trois composants principaux; les stromales riches derme 1, un épiderme stratifié 2,3,4 sur le dessus de celui - ci, et la jonction dermo-épidermique entre 5,6. Le derme est composé en grande partie de collagène et des fibres élastiques et est peu peuplé avec des fibroblastes 7. En revanche, l&#39;épiderme riches en cellules est composé de plusieurs couches de kératinocytes. Les kératinocytes de la couche interne, la plupart sont proliférative et fournissent de nouvelles cellules basales qui renouvellent et remplacent les kératinocytes de différenciation terminale qui se déplacent constamment à la plus externe couche de la peau et ont perdu leurs noyaux et de matériel cytoplasmique, résultant en une couche cornée qui subit desquamation. La jonction dermo-épidermique, un type spécifique de la membrane basale, est une structure complexe composée d&#39;interconnexion molécules de la matrice, ce qui tethers l&#39;épiderme au derme. fibres de collagène I du derme entrelacent avec le collagène VII fibrilles d&#39;ancrage qui sont ancrés au collagène IV riche lamina densa. filaments d&#39;ancrage (de la laminine 5, collagène XVII et intégrines) à son tour relient la lamina densa avec hémidesmosomes de kératinocytes basales. kératinocytes basales (stratum basale) ont la capacité de se multiplier et renouveler, ainsi que différencier et stratifier pour former les couches suprabasales; stratum spinosum, stratum granulosum, et enfin la couche cornée, qui représente la surface de la peau de contact avec l&#39;environnement. En route à partir de la couche basale de la couche cornée, les kératinocytes passer les profils d&#39;expression des cytokératines et enfin l&#39;apoptose et s&#39;enveloppent dans cornified des enveloppes, des coques de protéines spécifiques qui sont de manière covalente réticulés par activité transglutaminase. Recréer la peau et de ses couches in vitro, y compris les structures complexes du<html> jonction dermo-épidermique et dermique matrice extracellulaire, et d&#39;imiter le processus de kératinisation, a les scientifiques et les bioingénieurs longtemps intrigué comme une tâche difficile. Il y a eu des avancées significatives dans la peau du génie tissulaire, par exemple, l&#39;extraction réussie de cellules de la peau à partir de biopsies de patients et la génération de cultures organotypiques de la peau en utilisant des cellules de la peau des patients dérivés 8. Cependant, les problèmes irrésolus restent relatifs à une mauvaise sécrétion des protéines de la matrice extracellulaire par les cellules de la peau et se traduit par des modèles sous-optimaux peau. En outre, le temps nécessaire pour générer la co-culture de la peau organotypique 3D en utilisant des protocoles actuels varie entre quatre à huit semaines, un délai qui pourrait éventuellement être raccourci avec l&#39;incorporation de Crowders macromoléculaires. La réduction du temps de culture permet d&#39;économiser le coût d&#39;un réactif réduit l&#39;incidence de la sénescence cellulaire et réduit le temps d&#39;attente du patient, si le produit est utilisé en clinique. t &quot;&gt; macromoléculaire entassement (MMC) consiste à introduire des macromolécules spécifiques au milieu de culture pour générer des effets de volume exclu. Ceux - ci affectent les taux de réaction enzymatique , y compris le clivage protéolytique de procollagène qui est en retard dans des conditions de culture aqueuses standards 9-13. Sous MMC, les réactions enzymatiques sont empressa sans augmenter la quantité de réactifs 14,15 entraînant, dans le cas du procollagène clivage, une plus grande quantité de collagène de molécules I dans des cultures encombrées par rapport aux témoins 10 uncrowded. comme la conversion du pro - collagène au collagène permet la formation de collagène assemblées, les fibroblastes cultivés avec MMC pendant 48 heures ont donné beaucoup plus de collagène I par rapport aux cultures de fibroblastes uncrowded surveillés jusqu&#39;à quatre semaines 11,16,17. outre les effets sur les activités enzymatiques qui affectent la formation, la stabilisation et le remodelage de l&#39; ECM, MMC a également a été montré pour améliorer et moduler le collagène directementla formation de fibres 18,19. Nous présentons ici une méthode pour améliorer la production de la matrice extracellulaire (ECM) par des cellules de la peau, en particulier, les fibroblastes dermiques et de kératinocytes de l&#39;épiderme. En outre, nous montrons que l&#39;ECM enrichi produit dans MMC dans des cultures monocouches peut être décellularisé et utilisé comme matrice pur dérivé de cellules (MDP). Nous utilisons une approche non-conventionnelle de visualiser et d&#39;apprécier pleinement l&#39;ECM déposé par les cellules de peau en culture avec MMC. La microscopie interférence de réflexion est généralement utilisée pour l&#39;étude des interactions cellule-matrice ou points de contact de cellule à verre. Cette technique a été utilisée dans notre système pour afficher le montant total de la matrice déposée sur la surface du verre. La microscopie Interférence de réflexion a été couplé avec immunomarquage fluorescent pour obtenir la plus grande quantité d&#39;informations en termes de composition de la matrice extracellulaire et la structure, en présence et en absence de MMC. Organotypic peau co-cultures est une méthode classique pour modéliser la peau in vitro dans un contexte tridimensionnel. Alors que les co-cultures bidimensionnelles peuvent fournir des informations importantes, il est limité lors de la traduction de ces données et l&#39; appliquer de nouveau à un environnement in vivo, ce qui est en soi une structure tridimensionnelle. kératinocytes de la peau, en particulier, sont polarisées et contiennent des segments apicales et basales qui sont essentielles pour l&#39;homéostasie et l&#39;adhérence des cellules. En outre, l&#39;expression des protéines suprabasales typiques dans les kératinocytes au-dessus de la couche basale, telles que la kératine 1, de la kératine 10 et filaggrine est présent uniquement au cours de la stratification et la différenciation terminale des kératinocytes. La différenciation terminale est pratiquement présent dans des cultures monocouches typiques, l&#39;expression de la protéine est normalement suprabasale pas réalisée dans ce système de culture. Par conséquent, les cultures organotypiques commencent immergés dans un milieu de culture, mais sont ensuite levées à une interface air-liquide pour conduire keratinocytdifférenciation e. Cela se traduit par l&#39;expression des marqueurs de stratification, même la kératinisation et généralement une meilleure réflexion de la physiologie épidermique. Alors que d&#39;autres groupes ont déjà généré la peau organotypique co-cultures avec succès, la mise en place d&#39;une zone de jonction dermo-épidermique fonctionnelle a été un problème. Ici, nous présentons une nouvelle méthode pour la culture de peau organotypique co-cultures avec une membrane basale améliorée, dans un laps de temps condensé et sans compromettre la maturité de ces constructions. Cela fournirait des mimétiques de la peau pour la modélisation in vitro, l&#39;étude de la biologie de la peau et un assortiment de tests de criblage.

<table><tbody><tr><td>Acide ascorbique</td><td>Wako</td><td>013-12061</td><td>Additif pour milieux de culture</td></tr><tr><td>cellulaire Inserts de culture cellulaire&nbsp ; (format à 6 puits)</td><td>Greiner Bio-One</td><td>657610</td><td>Cultures organotypiques</td></tr><tr><td>Solution de citrate</td><td>Dako</td><td>S2369</td><td>DakoCytomation Solution de récupération de cibles Citrate, pH 6 (x10)</td></tr><tr><td>Collagène (queue de rat)</td><td>Corning</td><td>354236</td><td>Cultures organotypiques</td></tr><tr><td>CnT-57</td><td>CELLnTEC</td><td>CnT-57</td><td>Milieux de culture cellulaire</td></tr><tr><td>DAB Substrat + kit chromogène</td><td>Dako</td><td>K3468</td><td>Histologie</td></tr><tr><td>Plaque à puits profonds (format 6 puits)</td><td>Corning</td><td>355467</td><td>Cultures organotypiques</td></tr><tr><td>Réactif de détection ECL</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>RPN2106</td><td>Amersham ECL Western Blot Detection</td></tr><tr><td>Reagent Microscope électronique (TEM)</td><td>&nbsp ; JEOL&nbsp ;</td><td>&nbsp ; JEM-1010 (100kV)</td><td>Microscopie électronique à transmission</td></tr><tr><td>Média fibroblastique (FM)</td><td></td><td></td><td>High Glucose-DMEM + 10 % Sérum de bovin fœtal + 1 % de pénicilline Streptomycine</td></tr><tr><td>Ficoll PM70</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>17-0310-05</td><td>Crowder macromoléculaire</td></tr><tr><td>Ficoll PM400</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>17-0300-05</td><td>Crowder macromoléculaire</td></tr><tr><td>Milieu sans sérum de kératinocytes (KSFM)</td><td>Life Technologies</td><td>17005-042</td><td>Milieux de culture cellulaire</td></tr><tr><td>Tampon de lyse</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>89900</td><td>Tampon de lyse pour l’extraction des protéines. Un inhibiteur de protéase (Roche, #11836170001) a été ajouté à ce tampon de lyse.</td></tr><tr><td>Microscope</td><td>Zeiss</td><td>LSM510</td><td>Canaux rouges, verts et bleus pour visualiser les immunomarquages fluorescents AF594, AF488 et DAPI (40X mag).</td></tr><tr><td>Milieux de montage (Hydromount)</td><td>National Diagnostics</td><td>HS-106</td><td>Coloration fluorescente</td></tr><tr><td>Milieux de montage (Cytoseal)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>8310-16</td><td>Histologie (HRP)</td></tr><tr><td>Composé OCT (Tissue Tek)</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Enrobage pour cryotomie</td></tr><tr><td>Antibiotiques pénicilline-streptomycine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955</td><td>Additif de milieu de culture cellulaire</td></tr><tr><td colspan="4">Anticorps <forts>primaires</forts></td></tr><tr><td>Anticorps anti-collagène I</td><td>Abcam</td><td>#ab6308</td><td></td></tr><tr><td>Anti-collagène de type IV</td><td>Novocastra</td><td>#NCL-COLL-IV</td><td></td></tr><tr><td>Anti-collagène VII</td><td></td><td></td><td>LH7.2 (en interne)&nbsp ;</td></tr><tr><td>Anticorps anti-fibronectine</td><td>Abcam</td><td>#ab2413</td><td></td></tr><tr><td>Agent réducteur&nbsp ;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NP0009</td><td>Western blot</td></tr><tr><td>Tampon d’échantillon</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>NP0008</td><td>Western blot</td></tr><tr><td colspan="4">Anticorps secondaires (immunomarquage)</td></tr><tr><td>4&prime ;,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>#D9542</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 594 chèvre-anti-lapin</td><td>ThermoFisher Scientifique</td><td>#A-11037&nbsp ;</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 594 chèvre-anti-souris</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>&nbsp ;#A-11005</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 poulet-anti-lapin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>#A-21441</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 488 chèvre-anti-souris</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>#A-11001</td><td></td></tr><tr><td>Anticorps secondaires (HRP)</td><td></td><td>Dako Envision + System - HRP Labellisé Polymère anti-lapin et anti-souris</td><td>désoxycholate de sodium non dilué</td></tr><tr><td></td><td>Prodotti Chimicie Alimentari</td><td></td><td>Décellularisation</td></tr><tr><td colspan="4"><fort>Milieu de stratification </fort></td></tr><tr><td>Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>Utilisé lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>Jambon s F12&nbsp ; &nbsp ; &nbsp ;</td><td></td><td></td><td>Utilisé lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>10 % de sérum fœtal bovin&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>Utilisé lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>100 U/ml de pénicilline et 100 U/ml de streptomycine</td><td></td><td></td><td>Utilisés lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>0,4 mg/ml d’hydrocortisone</td><td></td><td></td><td>Utilisé lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>5 mg/ml d’insuline</td><td></td><td></td><td>Utilisé lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>1.8 et point moyen ; 10-4 M adénine&nbsp ; &nbsp ;</td><td></td><td></td><td>Utilisé lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>5 mg/ml de transferrine</td><td></td><td></td><td>Utilisé lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>2 et point moyen ; 10- 11 M de triiodothyronine&nbsp ;</td><td></td><td></td><td>Utilisé lors de l’interface air-liquide des cultures organotypiques. Ce milieu est ajouté à l’extérieur de l’insert de culture cellulaire.</td></tr><tr><td>Biopolis de trypsine</td><td>Installations partagées</td><td>0,125 % Trypsine/versène&nbsp ; &nbsp ; pH 7,0 + 0,3</td><td>Utilisé pour trypsiniser les cellules</td></tr></tbody></table>

améliorer 2d et 3d skin<em&gt; in vitro</em&gt; modèles utilisant macromoléculaire crowding

Improving 2D and 3D Skin In Vitro Models Using Macromolecular Crowding

La famille des collagènes glycoprotéine représente les principales protéines structurales dans le corps humain, et sont des composants essentiels de biomatériaux utilisés dans l&#39;ingénierie tissulaire moderne. Un goulot d&#39; étranglement technique est le dépôt de collagène in vitro, comme il est notoirement lent, entraînant une sous-optimale la formation du tissu conjonctif et de la cohésion du tissu ultérieur, en particulier dans les modèles de peau. Ici, nous décrivons un procédé qui comprend l&#39;addition de co-polymères de saccharose différentiellement taille des cultures de peau pour générer entassement macromoléculaire (CMM), qui se traduit par une amélioration spectaculaire du dépôt de collagène. En particulier, des fibroblastes dermiques déposé une quantité importante de collagène de type I / IV / VII et de la fibronectine sous MMC par rapport aux témoins. Le protocole décrit également un procédé pour decellularize couches de cellules encombrées, exposant ainsi des quantités importantes de la matrice extracellulaire (ECM) qui ont été retenus sur la surface de culture comme en témoigne immunocytochemistry. motif total de masse et la distribution matrice a été étudiée en utilisant la microscopie interférence de réflexion. matrices intéressant, les fibroblastes, les kératinocytes et les co-cultures produites dérivées de cellules (MDP) de la composition et de la morphologie variable. MDP pourrait être utilisé comme «bio-échafauds» pour l&#39;ensemencement des cellules secondaire, où l&#39;utilisation actuelle des revêtements ou échafauds, généralement à partir de sources animales xénogéniques, peut être évité, déplaçant ainsi vers plus cliniquement pertinente des applications. En outre, ce protocole décrit l&#39;application de MMC pendant la phase immergée d&#39;une peau modèle 3D organotypique co-culture qui était suffisant pour améliorer le dépôt de l&#39;ECM dans la jonction dermo-épidermique (JDE), en particulier le collagène VII, le composant majeur des fibrilles d&#39;ancrage. La microscopie électronique a confirmé la présence de fibrilles d&#39;ancrage sur des cultures développées avec MMC, par rapport aux témoins. Cela est important car fibrilles d&#39;ancrage d&#39;attache du derme à l&#39;épiderme, par conséquent,ayant une maturité DEJ préformé peut bénéficier receveurs de greffe de la peau en termes de stabilité du greffon et la guérison globale de la plaie. En outre, le temps de la culture a été condensé de 5 semaines à 3 semaines pour obtenir une construction mature, lorsque vous utilisez MMC, en réduisant les coûts.

Encombrement macromoléculaire a pu améliorer le dépôt d&#39;ECM, en particulier, les fibroblastes déposés plus de collagène I, IV et de la fibronectine par rapport aux cultures témoins (Figure 1, la couche cellulaire; 1A, le collagène I; 1B, le collagène IV, 1C, fibronectine). Sur décellularisation, il était évident que les fibroblastes étaient les principaux déposants de collagène I, IV et de la fibronectine par rapport...

Nous présentons un protocole pour obtenir des matrices dérivées de cellules riches en protéines de la matrice extracellulaire, en utilisant Crowders macromoléculaires (MMC). En outre, nous présentons un protocole qui incorpore MMC dans organotypique génération de co-culture de la peau 3D, ce qui réduit le temps de la culture tout en maintenant la maturité de la construction.

Améliorer 2D et 3D Skin<em&gt; In vitro</em&gt; Modèles utilisant macromoléculaire Crowding

The glycoprotein family of collagens represents the main structural proteins in the human body, and are key components of biomaterials used in modern ...

L'objectif général de cette procédure est d'améliorer le dépôt de la matrice extracellulaire et de perfectionner les modèles cutanés 2D et 3D actuels en utilisant le phénomène de densité macromoléculaire. Ce phénomène accélère la formation de matrices dérivées des cellules et de cultures organotypiques matures en un temps réduit. Cette méthode permet de répondre à des questions essentielles dans le domaine du génie tissulaire, car elle propose des approches améliorées pour produire des matrices extracellulaires cellulaires destinées à l'ingénierie biologique de la peau et d'autres tissus.L'avantage principal de cette technique est que les matrices dérivées de cellules et les constructions cutanées organotypiques peuvent être générées en un délai nettement plus court lorsqu'on applique le phénomène de densité macromoléculaire à ces cultures. La technique de microscopie par réflexion interférentielle permet de visualiser le dépôt total de la matrice extracellulaire sans nécessiter de marquage par anticorps. Les applications de ces techniques s'étendront des études sur le dépôt de la matrice extracellulaire par les cellules cutanées à des thérapies améliorées des plaies, notamment grâ

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JoVE Journal

Bioengineering

Bioingénierie

Dans ce rapport, nous décrivons la peau en trois dimensions de reconstruire le modèle qui imite la peau humaine dans l'architecture et la composition. La physiologie des mélanocytes, la progression du mélanome et le destin des cellules souches dermiques ont été étudiés en utilisant la peau de reconstruire le modèle. Le modèle est également utile comme outil pour l'évaluation préclinique de médicaments.

La peau Three-Dimensional Human Reconstruire Modèle: un outil pour étudier la peau normale et la progression du mélanome

Ce protocole décrit l’utilisation de l’encombrement macromoléculaire pour créer un modèle de tissu cicatriciel hypertrophique humain in vitro qui ressemble à des conditions in vivo. Lorsqu’ils sont cultivés dans un environnement macromoléculaire surpeuplé, les fibroblastes de peau humaine présentent des phénotypes, de la biochimie, de la physiologie et des caractéristiques fonctionnelles ressemblant au tissu cicatriciel.

In Vitro Model of Human Cutaneous Hypertrophic Scarring using Macromolecular Crowding

Ce protocole décrit une méthode simple pour cultiver l’épiderme humain reconstitué tridimensionnel d’une manière reproductible et robuste. En outre, il caractérise la relation structure-fonction du modèle de barrière épidermique. Les réponses biologiques de l’épiderme humain reconstitué sur des stimulus proinflammatory sont également présentées.

Cultiver un épiderme humain reconstruit tridimensionnel à grande échelle

Le but de ce protocole est de décrire la génération et l’analyse volumétrique des équivalents humains vascularisés de peau utilisant des techniques accessibles et simples pour la culture à long terme. Dans la mesure du possible, la justification des étapes est décrite pour permettre aux chercheurs de personnaliser en fonction de leurs besoins en matière de recherche.

Génération d’équivalents de peau humaine vascularisée auto-assemblés

Ici, nous présentons un protocole pour générer un modèle de peau tridimensionnel simplifié et indifférencié à l’aide d’une plate-forme microfluidique micro-usinée. Une approche à flux parallèle permet le dépôt in situ d’un compartiment dermique pour l’ensemencement de cellules épithéliales sur le dessus, le tout contrôlé par des pompes à seringues.

Génération d’un modèle tridimensionnel simplifié de peau sur puce dans une plate-forme microfluidique micro-usinée

Ici, nous présentons des procédures simples et peu coûteuses pour introduire divers modèles de peau 3D pour la recherche de routine dans un laboratoire de culture cellulaire. Les chercheurs peuvent créer des modèles adaptés à leurs besoins sans s’appuyer sur des modèles disponibles dans le commerce.

Construire des modèles de peau pour de nombreuses applications - de la monoculture bidimensionnelle (2D) à la multiculture tridimensionnelle (3D)

Visualisation des échantillons de protéines par microscopie électronique à coloration négative (EM) est devenue une méthode d'analyse structurelle populaires. Il est utile pour l'analyse structurelle quantitative, comme le calcul d'une reconstruction 3D des molécules étudiées, et aussi pour un examen qualitatif de la qualité des préparations de protéines. Dans cet article nous présentons des protocoles détaillés pour la préparation des grilles EM, la coloration de l'échantillon et la...

Visualisation protéines et de complexes macromoléculaires par EM négatif Tache: de la préparation de grille pour l&#39;acquisition d&#39;images

Ce protocole illustre des méthodes utilisées pour établir des environnements 2D et 3D dans les chambres electrotactic conçus sur mesure, qui permettent de suivre les...

Champ électrique contrôlé par les migrations des Réalisé cellules progénitrices neurales dans des environnements 2D et 3D

Aqueuses systèmes biphasiques ont été utilisés pour les populations de motif simultanément de multiples cellules. Cette méthode est simple et rapide pour un patron de cellules tire parti de la séparation de phases de solutions aqueuses de glycol de polyéthylène et de dextrane et la tension interfaciale qui existe entre les deux solutions de polymères.

La co-culture de cellules utilisant une solution aqueuse Modélisation des systèmes biphasiques

microrhéologie de traces de particules peut être utilisé pour quantifier de manière non destructive et spatialement cartographier les changements dans les propriétés mécaniques matrice extracellulaire dans des modèles de tumeurs 3D.

Mesure longitudinale de la matrice extracellulaire rigidité de tumeur modèles 3D utilisant Microrhéologie de particules de suivi

Apprenez à améliorer les modèles de peau 2D et 3D en utilisant l'encombrement macromoléculaire pour accélérer la génération de matrices dérivées de cellules et obtenir des cultures organotypiques matures plus rapidement.

Améliorer 2D et 3D Skin

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