Name: Méthode rapide et simplifié Haut Isolation Grâce-put de miARN de hautement purifiées High Density Lipoprotein (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Découvrez une méthode rapide d'isolation des lipoprotéines de haute densité purifiées à partir de plasma sanguin humain pour l'analyse des microARN. Cette technique simplifiée permet d'étudier les mécanismes moléculaires et les fonctions protectrices des HDL en hépatologie et cardiologie.

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1. Collecte des échantillons de sang <ol><li> Recueillir le jeûne des échantillons de sang veineux périphériques en 10 tubes ml en plastique contenant de l&#39;acide éthylènediaminetétraacétique anticoagulant (EDTA) (qui a plusieurs avantages par rapport à d&#39;autres anticoagulants) par ponction veineuse standard d&#39;une veine de premier plan dans le pli du coude. </li><li> Centrifuger les échantillons de sang à 1600 g pendant 20 min à 4 ° C dans une centrifugeuse de paillasse pour obtenir un plasma exempt de globules rouges et de petites quantités d&#39;ARN. </li><li> Séquentiellement centrifuger le surnageant à 3000 g (4 ° C) dans un seau rotor oscillant pendant 10 minutes pour enlever WBC et plaquettes, puis 15 minutes supplémentaires pour éliminer les débris de cellules restant respectivement. </li><li> Mesurer la densité du plasma en utilisant un densitomètre à température ambiante selon les instructions du fabricant. REMARQUE: Le réglage de la densité (d = 1,023 g / ml) avec une solution saline à 0,9% peut être nécessaire après élimination des exosomes, mais avant l&#39;ultracentrifugation en gradient de densité. </li></ol&gt; 2. Exosome Radiation de plasma <ol><li> Retirez les exosomes circulants qui ont une densité similaire à HDL et représentent une source quantitativement importante de miRNA 3. <ol><li> Pour ce faire, en ajoutant une solution exosomes de précipitation 252 pi à 1 ml de plasma suivie d&#39;une incubation pendant 30 min à 4 ° C. Pour sédimenter les exosomes, centrifuger le mélange pendant 30 minutes à 1500 g à 4 ° C. </li><li> Pour isoler HDL, transférer 1 ml du surnageant résultant à un tube d&#39;ultracentrifugation en polycarbonate à paroi épaisse pour un traitement ultérieur avec gradient de densité ultracentrifugation (voir ci-dessous). </li></ol></li></ol> 3. gradient de densité ultracentrifugation (Figure 1). <ol><li> Pour séparer HDL utiliser un processus en 3 étapes utilisant une ultracentrifugation de plancher avec un rotor à angle fixe fonctionnant à 448811 x G et 8 ° C, respectivement. </li><li> Préparer trois solutions différentes de densité séquentiellement et frais pour chaque isolement. <ol><li> Préparer la solution A (isolement de VLDL, d = 1,006 g / ml) en dissolvant 11,4 g de NaCl (NaCl: 0,195 mole), de 0,1 g EDTA2Na et 1 ml de NaOH 1 N dans 1000 ml d&#39;eau distillée autoclavée. Ensuite, ajoutez un 3 ml supplémentaires d&#39;eau autoclavée-distillée. </li><li> Préparer la solution B (isolement des LDL, d = 1,182 g / ml) par addition de 25,2 g de NaBr pour 100 ml de solution A (NaCl 0,195 mol, NaBr, 2,44 mol). </li><li> Préparer la solution C (séparation des HDL, d = 1,470 g / ml) en mélangeant 78,8 g de NaBr avec 100 ml de solution A (NaCl 0,195 mol, NaBr 7,7 mol). Confirmer la densité appropriée à la température ambiante en utilisant un densitomètre. Gardez toutes les solutions à 4 ° C jusqu&#39;à utilisation ultérieure. </li></ol></li></ol> 4. Isolement de VLDL <ol><li> Mélanger 1 ml de plasma (moyenne densité = 1,023 g / ml) et 200 ul de nuclease libre de graisse rouge 7B dans un tube d&#39;ultracentrifugation à paroi épaisse de 6,5 ml de polycarbonate. </li><li> Puis la couche avec précaution 5 ml de la solution A sur le dessus du mélange. Si nécessaire, ajoutez la graisse supplémentaire Red 7B sur le dessus de la solution A to équilibrer le poids de chaque tube. Centrifugeuse pendant 2 h (accélération - 5), (décélération - 7). NOTE: Lors de la centrifugation, les lipoprotéines sont accumulées en tant que groupe à leurs régions de densité d&#39;équilibre. </li><li> A la fin de la course d&#39;observer 2 couches. Retirer 1,5 ml de la fraction VLDL représentant la couche supérieure et conserver à 4 ° C. </li><li> Enfin, en utilisant un transfert de pipette 4 ml à partir du fond du tube contenant les LDL, HDL, de l&#39;albumine et de la fraction d&#39;acide gras dans un nouveau tube de polycarbonate pour l&#39;isolement de la LDL. </li></ol> 5. Isolement des LDL <ol><li> Mélanger 2 ml de solution B et 100 nucléase ul Fat libre Red 7B dans le tube contenant la fraction LDL et HDL (section 4), respectivement. </li><li> Puis centrifuger pour 3 heures (accélération 9, décélération 7). Par la suite, retirer 1,5 ml de la fraction LDL représente la couche supérieure et de garder à 4 ° C ou conserver à -80 ° C. Enfin, le transfert de 4 ml à partir du fond du tube contenant les HDLla fraction à un nouveau tube de polycarbonate. </li></ol> 6. Isolement du HDL <ol><li> Mélanger 2 ml de solution C, 100 ul de nuclease sans matières grasses rouge 7B et 15 ul de 98% β-mercaptoéthanol dans le tube contenant la fraction de HDL, respectivement. </li><li> Centrifugeuse pendant 3 h (accélération 9, décélération 7). retirer ensuite 2 ml de la fraction HDL représentant la couche supérieure et soit conserver à 4 ° C ou conserver à -80 ° C. </li></ol> 7. Le dessalage et concentration des fractions lipoprotéiques <ol><li> Pour éviter toute interférence avec la suite électrophorèse sur gel d&#39;agarose et PCR, enlever le sel ajouté pendant gradient de densité ultracentrifugation en utilisant des dispositifs de filtre centrifuge avec la coupure de poids moléculaire approprié (3K tube pour le VLDL et 10K tube pour le LDL / HDL) comme décrit par les instructions du fabricant excessive. <ol><li> En bref, après avoir ajouté 2,5 ml de PBS froid (NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM Na2HPO4 8, 2 mM KH2PO4; pH 7,4) centrifuge toute la fraction VLDL-recueillie pendant ultracentrifugation à gradient de densité à 4 ° C pendant 60 min en utilisant un rotor à godet oscillant. </li><li> Dessaler la fraction LDL deux fois avec 10 ml de PBS refroidi à la glace pendant 30 minutes chacune. Ensuite, utiliser 13 ml PBS glacé deux fois pour dessaler la fraction HDL. Le volume PBS plus élevé est nécessaire pour améliorer la mobilité par électrophorèse sur gel d&#39;agarose. Après centrifugation, retirer les contenant solutés de lipoprotéines et de garder à 4 ° C ou stocké à -80 ° C. </li></ol></li></ol> 8. Agarose Gel Electrophoresis <ol><li> Perfrom lipoprotéines électrophorèse sur gel d&#39;agarose en utilisant le kit avec des modifications mineures des instructions du fabricant comme suit. REMARQUE: Cette étape est juste pour évaluer la qualité et la pureté des échantillons de lipoprotéines concentrés. <ol><li> En bref, obtenir 6 pi de la fraction de lipoprotéine dessalé avec une ultracentrifugation à gradient de densité et le charger sur un gel de lipoprotéine de pré-coulée. Utilisez lipop humainenormes rotein pour VLDL, LDL et HDL comme référence de taille. Effectuer une électrophorèse à RT à 100 V pendant 60 minutes en utilisant un tampon Rep Prep. </li><li> Sécher le gel pendant 10 min, puis la coloration pendant 10 min à température ambiante avec Fat Red 7B. Destain le gel dans un mélange de méthanol-eau 75/25 (v / v) et on sèche à nouveau pendant 5 min. </li></ol></li></ol> 9. RNA Extraction et purification <ol><li> Perfrom isolement de miARN par HDL humain purifié en utilisant le kit sérum / plasma isolement miARN et purification. <ol><li> En bref, ajouter 1 ml d&#39;ARN réactif de lyse à 200 pi de HDL purifiée, mélanger avec un vortex puis incubé pendant 5 min à température ambiante pour assurer la dissociation complète des complexes de nucléoprotéine et l&#39;inactivation de RNases. </li><li> Puis pic de 3,5 pi de Caenorhabditis elegans synthétique microARN (cel-miR-39, 1,6 x 10 8 copies / ul) dans le mélange. Puis procéder à l&#39;extraction d&#39;ARN selon les instructions du fabricant. </li></ol></li><li> Effectuer Purificatisur des extraits-miARN avec des colonnes de spin éluées selon les instructions du fabricant. Mesurer la concentration de miARN de HDL purifiée avec un spectrophorometer. NOTE: Elution de miRNA des colonnes de centrifugation utilisé 16 pi d&#39;eau sans RNase. </li></ol> 10. Transcription inverse (RT-PCR) <ol><li> Isolât 100 ng du miARN des HDL dopés avec des miARN synthétique (cel-miR-39) et une transcription inverse dans un volume réactionnel de 20 ul en utilisant le kit de transcription inverse et selon les instructions du fabricant. </li><li> Effectuer des contrôles appropriés sans modèle miRNA (NTC) et sans mélange inverse transcriptase enzyme (NRT). </li></ol> 11. PCR en temps réel (qRT-PCR) <ol><li> Perfrom PCR en temps réel dans un volume total de 20 pi avec 2 ul d&#39;une dilution 1: 2 de l&#39;ADNc, 10 pi de mélange de PCR, 2 pi amorce universelle, 2 ul d&#39;amorces miARN et de l&#39;eau libre de RNase-4 pl. </li><li> Exécutez les reactidans des plaques à 96 puits à 95 ° C pendant 15 min, puis 45 cycles de 94 ° C pendant 15 secondes et 55 ° C pendant 30 secondes et une phase d&#39;élongation à 70 ° C pendant 30 s.ec perfrom toutes les réactions en triple exemplaire . </li><li> Ensuite, les quantités relatives Calcuate de miARN en utilisant la méthode -ΔΔ Ct 2 après la normalisation du gène de ménage synthétique selon les instructions du fabricant. </li></ol>

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<li>Francesco, M., Paola, D. C., Anna, T., Jesper, T., Sergio, A., Riccardo, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalization+of+circulating+microRNA+expression+data+obtained+by+quantitative+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Brief+Bioinform%22%5BJournal%5D)">Normalization of circulating microRNA expression data obtained by quantitative real-time RT-PCR.</a> Brief Bioinform. 3, 1-9 (2015).</li>
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</ol>

Les auteurs n&#39;ont rien à dévoiler.

Identification de nouveaux marqueurs biologiques du sang aider au diagnostic clinique et le pronostic de différentes maladies. Les microARN ont connu pour posséder toutes les qualités de biomarqueurs et ont été montrés dans diverses études 14-17. Dans cette étude, nous avons démontré méthode facile simple et rapide pour isoler miRNA de HDL plasmatique. Gradient de densité conventionnel procédé d&#39; ultracentrifugation d&#39;isolement de VLDL, LDL et HDL dépend de l&#39; échantillonnage précis du plasma, une...

Les microARN sont des espèces endogènes de minuscules ARN non codants qui sont hautement conservées et sont considérées comme des acteurs clés dans la régulation de divers processus biologiques en dégradant ou en réprimant des ARN messagers cibles spécifiques1. Parce que les miARN agissent intracellulairement, ils ont été explorés en tant que biomarqueurs dérivés de tissus, ce qui a conduit à la découverte de fonctions spécifiques aux tissus de ces miARN. Cependant, les miARN se trouvent également de manière extracellulaire, soit associés à des protéines, soit dans des exosomes/microvésicules qui peuvent efficacement les protéger de la dégradation par les RNases extracellulaires2. Des études plus récentes ont montré que l’effet protecteur du HDL n’est peut-être pas étroitement lié à sa capacité à favoriser l’efflux de cholestérol, mais plutôt à sa cargaison de non-cholestérol, en particulier en tant que porteur de miARN circulants 3, 4. Ces miARN peuvent non seulement moduler le métabolisme des lipides, mais sont également associés à des effets anti-inflammatoires, antioxydants et antithrombotiques du complexe HDL-miARN 5, 6.
Pour explorer davantage le rôle des miARN transportés dans les particules de HDL, un protocole simple et facile doit être établi pour l’extraction de miARN à partir de HDL hautement purifiés isolés pour une utilisation en routine clinique. De nombreuses méthodes ont été décrites pour isoler le HDL. Ces méthodes prennent soit beaucoup de temps, soit nécessitent un grand volume de plasma qui peut nécessiter un regroupement d’échantillons, une dialyse extensive pour dessaler les lipoprotéines isolées et elles n’éliminent pas complètement les exosomes en tant que source de miARN3, respectivement. Nous décrivons ici une méthode simple et rapide qui permet d’isoler les miARN à partir de HDL hautement purifiés en utilisant un petit volume d’échantillons de sang à plus grande échelle. Nous pensons que cette méthode peut servir de bonne référence pour promouvoir la recherche sur le rôle des miARN circulants et en particulier le rôle des HDL dans la facilitation de la communication entre les différentes cellules et organes.

<table><tbody><tr><td>Tubes en plastique Vacutainer Lavender K2EDTA&nbsp ;</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>366643</td><td></td></tr><tr><td>centrifugeuse</td><td>Thermo Scientific, Sorvall Legend X1R&nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>75004261 Densitomètre Densito 30PX</td><td>Mettler Toledo</td><td>MT51324450</td><td></td></tr><tr><td>solution ExoQuick</td><td>Invitrogen</td><td>4484451</td><td></td></tr><tr><td>Tube d’ultracentrifugeuse à paroi épaisse en polycarbonate</td><td>Thermo Scientific</td><td>O3237</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall WX100 ultracentrifugeuse&nbsp ;</td><td>Thermo Scientific</td><td>46902</td><td></td></tr><tr><td>Fat Red 7B&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>201618</td><td></td></tr><tr><td>&beta ;-mercaptoéthanol&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amicon Ultra-15 Dispositifs de filtration centrifuge 10K</td><td>Millipore</td><td>UFC901008</td><td></td></tr><tr><td>Appareils de filtration ultra-centrifuges Amicon 3K</td><td>Millipore</td><td>UFC800308</td><td></td></tr><tr><td>QuickGel Lipo kit&nbsp ;</td><td>Laboratoires Helena&nbsp ;</td><td>3344,3544T</td><td></td></tr><tr><td>Normes de lipoprotéines humaines pour VLDL, LDL et HDL</td><td>LipoTrol ; Helena Laboratories</td><td>5069</td><td></td></tr><tr><td>Tampon de préparation de représentants&nbsp ;</td><td>Laboratoires Helena&nbsp ;</td><td>3100</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy MinElute spin colonnes&nbsp ;</td><td>Qiagen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 1000 analyseur</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>miScript II RT Kit&nbsp ;</td><td></td> Système de détection PCR en temps réel <td>Qiagen</td> 218161 <td></td></tr><tr><td>CFX96 Touch</td><td>BioRad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>miRNeasy Kit Sérum/Plasma</td><td>QIAGEN</td><td>217184</td><td></td></tr><tr><td>Tests d’amorce miScript</td><td>QIAGEN</td><td>141078139</td><td></td></tr><tr><td>kit PCR vert miScript</td><td>QIAGEN</td><td>218073</td><td></td></tr><tr><td>miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control</td><td>QIAGEN</td><td>219610</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td></td><td></td></tr> 480878 <tr><td>0.20 &#181 ; Filtre à seringue stérile</td><td>M SIGMA-ALDRICH</td><td>Z227536</td><td></td></tr></tbody></table>

méthode rapide et simplifié haut isolation grâce-put de miarn de hautement purifiées high density lipoprotein

Fast and Simplified Method for High Through-put Isolation of miRNA from Highly Purified High Density Lipoprotein

Les petits ARN non codants (miARN) ont été impliqués dans diverses maladies humaines, y compris les syndromes métaboliques. Ils peuvent être utilisés comme biomarqueurs pour le diagnostic et le pronostic ou peuvent servir de cibles pour le développement de médicaments, respectivement. Récemment, il a été démontré que les miARN sont transportés dans les lipoprotéines, en particulier les lipoprotéines de haute densité (HDL), et sont délivrés aux cellules réceptrices pour être absorbés. Cela soulève la possibilité que les miARN jouent un rôle essentiel et central dans le fonctionnement cellulaire et organique via la régulation de l’expression des gènes ainsi que le messager des communications cellule-cellule et la diaphonie entre les organes. Les méthodes actuelles d’isolement des miARN à partir de HDL purifié ne sont pas pratiques lorsqu’elles utilisent de petits échantillons à grande échelle. Cela est dû en grande partie aux méthodes longues et laborieuses utilisées pour l’isolement des lipoprotéines. Nous avons développé une approche simplifiée pour isoler rapidement les HDL purifiés adaptés à l’analyse des miARN à partir d’échantillons de plasma. Cette méthode devrait faciliter l’étude du rôle des miARN dans la santé et la maladie et en particulier fournir de nouvelles informations sur la variété des fonctions biologiques, en dehors du transport inverse du cholestérol, qui ont été attribuées aux HDL. De plus, les espèces de miARN présentes dans le HDL peuvent fournir des informations précieuses sur les biomarqueurs cliniques pour le diagnostic de diverses maladies.

Isolement de lipoprotéines de haute densité après suppression des exosomes Pour obtenir miRNA de HDL hautement purifié , il est nécessaire d&#39;enlever les exosomes qui représentent une source de contamination miRNA 7. Ceci a été réalisé avant l&#39;ultracentrifugation en gradient de densité avec un kit disponible dans le commerce. Pour des raisons pratiques un protocole standard d&#39;ultracentrifugation à gradient de...

Les microARN jouent un rôle régulateur important et sont en train de devenir de nouvelles cibles thérapeutiques pour diverses maladies humaines. Il a été montré que les miARN sont transportés dans des lipoprotéines à haute densité. Nous avons mis au point une méthode simplifiée pour isoler rapidement les HDL purifiée convenant pour l&#39;analyse des miARN du plasma humain.

Méthode rapide et simplifié Haut Isolation Grâce-put de miARN de hautement purifiées High Density Lipoprotein

Small non-coding RNAs (miRNAs) have been implicated in a variety of human diseases including metabolic syndromes. They may be utilized as biomarkers for ...

L'objectif général de cette méthode est de développer une approche simplifiée permettant d'isoler rapidement des lipoprotéines de haute densité purifiées à partir du plasma sanguin humain pour l'analyse des microARN. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés en hépatologie et en cardiologie, notamment en permettant de comprendre les mécanismes moléculaires et les fonctions protectrices des lipoprotéines de haute densité. Parmi les principaux avantages de cette technique, on note que les microARN des HDL purifiés sont préalablement isolés à partir de volumes d'échantillons réduits et en un temps court.Dans ce protocole, le plasma est obtenu à partir d'échantillons de sang veineux périphérique à jeun par plusieurs étapes de centrifugation, comme décrit dans le texte du protocole. Transférez le plasma dans un nouveau tube. Et mesurez la densité du plasma à l'aide d'un densitomètre à température ambiante, conformément aux instructions du fabricant.Pour éliminer les exosomes circulants qui représentent une source de contamination par l'ARN micro, ajouter 252 microlitres de solution de précipitation des exosomes à un millilitre de plasma. Et incuber pendant 30 minutes à qu

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Biologie

Nous décrivons ici une inversion optimisé multiplexe transcriptase PCR quantitative (qRT-PCR) en combinaison avec le protocole d'une plateforme microfluidique comme un coût et le temps moyen efficace de dépistage à haut débit pour microARN (miARN) les niveaux d'expression, surtout quand on travaille avec des quantités limitées de l'échantillon.

Haute profilage de microARN Débit: Multiplex Optimisé qRT-PCR à l&#39;échelle nanolitres sur l&#39;IFC de Fluidigm ArrayTM dynamique

Cette vidéo décrit l’extraction de microARN circulants à partir d’échantillons plasmatiques de patients atteints de cancer colorectal à l’aide d’une extraction organique suivie d’un enrichissement en colonne de fibre de verre. Les miARN sont stables dans les fluides biologiques tels que le sérum et le plasma, ce qui en fait des biomarqueurs circulants idéaux pour le diagnostic du cancer, le pronostic, la prise de décision et le suivi du traitement. Cette méthode permettra d’identifier de...

Extraction de miARN circulants : une méthode pour isoler des miARN à partir d’échantillons de plasma par extraction organique et enrichissement de petits ARN

La présence de microARN (miARN stables) dans exosomes a généré un immense intérêt comme un nouveau mode de communication intercellulaire, pour leur utilité potentielle en tant que biomarqueurs et comme une voie pour l'intervention thérapeutique. Ici, nous démontrons purification d'exosomes à partir de supports de sang et de culture, suivie par PCR quantitative pour identifier les miARN transportés.

Purification et profilage de microARN des exosomes dérivés du sang et de la culture des médias

Ce protocole décrit un procédé d'extraction de petits ARN à partir de sérum humain. Nous avons utilisé cette méthode pour isoler les micro-ARN à partir de sérum de cancer destiné à être utilisé dans les puces à ADN et PCR quantitative singleplex également. Le protocole utilise le phénol et du thiocyanate de guanidinium réactifs avec des modifications pour donner l'ARN de haute qualité.

Isolation des petits ARN non codant de sérum humain

Les microARN (miARN) sont une classe de molécules régulatrices largement conservée. Nous décrivons ici une méthode de clonage de miARN qui repose sur deux étapes de ligature puissantes suivies d’un séquençage à haut débit. Notre méthode permet une quantification précise des miARN à l’échelle du génome.

La ligature très efficace de petites molécules d&#39;ARN pour microARN quantification par séquençage à haut débit

Le liquide biliaire est une source précieuse de vésicules/exosomes extracellulaires qui contiennent des biomarqueurs potentiellement importants. Ce protocole représente une méthode robuste pour isoler les exosomes de la bile humaine en vue d’analyses plus approfondies, y compris le profilage des miARN.

L&#39;isolement et le profilage des exosomes de Bile humain contenant microARN-

Ce protocole décrit l’isolement et la quantification des petits ARN des lipoprotéines de haute densité.

Isolement de lipoprotéines de haute densité pour les non-codant petit ARN Quantification

Ce protocole établit une nouvelle méthode d’isolement de gouttelettes lipidiques et la purification du foie de souris, à l’aide d’un kit d’isolation bien établie du réticulum endoplasmique.

Protocole d’isolement de gouttelettes lipidiques rapide à l’aide d’un Kit d’Isolation des organites bien établie

Ici, un protocole quantitatif en temps réel basé sur la réaction en chaîne de la polymérase est présenté pour la détermination de la teneur en micro-ARN native (absolue/relative) des particules de lipoprotéines. En outre, une méthode pour augmenter le niveau de micro-ARN, ainsi qu’une méthode pour déterminer le taux d’absorption cellulaire des particules de lipoprotéines, est démontrée.

Enrichissement de particules de lipoprotéines indigènes avec microRNA et détermination subséquente de leur teneur absolue/relative de microRNA et de leur taux de transfert cellulaire

Ici, nous décrivons une stratégie étape par étape pour isoler les petits ARN, enrichir les microARN et préparer des échantillons pour le séquençage à haut débit. Nous décrivons ensuite comment traiter les lectures de séquences et les aligner sur les microARN, à l'aide d'outils open source.

Un pipeline complet pour isoler et séquencer les microARN et les analyser à l'aide d'outils Open Source

Plusieurs méthodes ont été utilisées pour analyser les lipoprotéines plasmatiques; cependant, l’ultracentrifugation reste l’une des méthodes les plus populaires et fiables. Ici, nous décrivons une méthode concernant la façon d’isoler les lipoprotéines du plasma en utilisant l’ultracentrifugation séquentielle de densité et comment analyser les apolipoprotéines à des fins diagnostiques et de recherche.

Isolement et analyse des lipoprotéines plasmatiques par ultracentrifugation

Découvrez une méthode rapide d'isolation des lipoprotéines de haute densité purifiées à partir de plasma sanguin humain pour l'analyse des microARN. Cette technique simplifiée permet d'étudier les mécanismes moléculaires et les fonctions protectrices des HDL en hépatologie et cardiologie.

Méthode rapide et simplifié Haut Isolation Grâce-put de miARN de hautement purifiées High Density Lipoprotein

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