Name: Une méthode disolement cellulaire ciblée via verre fonctionnalisation de surface (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-20T08:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 40 s
Description: Découvrez une méthode d'isolement cellulaire par fonctionnalisation de surface au verre utilisant desthiobiotine et streptavidine. Cette technique personnalisable permet la capture et libération réversibles de cellules pour étudier l'angiogenèse tumorale et la résistance aux médicaments.

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Nous tenons à remercier l’American Cancer Society, Illinois Division (282802) et la National Science Foundation CBET (1512598) pour leur soutien financier. Nous tenons également à remercier le Dr Dianwen Zhang de l’Institut Beckman de l’Université de l’Illinois pour sa formation en microscopie. Enfin, nous tenons à remercier Jared Weddell, Stacie Chen et Spencer Mamer pour leurs discussions instructives.

<ol><li>Erdbruegger, U., Haubitz, M., Woywodt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+endothelial+cells%3A+a+novel+marker+of+endothelial+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Circulating endothelial cells: a novel marker of endothelial damage.</a> Clin. Chim. Acta. 373 (1-2), 17-26 (2006).</li>
<li>De Spiegelaere, W., Cornillie, P., Van Poucke, M., Peelman, L., Burvenich, C., Van den Broeck, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+mRNA+expression+analysis+in+kidney+glomeruli+using+microdissection+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Histol.+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Quantitative mRNA expression analysis in kidney glomeruli using microdissection techniques.</a> Histol. Histopathol. 26 (2), 267-275 (2011).</li>
<li>Chen, S., Guo, X., Imarenezor, O., Imoukhuede, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+VEGFRs%2C+NRP1%2C+and+PDGFRs+on+Endothelial+Cells+and+Fibroblasts+Reveals+Serum%2C+Intra-Family+Ligand%2C+and+Cross-Family+Ligand+Regulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Quantification of VEGFRs, NRP1, and PDGFRs on Endothelial Cells and Fibroblasts Reveals Serum, Intra-Family Ligand, and Cross-Family Ligand Regulation.</a> Cell. Mol. Bioeng. 8 (3), 383-403 (2015).</li>
<li>Cheung, L. S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detachment+of+captured+cancer+cells+under+flow+acceleration+in+a+bio-functionalized+microchannel%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Detachment of captured cancer cells under flow acceleration in a bio-functionalized microchannel.</a> Lab Chip. 9 (12), 1721-1731 (2009).</li>
<li>Privorotskaya, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+thermal+lysis+of+cells+using+silicon-diamond+microcantilever+heaters%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Rapid thermal lysis of cells using silicon-diamond microcantilever heaters.</a> Lab Chip. 10 (9), 1135-1141 (2010).</li>
<li>Park, K., Akin, D., Bashir, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+capture+and+lysis+of+vaccinia+virus+particles+using+silicon+nano-scale+probe+array%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Microdevices%22%5BJournal%5D)">Electrical capture and lysis of vaccinia virus particles using silicon nano-scale probe array.</a> Biomed. Microdevices. 9 (6), 877-883 (2007).</li>
<li>Galletti, G., Sung, M., Vahdat, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+breast+cancer+and+gastric+cancer+circulating+tumor+cells+by+use+of+an+anti+HER2-based+microfluidic+device%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Isolation of breast cancer and gastric cancer circulating tumor cells by use of an anti HER2-based microfluidic device.</a> Lab Chip. 14 (1), 147-156 (2014).</li>
<li>Schudel, B. R., Choi, C. J., Cunningham, B. T., Kenis, P. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+chip+for+combinatorial+mixing+and+screening+of+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Microfluidic chip for combinatorial mixing and screening of assays.</a> Lab Chip. 9 (12), 1676-1680 (2009).</li>
<li>Lien, K. Y., Chuang, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+isolation+and+detection+of+cancer+cells+by+utilizing+integrated+microfluidic+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Rapid isolation and detection of cancer cells by utilizing integrated microfluidic systems.</a> Lab Chip. 10 (21), 2875-2886 (2010).</li>
<li>Stott, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+circulating+tumor+cells+using+a%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Isolation of circulating tumor cells using a.</a> PNAS. 107 (35), 18392-18397 (2010).</li>
<li>Yu, M., Ting, D., Stott, S., Wittner, B., Ozsolak, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+sequencing+of+pancreatic+circulating+tumour+cells+implicates+WNT+signalling+in+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">RNA sequencing of pancreatic circulating tumour cells implicates WNT signalling in metastasis.</a> Nature. 487 (7408), 510-513 (2012).</li>
<li>Sheng, W., Ogunwobi, O., Chen, T., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%3ECapture%2C+release+and+culture+of+circulating+tumor+cells+from+pancreatic+cancer+patients+using+an+enhanced+mixing+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">>Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip.</a> Lab Chip. 14 (1), 89-98 (2014).</li>
<li>Zheng, X., Cheung, L. S. L., Schroeder, J. A., Jiang, L., Zohar, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-performance+microsystem+for+isolating+circulating+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A high-performance microsystem for isolating circulating tumor cells.</a> Lab Chip. 11 (19), 3269-3276 (2011).</li>
<li>Imoukhuede, P. I., Popel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+and+cell-to-cell+variation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Quantification and cell-to-cell variation of vascular endothelial growth factor receptors.</a> Exp. Cell Res. 317 (7), 955-965 (2011).</li>
<li>Imoukhuede, P. I., Popel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+VEGF+receptors+on+endothelial+cells+in+mouse+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Expression of VEGF receptors on endothelial cells in mouse skeletal muscle.</a> PLoS One. 7 (9), e44791(2012).</li>
<li>Ludwig, A., Kretzmer, G., Schügerl, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+a+%26%2334%3Bcritical+shear+stress+level%26%2334%3B+applied+to+adherent+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Enzyme+Microb.+Technol%22%5BJournal%5D)">Determination of a &#34;critical shear stress level&#34; applied to adherent mammalian cells.</a> Enzyme Microb. Technol. 14 (3), 209-213 (1992).</li>
<li>Ansari, A., Lee-Montiel, F. T., Amos, J., Imoukhuede, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secondary+anchor+targeted+cell+release%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Secondary anchor targeted cell release.</a> Biotechnol. Bioeng. 112 (11), 2214-2227 (2015).</li>
<li>Drenan, R. M., Nashmi, R., Imoukhuede, P., Just, H., McKinney, S., Lester, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcellular+trafficking%2C+pentameric+assembly%2C+and+subunit+stoichiometry+of+neuronal+nicotinic+acetylcholine+receptors+containing+fluorescently+labeled+alpha6+and+beta3+subunits%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Subcellular trafficking, pentameric assembly, and subunit stoichiometry of neuronal nicotinic acetylcholine receptors containing fluorescently labeled alpha6 and beta3 subunits.</a> Mol. Pharmacol. 73 (1), 27-41 (2008).</li>
<li>Imoukhuede, P. I., Dokun, A. O., Annex, B. H., Popel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell-by-cell+profiling+reveals+temporal+dynamics+of+VEGFR1+and+VEGFR2+membrane-localization+following+murine+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Hear.+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell-by-cell profiling reveals temporal dynamics of VEGFR1 and VEGFR2 membrane-localization following murine hindlimb ischemia.</a> Am J Physiol Hear. Circ Physiol. 4 (8), H1085-H1093 (2013).</li>
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<li>Wilchek, M., Bayer, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+Avidin-Biotin+Technology%3A+Literature+Survey%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Applications of Avidin-Biotin Technology: Literature Survey.</a> Methods Enzymol. 152 (1), 183-189 (1987).</li>
<li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunofluorescent+labeling+of+cancer+marker+Her2+and+other+cellular+targets+with+semiconductor+quantum+dots%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Immunofluorescent labeling of cancer marker Her2 and other cellular targets with semiconductor quantum dots.</a> Nat. Biotechnol. 21 (1), 41-46 (2002).</li>
<li>Lee-Montiel, F. T., Imoukhuede, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+quantum+dot+calibration+standards+for+quantitative+fluorescent+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mater.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Engineering quantum dot calibration standards for quantitative fluorescent profiling.</a> J. Mater. Chem. B. 1, 6434(2013).</li>
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<li>Naranbhai, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+blood+processing+variations+on+natural+killer+cell+frequency%2C+activation%2C+chemokine+receptor+expression+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Impact of blood processing variations on natural killer cell frequency, activation, chemokine receptor expression and function.</a> J. Immunol. Methods. 366 (1-2), 28-35 (2011).</li>
<li>Yadav, A. R., Sriram, R., Carter, J. A., Miller, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+solution-phase+and+vapor-phase+deposition+of+aminosilanes+on+silicon+dioxide+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Mater.+Sci.+Eng.+C%22%5BJournal%5D)">Comparative study of solution-phase and vapor-phase deposition of aminosilanes on silicon dioxide surfaces.</a> Mater. Sci. Eng. C. 35 (1), 283-290 (2014).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

L&#39; amélioration des techniques d&#39;isolement cellulaire favorise d&#39; études scientifiques dans les relations structure-fonction en neurosciences 18, la tige de programmation de cellules en biologie régénérative, et la signalisation angiogénique en biologie vasculaire 19. En effet, la culture de cellules primaires 20 (par exemple, les HUVEC) dans la biologie vasculaire se fait principalement par l&#39;utilisation de techniques d&#39;isolement des cellules. L&#39; isoleme...

Paillasse Les approches actuelles de séparation cellulaire (par exemple, cellules activées par fluorescence de tri 1, capture laser micro-dissection 2, immuno-bille magnétique séparation 1) peut prendre plusieurs heures de préparation et de tri. Ces grandes échelles de temps peuvent influer sur les niveaux d&#39;intervention et d&#39; expression physiologiques, résultant dans les analyses qui ne sont pas représentatifs de la réponse physiologique 3. Les systèmes sont nécessaires qui peuvent rapidement et efficacement isoler des types cellulaires spécifiques sans perturber le récepteur des niveaux de surface cellulaire afin d&#39;améliorer l&#39;isolement cellulaire et d&#39;enrichissement pour des applications biomédicales. Par conséquent, la justification de notre approche est de développer une approche douce pour l&#39;isolement cellulaire. Le &quot;laboratoire sur puce&quot; concept offre la promesse d&#39;ordres de grandeur plus rapide (heures à minutes) l&#39;isolement cellulaire, et implique le plus souvent la capture des cellules sur une surface et de libérer des cellules ou intracellulaire contents par le biais physique 4,5 ou des méthodes chimiques 6. Bien que ces approches offrent quelques avantages tels que l&#39; identification expression de protéines de 7,8, en identifiant l&#39; expression de l&#39; ARN 9-11, ou même fournir des cellules de culture in vitro 12,13, bon nombre de ces techniques ne peuvent pas être traduits à des diagnostics tels que le profilage de récepteur des cellules due à leurs environnements non-physiologiques. Agents de levage Enzymatic tels que les collagénases peuvent également affecter ces quantités de récepteurs 14,15, ce qui signifie des techniques de quantification du récepteur des cellules qui utilisent ces agents de levage ne ​​génère pas des données physiologiques précises. La lyse cellulaire prévient la différenciation entre les récepteurs de la surface d&#39; origine, et celles qui ont déjà été internalisée 16. Ce protocole décrit une approche rapide et douce pour l&#39;isolement cellulaire.

<table><tbody><tr><td>(3-Aminopropyl)triéthoxysilane (APTES)</td><td>Acros Organics</td><td>919-30-2</td><td>Utilisé pour fabriquer une solution APTES à 2 %</td></tr><tr><td>Nettoyeur plasma Pico</td><td>Diener</td><td>Modèle 1</td><td>Nettoie les surfaces et permet de lier le PDMS au verre</td></tr><tr><td>d-Desthiobiotin (DSB)</td><td>Sigma</td><td>D20655</td><td>Utilisé comme mécanisme de libération dans la surface de capture cellulaire.&nbsp ;</td></tr><tr><td>diméthylsulfoxyde (DMSO)</td><td>British Drug Houses (BDH)</td><td>BDH1115-1LP</td><td>Dissout le DSB dans une solution</td></tr><tr><td>de 1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide (EDC)</td><td>Thermo-Scientific</td><td>5g : 22980 25g : 22981</td><td>Active les acides carboxyliques et permet la liaison des protéines à la surface du verre.</td></tr><tr><td>lame de culture non traitée à 8 puits</td><td>BD Falcon</td><td>Cas de 24 : 354118 Cas de 96 : 354108</td><td>Utilisé dans des expériences cellulaires impliquant un microscope à fluorescence Zeiss, telles que des expériences de capture initiale et de quantification</td></tr><tr><td>de libération Plaques à fond de verre à 24 puits</td><td>MatTek</td><td>P24G-0-13-F</td><td>Utilisé dans des expériences cellulaires impliquant le lecteur de plaques, telles que les expériences d’anticorps et de titrage cellulaire</td></tr><tr><td>Mercaptoethanol</td><td>Science Lab</td><td>60-24-2</td><td>Utilisé pour éteindre la réaction entre l’EDC et le DSB</td></tr><tr><td>Acide 4-morpholinoéthanesulfonique hydraté (MES hydraté à 99 %)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC172590250</td><td>Utilisé pour fabriquer un tampon MES de 0,1 M à utiliser dans la réaction EDC</td></tr><tr><td>Four de précision</td><td>Thermo Scientific</td><td>11-475-153</td><td>Utilisé dans le durcissement de la couche PDMS et APTES.</td></tr><tr><td>Titramax 1000 Shaker</td><td>Heidolph</td><td>13-889-420</td><td>Utilisé pour assurer une répartition uniforme de l’APTES sur les surfaces.</td></tr><tr><td>1x Streptavidine 5 mg [e7105-5mg]</td><td>Proteo Chem</td><td>9013-20-1</td><td>Protéine de liaison à la biotine. Peut provoquer une irritation.</td></tr><tr><td>Plat en verre de 5 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>08748A</td><td>Utilisé dans les études HUVEC ainsi que dans les futures études de profilage.</td></tr><tr><td>Boîte de Pétri de 14 cm avec couvercle</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z717231</td><td>Utilisée pour contenir les échantillons en cours de fonctionnalisation et les transporter.</td></tr><tr><td>Cellules MCF7-GFP</td><td>Cell Biolabs</td><td>AKR211</td><td>Stocké dans de l’azote liquide</td></tr><tr><td>Macrophages de souris RAW264.7</td><td>ATCC</td><td>TIB-71</td><td>Nous a été offert par le laboratoire Smith de l’Université de l’Illinois. Stocké dans de l’azote liquide.</td></tr><tr><td>TrypLE</td><td>Life Technologies</td><td>12605036</td><td>Conservé dans 100 ml à température ambiante</td></tr><tr><td>Dulbecco' s modified Eagle</td><td>medium Cell Media Facility à l’École des sciences chimiques de l’UIUC</td><td>50003PC</td><td>Fournisseur : Corning</td></tr><tr><td>Acides aminés non essentiels</td><td>Cell Media Facility de l’École des sciences chimiques de l’UIUC</td><td>25-025-CI</td><td>Déjà ajouté au DMEM par l’installation. Fournisseur : Corning.</td></tr><tr><td>Grattoir cellulaire</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-58</td><td>Petit 23 cm 50 paquet</td></tr> Solution de <tr><td>dissociation cellulaire</td><td>Corning</td><td>MT-25-056CI</td><td>Utilisé pour soulever des cellules de manière non enzymatique pour l’utilisation dans des expériences cellulaires</td></tr><tr><td>Hémacytomètre</td><td>Hausser</td><td>02-671-54</td><td>Utilisé pour compter les cellules pour la quantification des solutions cellulaires et capturer et libérer l’efficacité.</td></tr><tr><td>Biotine</td><td>Amresco</td><td>58-85-5</td><td>Utilisé pour libérer les cellules de la surface.</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Créé à partir de la recette</td><td>N/A</td><td>Utilisé pour maintenir les cellules en vie en suspension ainsi que pour laver les surfaces de liaison non spécifiques. Adapté de Cold Spring Harbor Protocols : In 500&nbsp ; ml, utilisez 4&nbsp ; g NaCl, 0,2&nbsp ; g KCl, 0,0402&nbsp ; g Na2PO4&#8226 ; 7H2O, 0,03 g KH2PO4 et 0,5 g de glucose. Ajouter de l’eau DI pour arriver&nbsp ; 500 ml, filtrer, puis réfrigérer.</td></tr><tr><td>Anticorps HLA-ABC</td><td>BioLegend</td><td>311402</td><td>Anticorps utilisé pour capturer les cellules MCF7gfp</td></tr><tr><td>Anticorps hIgG</td><td>BioLegend</td><td>HP6017</td><td>Anticorps utilisé pour capturer les cellules MCF7gfp</td></tr><tr><td>Cellules GFP MCF7 Cell</td><td>Biolabs</td><td>AKR-211</td><td>Lignée de cancer du sein luminal qui a été transfectée avec une protéine fluorescente verte.</td></tr><tr><td>Coniques</td><td>Thermo-Scientific</td><td>15mL : 12-565-268</td><td>50/15 ml Coniques en plastique pour le stockage des solutions et des aliquotes.</td></tr><tr><td>Rotateurs mini-tubes (mélangeur d’bout en bout)</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-450-127</td><td>Utilisé pour incuber des anticorps et mélanger d’autres solutions cellulaires afin de mélanger</td></tr><tr><td>Axiovert 200M (microscope à fluorescence)</td><td>Zeiss</td><td>N/A</td><td>Microscope à fluorescence inversée Zeiss Axiovert 200 M.</td></tr><tr><td>Colonnes de dessalage Zeba</td><td>Thermo-Scientific</td><td>PI-87770</td><td>Utilisé pour purifier les anticorps nouvellement biotinylés après l’utilisation du kit de biotinylation. Instructions fournies à l’adresse suivante : http://www.funakoshi.co.jp/data/datasheet/PCC/89894.pdf</td></tr><tr><td>EZ Link Sulfo NHS Low Weight Biotinylation</td><td>Kit Thermo-Scientific</td><td></td><td>Utilisé pour biotinyler les anticorps afin de leur permettre de s’intégrer à la surface de capture</td></tr><tr><td>Lecteur de plaques</td><td>BioTek</td><td>Synergy HTX Lecteur multimode</td><td>Utilisé pour mesurer quantitativement l’intensité fluorescente dans les expériences de titrage.</td></tr></tbody></table>

une méthode d&#39;isolement cellulaire ciblée via verre fonctionnalisation de surface

A Method of Targeted Cell Isolation via Glass Surface Functionalization

L’un des facteurs limitant l’adoption et l’avancement de la médecine personnalisée est l’incapacité à développer des outils de diagnostic permettant de sonder les nuances individuelles dans l’expression d’un patient à l’autre. Les méthodologies actuelles qui tentent de séparer les cellules pour remplir ce créneau entraînent une perturbation de l’expression physiologique, ce qui rend la technique de séparation inutile en tant qu’outil de diagnostic. Dans ce protocole, nous décrivons la fonctionnalisation et l’optimisation d’une surface pour la capture et la libération cellulaires. Cette surface fonctionnalisée intègre des anticorps biotinylés avec une surface vitrée fonctionnalisée avec un aminosilane (APTES), de la desthiobiotine et de la streptavidine. La libération cellulaire est facilitée par l’introduction de biotine, permettant la collecte et la purification des cellules capturées par la surface. Cette libération se fait par le ciblage de la fraction secondaire desthiobiotine, ce qui se traduit par un paradigme de libération beaucoup plus doux. Cette réduction des réactifs agressifs et des forces de cisaillement réduit les modifications de l’expression cellulaire. La surface fonctionnalisée capture jusqu’à 80 % des cellules dans un mélange à cellules uniques et a démontré une capture de 50 % dans un mélange à deux cellules. Les applications de cette technologie aux xénogreffes et aux études de séparation du cancer sont étudiées. Les techniques de quantification pour la vérification de surface, telles que les analyses de lecteur de plaques et d’ImageJ, sont également décrites.

En utilisant ce protocole , nous montrons la capture cellulaire (Figure 3A) et la libération de cellules (figure 3C) de cellules MCF7GFP ainsi que des contrôles de cellules vivantes (figure 4). Nous avons quantifié la capture cellulaire de 60% ​​et 80% ont été libérés (figure 3C). Lorsque nous avons étendu cette approche à un mélange de RAW 264.7 macrophages et les cellules MCF7GFP, 50% des macrophages RAW ont été captur...

Ce protocole décrit la fonctionnalisation de surface personnalisable de la desthiobiotine, de la streptavidine et du système APTES afin d’isoler des types de cellules spécifiques d’intérêt. De plus, ce manuscrit couvre les applications, l’optimisation et la vérification de ce processus.

Une méthode d&#39;isolement cellulaire ciblée via verre fonctionnalisation de surface

One of the limiting factors to the adoption and advancement of personalized medicine is the inability to develop diagnostic tools to probe individual ...

L'objectif général de ce processus de fonctionnalisation de surface en verre est de permettre la capture douce et le relâchement de cellules d'intérêt. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de l'angiogenèse tumorale, en permettant le criblage de biomarqueurs cellulaires indiquant une résistance aux médicaments. Le principal avantage de cette technique est qu'elle est entièrement personnalisable, pour pratiquement n'importe quel type cellulaire d'intérêt.À condition qu'il existe un anticorps spécifique au type cellulaire, la surface peut être adaptée pour capturer ces cellules. Bien que cette méthode puisse fournir des informations sur l'angiogenèse cancéreuse, elle peut également être appliquée à d'autres maladies, car des échantillons purifiés sont nécessaires au développement de traitements plus personnalisés. Nous avons eu l'idée de cette méthode lorsque nous tentions de développer un mécanisme de relâchement réversible pour la capture de cellules, en utilisant l'interaction entre la desthiobiotine et la famille de l'avidine.Après avoir nettoyé une surface en verre dans une machine à plasma d'oxygène pendant cinq minutes conformément au protoco

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Dans cet article, nous décrivons comment nous obtenons FRET traces de molécules individuelles d'ADN immobilisés sur une surface en utilisant un microscope confocal à balayage automatisé.

Système automatisé pour les simples mesures de fluorescence de la molécule de surface immobilisée Biomolécules

Source : Fattahi, N., et al. Interfaces hydrogel photodégradables pour le dépistage, la sélection et l’isolement des bactéries. J. Vis. Exp. (2021).Cette vidéo montre l’extraction de colonies bactériennes à partir d’un hydrogel photodégradable à l’aide de la lumière UV. Une colonie spécifique est sélectionnée et une exposition à la lumière structurée est conçue pour initier la dégradation localisée de l’hydrogel. Après avoir ajusté l’intensité et la durée de la lumière, la lumière UV est...

Isolement ciblé de colonies bactériennes à l’aide de la dégradation d’hydrogel à motifs légers

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement de cellules cancéreuses épithéliales exprimant EpCAM à partir d’échantillons de sang périphérique. La technique implique l’utilisation d’un fil de qualité médicale fonctionnalisé avec des anticorps EpCAM pour capturer les cellules cibles. Les cellules capturées sont ensuite extraites dans une solution tampon.

Isolement de cellules cibles à base de fil fonctionnalisé : une technique ex vivo pour isoler des cellules cancéreuses à partir de sang périphérique enrichi

Contact diélectrophorèse (CDEP) réalise le tri et l'enrichissement de particules par leurs propriétés diélectriques intrinsèques. Canaux d'électrodes fluidiques remplacent électrodes métalliques traditionnelles de DEP, convenant CDEP à la non-qualification endommager stérile et le tri des particules biologiques. Nous démontrons comment préparer un micro CDEP et effectuer la caractérisation des cellules et des expériences de tri.

L&#39;isolement et l&#39;enrichissement des cellules sans étiquette Grâce contact Diélectrophorèse

Les techniques traditionnelles de fabrication de polyacrylamide (PA) des gels contenant des sondes fluorescentes consistent en sandwich un gel entre une surface adhérente et une lame de verre. Ici, nous montrons que le revêtement de cette lame avec la poly-D-lysine (PDL) et des sondes fluorescentes localise les sondes à l'intérieur de 1,6 um à partir de la surface du gel.

Une nouvelle méthode pour localiser rapporteur fluorescent Perles près de la surface de culture cellulaire pour Traction Force Microscopy

Ici, nous présentons un protocole pour l’isolement et la culture de cellules uniques avec une plateforme microfluidique, qui utilise un nouveau concept de conception de micropuits pour permettre l’isolement de cellules uniques à haute efficacité et la culture clonale à long terme.

Une plate-forme microfluidique pour l&#39;isolement à haut débit unique cellule et Culture

Ce protocole est de récupérer et de préparer des cellules-cibles rares à partir d’un mélange avec des cellules non cibles fond pour la caractérisation génétique moléculaire au niveau unicellulaire. Qualité de l’ADN est égale à cellules individuelles non traitées et permet application unicellulaires (les deux dépistage basé et ciblée d’analyse).

Cible cellulaire pré-enrichissement et Whole Genome Amplification pour la cellule unique caractérisation en aval

Nous décrivons une procédure simple lithographique pour l’immobilisation des molécules d’ADN gène-longueur sur une surface, ce qui peut être utilisée pour réaliser des expériences d’expression de gène acellulaire sur biopuces.

Surface-immobilisation fonctionnelle des gènes à l’aide de la lithographie de déplacement multipas Strand

L’utilisation d’hydrogels photodégradables pour isoler les cellules bactériennes à l’aide d’un outil de tapotement de lumière à haute résolution est rapportée. Les procédures expérimentales essentielles, les résultats et les avantages du processus sont examinés. La méthode permet l’isolement rapide et peu coûteux de bactéries ciblées présentant des fonctions rares ou uniques provenant de communautés ou de populations hétérogènes.

Interfaces d’hydrogel photodégradables pour le dépistage, la sélection et l’isolement des bactéries

Nous avons adapté un insert de membrane microporeuse perméable pour imiter le microenvironnement tumoral (TME). Le modèle consiste en une culture cellulaire mixte, permet la génération simplifiée de populations cellulaires individuelles hautement enrichies sans utiliser le marquage fluorescent ou le tri cellulaire, et permet d’étudier la communication intercellulaire au sein du TME dans des conditions normales ou de stress.

A Mimic du microenvironnement de la tumeur: Une méthode simple pour générer des populations de cellules enrichies et enquête intercellulaire Communication

Découvrez une méthode d'isolement cellulaire par fonctionnalisation de surface au verre utilisant desthiobiotine et streptavidine. Cette technique personnalisable permet la capture et libération réversibles de cellules pour étudier l'angiogenèse tumorale et la résistance aux médicaments.

Une méthode d'isolement cellulaire ciblée via verre fonctionnalisation de surface

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