Modifié MicroSecure Vitrification: Une très procédure Cryoconservation sûre et efficace, simple et blastocystes humains

L’objectif global de la méthode de vitrification embryonnaire MicroSecure est de fournir une procédure de vitrification fermée aseptique sûre, sécurisée, simple mais efficace pour les embryons humains. Cette méthode a été développée pour minimiser les variables de contrôle de la qualité dans la vitrification des embryons humains, assurant ainsi un succès fiable et reproductible. Le principal avantage de cette technique est qu’elle s’efforce d’éliminer les différences techniques entre les biologistes et les laboratoires.

Notre technique est si simple à mettre en œuvre que nous trouvons que le plus grand défi pour nos stagiaires est d’apprendre à pipeter des embryons sans les perdre. L’idée derrière notre méthode était d’éliminer le besoin d’appareils spécialisés en adaptant deux articles couramment utilisés et approuvés par la FDA. Une paille de stockage ionomérique étiquetée à l’intérieur, et un flexipet stérile.

La démonstration visuelle de cette technique est extrêmement utile car elle met en évidence les conseils de base qui garantissent son application réussie. Avant de commencer la procédure, placez la paille de sperme stérile de 0,3 ml sur la surface en téflon de l’électrode d’une scelleuse à impulsion de table, juste devant le bouchon, pour créer un joint interne. Appuyez sur la poignée pour activer la chaleur, en relâchant la poignée lorsque le voyant rouge s’éteint et qu’un bip se fait entendre.

Poussez ensuite le bouchon en coton vers l’avant contre le joint intérieur avant de terminer la configuration. Pour la cryodilution et le chargement des échantillons par les blastocystes, retirer la boîte de culture du patient de l’incubateur et confirmer toutes les identifications d’échantillons auprès d’une source secondaire. Sous un stéréomicroscope, utilisez un flexipet de vitrification, appelé pointe de vit, pour déplacer les blastocystes en gouttelettes de maintien individuelles dans la rangée supérieure d’une boîte cryogénique correspondante.

Ensuite, préremplissez le flexipet avec 3 microlitres de solution V1 et versez la moitié du contenu sur le premier embryon. Aspirez l’embryon et transférez-le dans la première gouttelette de lavage V1. Ensuite, pipetez l’embryon deux à trois fois autour du périmètre de la gouttelette et nettoyez le contenu résiduel de la pipette à l’extérieur de la gouttelette sur la surface de la boîte.

Ensuite, déplacez le blastocyste dans une goutte de maintien V1 individuelle et préchargez l’embout de vit avec la solution V2 suivante avant de pipeter les embryons supplémentaires avec un nouvel embout de vit. Après avoir lavé tous les blastocystes dans les gouttelettes V2 et V3 comme nous venons de le démontrer, éliminez la solution résiduelle et les bulles de l’embout de la vit à l’extérieur de la gouttelette de maintien V3, et remplissez complètement l’embout avec une solution V3 propre autour du premier embryon. Expulsez environ 1 microlitre du volume et aspirez complètement le blastocyste et la solution V3 restante dans l’embout de la vit.

Maintenant, retirez l’embout de la pipette et utilisez un tampon de gaze stérile pour sécher la solution V3 résiduelle de la surface extérieure de l’embout de la vit. Le séchage de la surface externe de l’embout est essentiel et n’entraîne aucun risque supplémentaire de perte d’embryons. Ensuite, insérez l’extrémité de la pointe en premier dans l’extrémité ouverte de la paille pré-scellée et retournez la paille, étiquetez l’extrémité vers le bas.

Observez l’embout au niveau du bouchon intérieur. Laissez un espace d’air de 1 cm sur l’extrémité ouverte, puis soudez-le en toute sécurité. Lorsque toutes les pailles ont été scellées, plongez-les directement dans de l’azote liquide dans une fiole de Dewar en acier inoxydable et stockez les pailles dans le gobelet ouvert attaché à la canne du patient.

Pour l’élution et la dilution de la cryo-solution, placez la boîte de dilution à six puits correspondante au centre d’une platine de stéréomicroscope et une boîte de Pétri de 60 mm contenant un bain chauffant de saccharose à 37 degrés Celsius sur un côté du microscope. Ensuite, isolez la paille à réchauffer et maintenez le joint supérieur de la paille au-dessus du niveau du liquide pour confirmer l’identité de l’échantillon. Utilisez des ciseaux à mayonnaise pour fixer la paille sous le bouchon interne, afin de maintenir l’embout de la capsule immergé dans l’azote liquide.

Tapotez fermement les ciseaux contre la fiole de Dewar à plusieurs reprises pour déloger la pointe de la paroi latérale intérieure de la paille par mesure de contrôle de la qualité, et soulevez la paille dans l’air ambiant en direction horizontale à côté ou en dessous de la surface du stéréoscope. En saisissant l’extrémité non étiquetée de la paille, coupez la paille au niveau du bouchon intérieur. Soulevez ensuite la paille au-dessus du plat chauffant du bain et versez l’embout dans le bain à un angle de 60 degrés, jusqu’à ce que l’embout soit complètement extrudé.

La base du flexipet doit reposer au-dessus de la paroi latérale du plat. Après 5 à 10 secondes, transférez la base de la pipette dans un appareil de pipetage à microcapuchons. Démarrez une minuterie de cinq minutes.

Pendant que vous regardez le microscope, utilisez un index pour couvrir le trou de l’ampoule et pressez doucement l’ampoule pour libérer le blastocyste vitrifié de l’extrémité de la vit dans le lavage T1. Après avoir confirmé la libération du blastocyste, éliminez la solution résiduelle de V3 et les bulles par pression positive, en évacuant le contenu au centre d’un puits de rejet non utilisé. Transférez l’embout de la capsule sur une pipette sterber, en déplaçant l’embryon dans la deuxième gouttelette T1 sous l’huile pendant les quatre minutes restantes.

Pendant l’incubation, préremplissez le flexipet avec la solution suivante, puis diluez le blastocyste dans les gouttelettes T2, 3 et 4 à trois minutes d’intervalle. Enfin, équilibrez les blastocystes dans la gouttelette T5 pendant cinq minutes sur une surface à 37 degrés Celsius, avant de les remettre dans l’incubateur. Le système de classification des blastocystes de Gardner modifié considère que les blastocystes complets ont moins de 10 % de hernie des cellules trophectodermiques, tandis que les blastocystes avec jusqu’à 50 % de hernie sont classés comme élargis.

Les blastocystes qui présentent une hernie supérieure à 50 % sont considérés comme éclosions. En utilisant les méthodes de cryoconservation et de réchauffement éprouvées, des niveaux élevés de naissances vivantes par début de cycle ont été systématiquement atteints avec ou sans tests génétiques préimplantatoires. Bien que ces succès soient sensiblement plus élevés, en utilisant des blastocystes euploïdes présélectionnés.

En effet, en évaluant une population de patients de bon pronostic pour les seuls cycles cryoconservés, ces données de transfert d’embryons congelés démontrent de plus de 30 % de taux de réussite supérieurs à la moyenne nationale pour les taux d’implantation et de naissances vivantes. indépendamment de l’âge, ont été atteints, par rapport aux statistiques nationales récentes rapportées par le Center for Disease Control pour deux autres cliniques de fertilité très respectées, et aux données publiées par la Society for Assisted Reproductive Technologies. La vitrification MicroSecure est une nouvelle procédure aseptique développée dans un souci de facilité technique, de fiabilité et de cryosécurité. Ce système de vitrification simple et non commercial offre une alternative très efficace et peu coûteuse aux appareils de vitrification.

Depuis son développement, la méthode MicroSecure a permis d’assurer une récupération de plus de 99,9 % de l’embryon et une survie complète du blastocyste de plus de 95 %. Cela a permis de transformer notre pratique clinique dans presque tous les cycles de transfert d’embyro cryo-conservés au cours des trois dernières années. Nous avons effectivement modifié notre procédure pour inclure un joint intérieur devant le bouchon de coton des pailles de sperme ionomérique afin de produire des joints de soudure fiables et des résultats post-réchauffement exceptionnels.

Il existe aujourd’hui de nombreux systèmes de dispositifs différents utilisés dans les industries des technologies de procréation assistée, mais aucun autre dispositif n’offre la simplicité et la répétabilité technique permettant d’éliminer essentiellement les variations de l’utilisateur et d’offrir une sécurité optimisée, comme la vitrification MicroSecure.