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DOI: 10.3791/58540-v
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This article presents a morphometric protocol for monitoring blastocyst shrinkage and re-expansion during vitrification interventions and post-warming recovery. The protocol is designed for use in in vitro fertilization laboratories equipped with time-lapse microscopes.
Nous présentons ici un protocole de time-lapse morphométriques pour suivre l’intensité du rétrécissement du blastocyste et re-expansion durant les interventions de previtrification et récupération après réchauffement. L’application du protocole est possible dans les laboratoires in vitro fertilization équipés de microscopes time-lapse et est recommandée dans le développement d’une méthode de vitrification de blastocyste optimale.
Ce protocole morphométrique permet de surveiller l’intensité du rétrécissement et de la ré-expansion du blastocyste lors d’interventions antérieures de vitrification et de récupération post-réchauffement et donne un aperçu de l’efficacité des méthodes de vitrification du virus. Le principal avantage de cette technique est qu’elle peut être appliquée aux laboratoires de fécondation in vitro équipés de microscopes et d’ordinateurs en accéléré dotés d’un logiciel avancé d’édition d’images. Le cinquième ou le sixième jour de l’expansion, soumettez un blastocyste avec au moins quelques cellules de masse cellulaire interne et un trophectoderm cohésif à une impulsion laser de 0,4 à 0,7 milliseconde avec un diamètre de trou allant de 4,3 à 9,4 micromètres tangentiellement dirigés vers la zona pellucida et la jonction de deux cellules trophectodermiques adjacentes.
Ensuite, laissez le blastocoel s’effondrer complètement ou partiellement pendant cinq minutes. Ensuite, utilisez une pipette minuscule pour ajouter de façon aseptique un milieu d’équilibrage dans les trous de la zone microdroplet d’une boîte de Pétri de neuf puits, spécialement conçue pour la microscopie et l’enregistrement en accéléré. Lorsque tout le milieu a été ajouté, superposer la zone microdroplet avec environ 30 microlitres de milieu d’équilibrage.
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