Modification et fonctionnalisation du groupe Guanidine par Précurseurs sur mesure

L’objectif global de cette procédure est de fournir un accès synthétique pratique aux peptides fonctionnalisés de la guanidine. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la chimie des peptides musculaires, telles que le développement de ligands d’intégrine ou de ligands GPCR. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet un accès facile, synthétique, aux guanidines fonctionnalisées, totalement compatibles avec le SPPS.

La technologie sera particulièrement précieuse pour les molécules tactiles, car les groupes fonctionnels, qui sont modifiés, sont généralement des biomolécules qui se détériorent. Dans notre cas, nous visons des molécules qui peuvent être utilisées pour l’imagerie moléculaire des propriétés distinctes de cancers individuels et pour leur traitement spécifique ; Un enjeu important pour la médecine personnalisée. Pour commencer cette procédure spécifique, ajoutez un gramme de boc-pyrazol carboxamaidine et un gramme de PPh3 dans une fiole à fond rond de 50 millilitres.

Par la suite, ajoutez 10 millilitres de THF séché dans une fiole à fond rond de 50 millilitres sous atmosphère inerte via un septum en caoutchouc. À l’aide d’une seringue, ajoutez 194 microlitres de méthanol sec. Remuez la solution à température ambiante.

À l’aide d’une seringue, ajoutez une solution préparée d’azodicarboxylate de diisopropyle dans du THF goutte à goutte pendant 15 minutes. Ensuite, laissez la solution remuer pendant deux heures à température ambiante. À l’aide d’un évaporateur rotatif, retirez le solvant sous pression réduite.

Après cela, dissoudre le produit brut dans un millilitre de DCM. Ensuite, laissez une colonne éclair avec 100 grammes de silice, dans de l’acétate d’éthyle à 10 % dans une solution de pentane. Chargez le produit brut dissous sur la colonne et ajoutez le solvant sous pression.

Collecter, identifier et combiner les fractions comme indiqué dans le protocole textuel. Ensuite, à l’aide d’un évaporateur rotatif, évaporez le solvant sous une pression réduite pour obtenir le composé désiré sous forme d’huile jaune et visqueuse. Tout d’abord, ajoutez un gramme de boc-pyrazole carboxamidine, un gramme de PPH3 et 0,9 gramme de Dde-6-Aminohexanol dans une fiole à fond rond de 50 millilitres.

Ensuite, ajoutez 10 millilitres de THF sec dans une atmosphère inerte à l’aide d’un septum en caoutchouc. Ensuite, dissolvez les matériaux de départ à température ambiante. À l’aide d’une seringue, ajoutez une solution préparée d’azodicarboxylate de diisopropyle dans du THF goutte à goutte pendant 15 minutes.

Remuez la solution pendant deux heures à température ambiante. Après cela, utilisez un évaporateur rotatif pour éliminer le solvant sous pression réduite. Dissoudre le produit brut dans 1 millilitre de DCM.

Ensuite, chargez une colonne éclair avec 100 grammes de silice dans une solution deux à un de pentane et d’acétate d’éthyle. Chargez le produit brut dissous sur la colonne et ajoutez le solvant sous pression. Collecter, identifier et combiner les fractions comme indiqué dans le protocole textuel.

À l’aide d’un évaporateur rotatif, évaporez le solvant sous pression réduite pour obtenir le produit souhaité. Pour commencer, dissolvez 1,4 gramme de S-méthylisothiourée et 2,2 grammes de boc-anhydride dans une solution biphasique de DCM et de bicarbonate de sodium aqueux saturé. Laisser remuer le mélange pendant 24 heures à température ambiante.

Après cela, versez le mélange dans un entonnoir séparateur. Séparez les couches et extrayez la phase aqueuse trois fois avec du DCM. Ensuite, combinez les phases organiques.

Séchez les phases organiques combinées avec du sulfate de sodium. Après avoir éliminé le solvant à l’aide d’un évaporateur rotatif, dissoudre le produit brut dans 2 millilitres d’hexane. Chargez une colonne éclair avec 100 grammes de silice dans une solution à quatre pour un d’hexane et d’acétate d’éthyle.

Après cela, chargez le produit brut dissous sur la colonne et ajoutez le solvant sous pression. Après avoir collecté et identifié les fractions, combinez les fractions souhaitées. À l’aide d’un évaporateur rotatif, évaporez le solvant sous pression réduite pour obtenir 1,1 gramme de Boc-S-méthylisothiourea.

Dissoudre 250 milligrammes du Boc-S-méthylisothiourée recueilli dans 10 millilitres de DMF séché dans un flacon à fond rond de 50 millilitres dans une atmosphère inerte à température ambiante. À l’aide d’une seringue, ajoutez 440 microlitres de DIPEA. À l’aide d’une seringue, ajoutez 245 microlitres d’anhydride acétique goutte à goutte tout en remuant.

Laissez le mélange remuer pendant une heure à température ambiante. Ensuite, à l’aide d’une seringue, ajoutez deux millilitres de méthanol et remuez pendant 15 minutes. Après avoir éliminé le solvant à pression réduite, à l’aide d’un évaporateur rotatif, dissoudre le produit brut dans un millilitre de DCM.

Chargez une colonne éclair avec 60 grammes de silice dans une solution à trois pour un d’hexane et d’acétate d’éthyle. Ensuite, chargez le produit brut dissous et ajoutez le solvant sous pression. Collecter, identifier et combiner les fractions comme indiqué dans le protocole textuel.

À l’aide d’un évaporateur rotatif, évaporez le solvant sous pression réduite pour obtenir 210 milligrammes du produit désiré sous forme de solide blanc. Pour commencer, dissolvez une petite quantité du peptide cyclique orthogonalement déprotégé dans un petit volume de DMF. Ajouter deux équivalents de DIPEA.

Et deux équivalents du précurseur de la guanidinylation. Ensuite, laissez la solution remuer pendant deux heures à température ambiante. Une fois la réaction terminée, retirez le solvant.

Dissoudre à nouveau le peptide cyclique guanidinylé dans de l’acétylnitrile et effectuer une purification HPLC semi-préparative comme indiqué dans le protocole de texte. Après cela, dans une petite bouteille de verre, ajoutez une solution préparée d’acide trifluoroacétique, d’eau et de triisopropylsilane au produit purifié. Remuez ce mélange pendant une heure à température ambiante, puis observez la déprotection complète avec ESIMS.

Ajoutez 10 millilitres d’éther glacé dans un tube à centrifuger de 50 millilitres. À l’aide d’une pipette Pasteur, ajoutez le peptide déprotégé goutte à goutte à l’éther. Centrifugez la suspension à 5 000 fois g pendant cinq minutes.

Après cela, lavez le granulé avec de l’éther glacé. En centrifugeuse à 5 000 fois g pendant cinq minutes. Répétez à nouveau ce lavage et cette centrifugation.

Ensuite, dissolvez le produit dans 2 millilitres d’eau de qualité HBLC et purifiez le produit à l’aide d’une HPLC semi-préparative comme indiqué dans le protocole textuel. Dans cette étude, une méthode simple dans la modification du groupe guanidine chez les glygins peptidiques est présentée. La progression des réactions est surveillée à l’aide de la chromatographie liquide à haute pression.

Pour les résidus plus gros sur le groupe guanidine, deux heures ne suffisent souvent pas pour que la réaction se termine. Ainsi, la réaction se poursuit et les composés sont purifiés par HPLC semi-préparative. Une petite quantité est ensuite diluée avec du DMSO pour obtenir une solution de tige pour l’évaluation biologique dans un essai de liaison en phase solide de type al-ee-so-like.

Tous les composés analysés montrent une affinité relativement élevée pour le sous-type intégrant alpha v bêta trois, et une sélectivité élevée contre le sous-type intégrant alpha cinq bêta un. Nous avons eu l’idée de cette méthode pour la première fois lorsque nous cherchions une méthode standard pour la guanidinylation pendant le SPPS. Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de préparer des précurseurs de guanidinylation sur mesure, afin de modifier ou de fonctionnaliser le groupe guanidine de votre peptide cible.