Light Sheet-based Fluorescence Microscopy of Living or Fixed and Stained <em>Tribolium castaneum</em> Embryos

Frederic Strobl; Selina Klees; Ernst H. K. Stelzer

doi:10.3791/55629

Feuille à base de lumière de la vie Microscopie Fluorescence ou fixe et Stained Tribolium cas...

JoVE Journal
Developmental Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Developmental Biology

Light Sheet-based Fluorescence Microscopy of Living or Fixed and Stained Tribolium castaneum Embryos

Feuille à base de lumière de la vie Microscopie Fluorescence ou fixe et Stained Tribolium castaneum embryons

Full Text

11,180 Views

10:15 min

April 28, 2017

DOI: 10.3791/55629-v

Frederic Strobl^1,2,3, Selina Klees^1,2,3, Ernst H. K. Stelzer^1,2,3

¹Physical Biology,Buchmann Institute for Molecular Life Sciences (BMLS), ²Cluster of Excellence Frankfurt,Macromolecular Complexes, ³Goethe-Universität Frankfurt am Main – Campus Riedberg

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol details the use of light sheet-based fluorescence microscopy to observe the morphogenesis of Tribolium castaneum embryos. It compares three mounting techniques and introduces novel transgenic lines for live imaging.

Key Study Components

Area of Science

Neuroscience
Embryology
Imaging Techniques

Background

Tribolium castaneum is an emerging insect model organism.
Light sheet microscopy minimizes photobleaching and phototoxicity.
The study focuses on cell migration and proliferation during embryonic development.
Long-term noninvasive observation is crucial for developmental biology.

Purpose of Study

To observe the development of insect embryos over extended periods.
To address morphogenesis-related questions in T. castaneum.
To improve imaging techniques for better quality control.

Methods Used

Light sheet-based fluorescence microscopy.
Three mounting techniques for embryos.
Custom-made transgenic lines for enhanced imaging.
Quality control measures to assess imaging effectiveness.

Main Results

Successful long-term imaging of T. castaneum embryos.
Comparison of mounting techniques showed varying effectiveness.
Novel transgenic lines improved live imaging capabilities.
Identified limitations in current experimental approaches.

Conclusions

Light sheet microscopy is effective for studying insect embryogenesis.
Mounting techniques significantly impact imaging quality.
Future work should address current limitations in the protocol.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of light sheet microscopy?

It minimizes photobleaching and phototoxicity, allowing for long-term observation.

Why is T. castaneum a useful model organism?

It provides insights into insect development and morphogenesis.

What are the key components of the mounting techniques?

The techniques involve using agarose columns and careful embryo placement.

How does this study contribute to developmental biology?

It enhances imaging methods for studying embryonic development noninvasively.

What limitations were identified in the study?

Current experimental limitations include challenges in imaging quality and embryo handling.

What is the purpose of the custom-made transgenic lines?

They are designed to improve the quality of live imaging in embryos.

L'imagerie de la morphogenèse des embryons d'insectes avec la microscopie de fluorescence à base de feuille de lumière est devenu état de la technique. Ce protocole décrit et compare trois techniques de montage appropriées pour les embryons Tribolium castaneum, introduit deux nouvelles lignées transgéniques sur mesure bien adapté pour l' imagerie en direct, discute des contrôles de qualité essentiels et indique les limites expérimentales actuelles.

L’objectif global de ce protocole est d’observer le développement non invasif des embryons de Tribolium castaneum sur de très longues périodes. La microscopie à fluorescence à feuillet de lumière aide à répondre aux questions liées à la morphogenèse chez l’organisme modèle d’insecte émergent Tribolium castaneum en abordant les modèles de migration et de prolifération cellulaires du blastoderme précoce au début du mouvement musculaire. Le principal avantage de cette méthode est que les facteurs critiques tels que le photoblanchiment et la phototoxicité sont réduits au minimum, même lorsque les embryons sont observés pendant plusieurs jours.

Pour monter un embryon dans la chambre d’échantillonnage à l’aide d’une colonne d’agarose, remplissez d’abord une seringue d’un millimètre avec de l’eau distillée et utilisez un petit tuyau en caoutchouc pour fixer la seringue à un capillaire en verre. Remplissez le capillaire à moitié avec de l’eau distillée, puis utilisez un pinceau pour transférer un embryon sur la face interne de l’ouverture capillaire en verre, et collez le capillaire dans l’agarose liquide, en attirant lentement quelques microlitres de l’agarose avec l’embryon dans le capillaire. Lorsque l’embryon est en place, il devrait y avoir quelques microlitres d’agarose au-dessus et en dessous de l’embryon.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos

Explore More Videos

Developmental Biology No. 122 arthropodes les insectes les coléoptères Tribolium castaneum La morphogenèse l'embryogenèse la fluorescence imagerie en temps réel à long terme non-invasive la microscopie par fluorescence à base de feuille de lumière la microscopie optique en trois dimensions LSFM DSLM SPIM