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DOI: 10.3791/56187-v
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Ce protocole présente une approche pour l’analyse du transcriptome ensemble des embryons de poisson-zèbre, larves, ou trier des cellules. Nous incluons l’isolement de l’ARN, la voie analyse des données RNASeq et qRT-PCR-based validation des modifications de l’expression génique.
L’objectif global de cette analyse RNASeq dans des échantillons de larves de poisson-zèbre est d’identifier les profils d’expression génique des embryons et des larves de poisson-zèbre et de faire des déclarations comparatives quantitatives sur les changements d’expression génique entre les échantillons. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans tous les domaines pour lesquels les embryons ou les larves de poisson-zèbre sont informatifs, comme comment la suppression d’un gène ciblé entraîne des changements d’expression génique ou une perturbation de certaines voies par rapport à d’autres conditions. Le principal avantage de cette technique est que le poisson-zèbre se prête à la production d’un grand nombre d’animaux, et que les données du transcriptome de l’animal entier peuvent être facilement obtenues.
De plus, l’isolement de types cellulaires spécifiques peut être réalisé facilement en utilisant le tri des animaux transgéniques. Lain Hostelley, un étudiant diplômé, et Jessica Nesmith, une post-doctorante de mon laboratoire, feront la démonstration des procédures. Pour commencer, cultivez des embryons jusqu’à l’âge de trois mois, c’est-à-dire la maturité reproductive.
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