Une méthode colorimétrique pour mesurer la teneur en fer chez les plantes

Nous présentons un protocole simple et fiable pour mesurer la teneur en fer dans les tissus végétaux à l’aide de la méthode colorimétrique de bleu de Prusse.

Sur le plan médical, cela peut aider à répondre à une question clé dans le domaine de la biologie. Par exemple, comment pouvons-nous facilement quantifier le fer dans les échantillons de carottes de biologie. L’objectif principal de cette technique est qu’il s’agit d’une technique colorimétrique facile à produire et très précise.

Tout en préférant cette technique, vous devez éviter la contamination par le fer. Une démonstration visuelle de cette méthode vous aidera à comprendre ses différentes étapes. Pour commencer cette procédure, préparez des pots de cinq centimètres sur cinq centimètres en les remplissant d’un milieu de pot standard.

Plantez une graine de tabac dans chaque pot. Transférez les plantes dans une salle de culture à température constante, dans des conditions de longue journée de 23 degrés Celsius. Irriguez avec de l’eau du robinet jusqu’à ce que l’eau s’écoule du pot et faites pousser les plantes pendant environ 50 jours.

Après cette période, commencez les traitements au fer dans l’irrigation à des concentrations appropriées pour l’expérience. Irriguez les plantes avec cette solution tous les deux jours pendant six à huit jours. Ensuite, détachez les feuilles de la tige à la main, en veillant à ne pas utiliser d’équipement métallique.

À l’aide d’un vaporisateur rempli d’eau distillée doublement, nettoyez chaque feuille. Séchez les feuilles sur une serviette en papier, puis transférez-les dans un sac en papier. Placez les sacs remplis de feuilles dans un four, réglé à une température constante de 80 degrés Celsius, pendant deux à trois jours.

Nettoyez le mortier et le pilon deux fois, avec une solution d’acide chlorhydrique à 4 %. Et utilisez un papier filtre pour sécher. À l’aide du mortier et du pilon, écrasez les feuilles sèches en poudre.

Ensuite, transférez la poudre dans des tubes en plastique stériles de 15 millilitres. Tout d’abord, pesez un nouveau flacon à scintillation scellé de 20 millilitres sans son couvercle. Notez le poids ou tarez la balance.

Ajoutez ensuite les feuilles écrasées. Pesez l’échantillon dans le flacon et notez le poids. Utilisez de la laine de roche pour fermer le flacon.

Peser trois flacons supplémentaires sans ajouter d’échantillons, pour les utiliser comme témoins, en notant chaque poids. Ensuite, transférez l’échantillon et les flacons de contrôle dans un four. Brûlez les feuilles comme indiqué dans le protocole de texte.

Après cela, laissez les échantillons refroidir à environ 100 degrés Celsius. À l’aide de gants épais et d’une pince à épiler, retirez les échantillons du four, en vous assurant de tenir le flacon vers l’extérieur. Placez les flacons sur une surface plane.

Retirez la laine de roche et fermez les flacons avec leurs couvercles d’origine. Ensuite, pesez les trois flacons de contrôle et calculez leur gain de poids moyen. Si le gain de poids est égal ou supérieur à 1 % du poids des cendres, utilisez cette valeur comme estimation de l’erreur de mesure.

Pesez un tube en plastique de 15 millilitres. Enregistrez le poids ou tarez la balance. Transférez ensuite les cendres dans le tube.

Notez cette valeur, qui est le poids des cendres. Ensuite, ajoutez cinq millilitres de la solution molaire d’acide chlorhydrique aux cendres. Filtrez les cendres à travers un filtre de 22 micromètres.

Ajoutez ensuite cinq millilitres supplémentaires de la solution molaire d’acide chlorhydrique à travers le même filtre, ce qui permet d’obtenir un volume d’échantillon final de 10 millilitres. Après cela, prélevez quatre millilitres de chaque échantillon pour la mesure par spectroscopie atomique. Et déterminer la concentration en fer par gramme de cendres comme indiqué dans le protocole textuel.

Pour commencer, ajoutez quatre grammes de ferrocyanure de potassium à 100 millilitres d’eau double distillée, pour préparer la solution de bleu de Prusse. Vortex pour mélanger, et conserver à 4 degrés Celsius jusqu’au moment de l’utiliser. Lorsque vous êtes prêt à l’emploi, mélangez 50 millilitres de solution de bleu de Prusse avec 50 millilitres d’acide chlorhydrique molaire pour servir de solution à blanc.

Ensuite, à l’aide d’une pipette, mélangez 0,5 millilitre d’un échantillon précédemment obtenu, avec 0,5 millilitre de solution de bleu de Prusse. Laissez reposer ce mélange pendant au moins une minute, mais pendant moins de cinq minutes. Transférez ce mélange dans une cuvette et utilisez un spectrophotomètre pour mesurer la densité optique à 715 nanomètres.

Ensuite, déterminez la densité optique par gramme de cendres et tracez la régression linéaire entre les concentrations de fer, comme indiqué dans le protocole de texte. Les résultats représentatifs de 21 échantillons de feuilles de tabac montrent que la concentration en fer dans l’eau d’irrigation a fortement affecté la teneur en fer de la feuille. Les spectres des 21 échantillons représentatifs sont ensuite testés avec la méthode du bleu de Prusse.

Comme on le voit ici, l’absorbance à 715 nanomètres est la longueur d’onde optimale lors de la mesure de solutions contenant différentes concentrations de fer deux et de fer trois. Une courbe de régression linéaire, obtenue en traçant les valeurs de concentration en fer obtenues par spectroscopie atomique, en fonction des valeurs d’absorbance, obtenues par la méthode du bleu de Prusse, permet d’analyser de nouveaux échantillons du même type de plante. N’oubliez pas que travailler avec HCL peut être extrêmement dangereux.

Et des précautions, telles qu’une protection oculaire, doivent toujours être prises lors de l’exécution de cette procédure. Dans la régression linéaire, il est important de vérifier que les résultats sont dans une plage réaliste. Après son développement, cette technique peut aider les chercheurs en biologie à explorer d’autres plantes pour la production alimentaire ou la bioremédiation.