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DOI: 10.3791/58416-v
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Nous présentons ici un biocapteur axée sur la luciférase afin de quantifier l’activité kinasique de suppresseur de tumeur grande (LAT)-une centrale kinase dans l’hippopotame voie de signalisation. Ce biocapteur a diverses applications en recherche fondamentale et translationnelle vise à déterminer l’Hippo voie régulateurs in vitro et in vivo.
Mon laboratoire a étudié le rôle de la voie hippopotame dans le cancer du sein et du poumon, et récemment, nous avons développé un nouveau biocapteur pour surveiller l’activité de signalisation hippopotame. Cette méthode peut être utilisée pour répondre à des questions clés sur les réseaux de signalisation cellulaire, telles que la façon dont la voie Hippo réagit aux facteurs et comment elle interagit avec d’autres voies de signalisation. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes est sa grande sensibilité et aussi le grand nombre d’échantillons peuvent être traités rapidement et simultanément.
Cette technique a diverses applications dans la recherche fondamentale et translationnelle pour étudier les régulateurs de la voie de signalisation Hippo à la fois in vitro et in vivo. Pour commencer, mini-préparation LATS-BS plasmides frais de la culture liquide bactéries DH5-Alpha. Une heure avant la transfection, aspirer le milieu de la plaque et ajouter 500 microlitres de milieu de croissance à chaque puits.
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