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DOI: 10.3791/58542-v
Eva Königshausen1, Sebastian A. Potthoff1, Raphael Haase1, Catherine Meyer-Schwesinger2, Ernest Kaufmann1, L. Christian Rump1, Johannes Stegbauer1, Lorenz Sellin1, Ivo Quack1, Magdalena Woznowski1
1Department of Nephrology, Medical Faculty,Heinrich-Heine-University, 2Institute of Cellular and Integrative Physiology,University Medical Center Hamburg-Eppendorf
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Nous présentons ici un protocole pour l’étiquetage des murins in vivo des protéines de surface de cellules glomérulaire avec de la biotine. Ce protocole contient des informations sur la façon de perfuse les reins de souris, isoler les glomérules et effectuer d’immunoprécipitation endogène de la protéine d’intérêt.
Cette méthode peut aider à répondre aux questions clés dans le domaine de la néphrologie sur le rôle du trafic de protéines de surface cellulaire dans les maladies rénales protéiques et non protéinées. Les principaux avantages de cette technique sont qu’elle facilite l’étude du trafic de protéines de surface cellulaire in vivo et que plus d’une protéine peut être analysée par expérience. Bien que cette méthode puisse donner un aperçu du trafic de surface des cellules glomerular, peut également être appliquée à d’autres systèmes d’organes qui sont perfusés et sont accessibles par des techniques d’isolement.
Commencez par confirmer un manque de réponse au pincement des pieds et désinfecter le côté ventral de la souris anesthésiée avec 70% d’isopropyl. Faire une coupe médiane à travers la peau du bassin au sternum et utiliser des pinces à épiler pour enlever la peau du fascia abdominal. Couper la peau des deux côtés de la ligne médiane abdominale et faire un milieu à travers la couche musculaire abdominale de la vessie au xiphoïde.
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