Name: Pretargeted radio-immunothérapie basée sur la réaction de Diels-Alder demande Inverse d’électrons (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-29T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: Découvrez la radio-immunothérapie pré-ciblée basée sur la réaction de Diels-Alder demande inverse d'électrons pour le traitement du cancer colorectal chez la souris. Cette méthode utilise une chimie de clic in vivo.

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Les auteurs remercient Dr Jacob Houghton pour les conversations utiles. Les auteurs tiens également à remercier le NIH pour leur généreuse contribution (R00CA178205 et U01CA221046).

<ol><li>Goldenberg, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Therapy+of+Cancer+with+Radiolabeled+Antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Targeted Therapy of Cancer with Radiolabeled Antibodies.</a> Journal of Nuclear Medicine. 43 (5), 693-713 (2002).</li>
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<li>Goldenberg, D. M., Chatal, J. -F., Barbet, J., Boerman, O., Sharkey, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+Imaging+and+Therapy+with+Bispecific+Antibody+Pretargeting%5BTitle%5D)+AND+%22Update+on+cancer+therapeutics%22%5BJournal%5D)">Cancer Imaging and Therapy with Bispecific Antibody Pretargeting.</a> Update on cancer therapeutics. 2 (1), 19-31 (2007).</li>
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<li>Gestin, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-Step+Targeting+of+Xenografted+Colon+Carcinoma+Using+a+Bispecific+Antibody+and+188Re-Labeled+Bivalent+Hapten%3A+Biodistribution+and+Dosimetry+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Two-Step Targeting of Xenografted Colon Carcinoma Using a Bispecific Antibody and 188Re-Labeled Bivalent Hapten: Biodistribution and Dosimetry Studies.</a> Journal of Nuclear Medicine. 42 (1), 146-153 (2001).</li>
<li>Green, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Analysis+of+Bispecific+Antibody+and+Streptavidin-Targeted+Radioimmunotherapy+for+B-cell+Cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Comparative Analysis of Bispecific Antibody and Streptavidin-Targeted Radioimmunotherapy for B-cell Cancers.</a> Cancer Research. 76 (22), 6669(2016).</li>
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<li>Schubert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Tumor+Pretargeting+System+Based+on+Complementary+L-Configured+Oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Novel Tumor Pretargeting System Based on Complementary L-Configured Oligonucleotides.</a> Bioconjugate Chemistry. 28 (4), 1176-1188 (2017).</li>
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<li>Meyer, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioorthogonal+Masking+of+Circulating+Antibody-TCO+Groups+Using+Tetrazine-Functionalized+Dextran+Polymers%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Bioorthogonal Masking of Circulating Antibody-TCO Groups Using Tetrazine-Functionalized Dextran Polymers.</a> Bioconjugate Chemistry. 29 (2), 538-545 (2018).</li>
<li>Houghton, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeted+Immuno-PET+of+Pancreatic+Cancer%3A+Overcoming+Circulating+Antigen+and+Internalized+Antibody+to+Reduce+Radiation+Doses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pretargeted Immuno-PET of Pancreatic Cancer: Overcoming Circulating Antigen and Internalized Antibody to Reduce Radiation Doses.</a> Journal of Nuclear Medicine. 57 (3), 453-459 (2016).</li>
<li>Keinänen, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretargeting+of+Internalizing+Trastuzumab+and+Cetuximab+with+a+%2818%29F-Tetrazine+Tracer+in+Xenograft+Models%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging+Research%22%5BJournal%5D)">Pretargeting of Internalizing Trastuzumab and Cetuximab with a (18)F-Tetrazine Tracer in Xenograft Models.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging Research. 7, 95(2017).</li>
<li>Billaud, E. M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-flow+Photosynthesis+of+New+Dienophiles+for+Inverse-Electron-Demand+Diels-Alder+Reactions.+Potential+Applications+for+Pretargeted+In+Vivo+PET+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Science%22%5BJournal%5D)">Micro-flow Photosynthesis of New Dienophiles for Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactions. Potential Applications for Pretargeted In Vivo PET Imaging.</a> Chemical Science. 8 (2), 1251-1258 (2017).</li>
</ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

L’un des points forts de cette approche en vivo pretargeting — en particulier en ce qui concerne les stratégies fondées sur des anticorps bispécifiques et radiomarqué haptènes — est sa modularité : trans- cyclooctène fractions peuvent être ajoutées à n’importe quel anticorps, et tetrazine radioligands peut être radioactif avec une extraordinaire variété de radionucléides sans nuire à leur capacité à réagir avec leurs partenaires de clic. Pourtant, l’adaptation de cette approche à d’autre système d’antic...

Radio-immunothérapie (RIT) — l’utilisation d’anticorps pour la prestation de radionucléides thérapeutiques aux tumeurs — est depuis longtemps une approche alléchante au traitement du cancer1,2. En effet, cette promesse a été soulignée par l’United States Food and Drug Administration approbation de deux radioimmunoconjugates pour le traitement du lymphome Non hodgkinien : 90Y-ibritumomab tiuxétan et 131tositumomab-j’ai3 , 4. pourtant, dès ses débuts, les perspectives cliniques de RIT ont été entravés par une complication critique : débits de dose de rayonnement élevée aux tissus sains5,6. En général, radioimmunoconjugates de RIT sont étiquetés avec des radionucléides à vie longue (p. ex., 131j’ai [t½ = 8,0 jours] et 90Y [t½ = 2,7 jours]) ayant une demi-vie physique qui conjugue bien avec les demi-vie longue pharmacocinétiques des immunoglobulines. C’est essentiel, car il garantit que la radioactivité suffisante reste une fois que l’anticorps a atteint sa biodistribution optimale après plusieurs jours de circulation. Toutefois, cette combinaison des temps de séjour prolongé dans le sang et la demi-vie longue physique entraîne inévitablement l’irradiation des tissus sains, ce qui réduit les rapports thérapeutiques et limitant l’efficacité de la thérapie7. Plusieurs stratégies ont été explorées pour contourner ce problème, y compris l’utilisation de fragments d’anticorps tronqué comme Fab, Fab', f2, minibodies et nanocorps8,9,10. Un des plus prometteurs et fascinant, mais indéniablement complexe des approches alternatives est en vivo pretargeting11.
In vivo pretargeting est une approche d’imagerie nucléaire et thérapie qui cherche à exploiter l’affinité exquise et la sélectivité des anticorps en longeant leurs inconvénients pharmacocinétiques11,12,13. À cette fin, l’anticorps radiomarqués utilisé en radio-immunothérapie traditionnel est déconstruit en deux composantes : une petite molécule radioligands et un immunoconjugué pouvant lier aussi bien un antigène tumoral et au radioligand susmentionné. L’immunoconjugué est injecté tout d’abord et donné une « longueur d’avance », souvent de plusieurs jours, au cours de laquelle il s’accumule dans le tissu cible et efface dans le sang. Par la suite, la petite molécule radioligand est administré et combine avec l’immunoconjugué à la tumeur ou efface rapidement de l’organisme. En substance, en vivo pretargeting invoque effectuant la radiochimie dans le corps lui-même. En réduisant la circulation de la radioactivité, cette approche a simultanément réduit les doses de rayonnement aux tissus sains et facilite l’utilisation des radionucléides (p. ex., 68Ga, t½ = 68 min211; Comme, t½ = 7,2 h) ayant une demi-vie qui est généralement considérées comme incompatible avec les vecteurs de base d’anticorps.
À partir de la fin des années 1980, une poignée de différentes approches in vivo pretargeting ont été développées, y compris des stratégies fondées sur des anticorps bispécifiques, l’interaction streptavidine / biotine et l’hybridation des complémentaires oligonucléotides14,15,16,17,18. Encore chacun a été freiné à des degrés divers par des complications, le plus célèbre est l’immunogénicité puissante des anticorps streptavidine-modified19,20. Au cours des cinq dernières années, notre groupe et autres ont développé une approche en vivo pretargeting basé sur le rapide et bioorthogonal électron inversée demande Diels-Alder ligature entre trans- cyclooctène (TCO) et tetrazine (Tz) 2122,de,23,24. Les plus réussis de ces stratégies ont employé un anticorps modifiés TCO et un radioligand Tz-roulement, comme le TCO est généralement plus stable en vivo que ses Tz partenaire (Figure 1)25,26. Comme dans d’autres méthodologies pretargeting, l’immunoconjugué mAb-TCO est administré d’abord et le temps pour effacer de la circulation et s’accumuler dans les tissus tumoraux. Par la suite, la petite molécule Tz radioligand est injecté, après quoi il clique avec l’immunoconjugué dans le tissu cible ou efface rapidement de l’organisme. Cette in vivo pretargeting stratégie a prouvé très efficace pour PET et SPECT imaging avec plusieurs systèmes différents anticorps/antigène, constamment produisant des images avec un contraste élevé et permettant l’utilisation de courte durées radionucléides tels que 18 F (t½ = 109 min) et 64Cu (t1/2 = h 12,7)21,22,24. Plus récemment, l’efficacité de click-basé pretargeted radio-immunothérapie (Amel) a été démontrée dans des modèles murins d’adénocarcinome ductal pancréatique (ACPE) et carcinome colorectal27,28. À cette fin, le radionucléide thérapeutique 177Lu (βmax = 498 keV, t1/2 = 6,7 jours) a été employé en conjonction avec deux types d’anticorps : 5 b 1, qui cible l’antigène glucidique 19,9 (CA19.9) ubiquitaire exprimée en ACPE , et huA33, qui s’adresse l’A33, une glycoprotéine transmembranaire exprimée en > 95 % des cancers colorectaux. Dans les deux cas, cette approche à 177Lu-Justine ont donné des concentrations d’activité élevé dans le tissu tumoral, créé un effet thérapeutique de la dose-dépendante et réduit simultanément les concentrations d’activité dans les tissus sains par rapport aux traditionnels directement marqués radioimmunoconjugates.
Dans cet article, nous décrivons les protocoles pour TRIOUX utilisant un radioligand de Lu-DOTA-étiqueté tetrazine 177([177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz) et une variante modifiée de TCO de l’anticorps huA33 (huA33-TCO). Plus précisément, les auteurs décrivent la construction de huA33-TCO (Figure 2), la synthèse radiolabeling de [177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz (Figure 3 et Figure 4) et la performance de in vivo la biodistribution et études longitudinales de la thérapie dans des modèles murins du cancer colorectal. En outre, dans les résultats représentatifs et de la discussion, nous présentons un ensemble de données d’échantillons, stratégies possibles d’adresse pour l’optimisation de cette approche et considérer cette stratégie dans le contexte plus large d’en vivo pretargeting et PRIT. Enfin, il est important de noter que tandis que nous avons choisi de mettre l’accent sur pretargeting en utilisant huA33-TCO et [177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz dans le présent protocole, cette stratégie est très modulaire et peut être adapté pour répondre à un large éventail d’anticorps et radionucléides.

<table><tbody><tr><td>(E)-Cyclooct-4-enyl 2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl carbonate (TCO-NHS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>764523</td><td>Se conserver à -80 &deg ; C</td></tr><tr><td>2,5-Dioxo-1-pyrrolidinyl 5-[4-(1,2,4,5-tétrazine-3-yl)benzylamino]-5-oxopentanoate (Tz-NHS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>764701</td><td>Se conserver à -80 &deg ; C</td></tr><tr><td>Acétonitrile (MeCN)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A998-4</td><td></td></tr><tr><td>Acétate d’ammonium (NH4OAc)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A639-500</td><td></td></tr><tr><td>Boc-PEG7-amine (O-(2-Aminoéthyl)-O&prime ;-[2-(Boc-amino)éthyl]hexaéthylène glycol)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70023</td><td>Stocker à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>Dichlorométhane (DCM)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D143-1</td><td></td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO), anhydre</td><td>Fisher Scientific</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>EMD Millipore Amicon Ultra-2 Unité de filtre centrifuge</td><td>Fisher Scientific</td><td>UFC205024</td><td></td></tr><tr><td>GE Healthcare Colonnes de dessalage-10</td><td>jetables Fisher Scientific</td><td>45-000-148</td><td></td></tr><tr><td>N, N-diméthylformamide (DMF), anhydre</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC610941000</td><td></td></tr><tr><td>Saline tamponnée au phosphate (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>70-011-044</td><td>10x concentré</td></tr><tr><td>p-SCN-Bn-DOTA</td><td>Macrocycliques</td><td>B-205</td><td>Stocker à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>Triéthylamine (TEA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC157911000</td><td></td></tr><tr><td>Acide trifluoroacétique (TFA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A116-50</td><td></td></tr><tr><td>Appareil de mesure des tumeurs</td><td>Peira TM900</td><td>Peira TM900</td><td></td></tr></tbody></table>

pretargeted radio-immunothérapie basée sur la réaction de diels-alder demande inverse d’électrons

Pretargeted Radioimmunotherapy Based on the Inverse Electron Demand Diels-Alder Reaction

Alors que radio-immunothérapie (RIT) est une approche prometteuse pour le traitement du cancer, la demi-vie longue pharmacocinétique des anticorps radiomarqués peut entraîner des doses élevées de rayonnement aux tissus sains. Peut-être sans surprise, plusieurs stratégies différentes ont été développés pour contourner cette limitation troublante. L’un des plus prometteurs de ces approches est pretargeted radio-immunothérapie (Amel). TRIOUX repose sur découplage le radionucléide de l’immunoglobuline, y injecter séparément et ensuite leur permettant de combiner in vivo dans le tissu cible. Cette approche exploite les propriétés exceptionnelles de ciblage tumoral des anticorps tout en longeant leurs inconvénients pharmacocinétiques, ainsi réduisant les doses de rayonnement aux tissus non ciblés et facilitant l’utilisation des radionucléides ayant une demi-vie qui sont considéré comme trop court pour utilisation en radioimmunoconjugates traditionnel. Au cours des cinq dernières années, notre laboratoire et autres ont mis au point une approche en vivo pretargeting basée sur la réaction de Diels-Alder (DADEI) inverse la demande électronique entre trans- cyclooctène (TCO) et tetrazine (Tz). Cette stratégie a été appliquée avec succès à pretargeted par émission de positrons (TEP) et d’émission monophotonique une tomodensitométrie (SPECT) d’imagerie avec une variété de systèmes d’anticorps-antigène. Dans une paire de publications récentes, nous avons démontré l’efficacité de base DADEI PRIT dans des modèles murins d’adénocarcinome ductal pancréatique et carcinome colorectal. Dans ce protocole, nous décrivons des protocoles pour TRIOUX utilisant un radioligand de Lu-DOTA-étiqueté tetrazine 177([177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz) et une variante modifiée de TCO du cancer colorectal ciblant les anticorps huA33 (huA33-TCO). Plus précisément, nous allons décrire la construction de huA33-TCO, la synthèse radiolabeling de [177Lu] Lu-DOTA-PEG7- Tz et la performance in vivo la biodistribution des études longitudinales de la thérapie dans des modèles murins de carcinome colorectal.

La conjugaison du TCO à huA33 repose sur le couplage entre le TCO-NHS amine-réactive et les résidus de lysine sur la surface de l’immunoglobuline. Cette méthode est très fiable et reproductible et fiable donne un degré de-marquage de 2-4 TCO/mAb. Dans ce cas, la spectrométrie de masse MALDI-ToF a été utilisée pour confirmer un degré d’étiquetage d’environ 4,0 TCO/mAb ; une valeur similaire a été obtenue en utilisant un fluorophore modifiés tetrazine comme un journaliste2...

Ce protocole décrit la synthèse et la caractérisation d’un trans- cyclooctène (TCO)-modification des anticorps et un radioligand de Lu marqué tetrazine (Tz) 177pour pretargeted radio-immunothérapie (Amel). En outre, il décrit en détail l’utilisation de ces deux concepts pour in vivo de biodistribution et études de thérapie longitudinale dans un modèle murin de cancer colorectal.

Pretargeted radio-immunothérapie basée sur la réaction de Diels-Alder demande Inverse d’électrons

While radioimmunotherapy (RIT) is a promising approach for the treatment of cancer, the long pharmacokinetic half-life of radiolabeled antibodies can ...

Ce protocole décrit comment appliquer une méthodologie pré-ciblée à la radiothérapie ciblée des xénographes du cancer dans le modèle de souris. La radiothérapie pré-ciblée ou PRIT nous permet d’injecter l’anticorps et la radioligand séparément, et de laisser les deux combiner in vivo en utilisant la chimie de clic. Tandis que nous présentons PRIT utilisant un modèle xénographique du cancer côlorectal, cette technique peut être appliquée à n’importe quel antigène de surface ciblant l’anticorps.Il est important de choisir un antigène qui ne s’internalise pas rapidement ou ne se perd pas abondamment car ceux-ci peuvent réduire l’efficacité de l’approche. Pour synthétiser huA33-TCO d’abord préparer une solution de 125 microlitres de 40 milligrammes par millilitre TCO-NHS dans le méthylformamide sec dans un tube de microcentrifugeuse de 1,7 millilitre. Cette solution peut être aliquoted et congelé à 80 degrés Celsius pour une utilisation dans de futures expériences.Dans un tube distinct de microcentrifugeuse de 1,7 millilitre préparer une solution de cinq milligrammes par millilitre de huA33 en un millilitre de phosphate tamponné salin. À l’aide de petits aliquots de carbonate de sodium molaire de 0,1 molaire, réglez le pH de la solution anticorps entre 8,8 et 9,0. Utilisez soit du papier pH, soit un compteur de pH avec une microélecrode pour surveiller le pH, et faites preuve de soin que le pH ne dépasse pas 9,0.Ajoutez un volume correspondant à 40 équivalence molaire de TCO-NHS à la solution anticorps. Pour éviter les précipitations du TCO-NHS hydrophobe, ajoutez-le lentement et avec agitation. Laissez la réaction couver à 25 degrés Celsius sur un mélangeur thermique pendant une heure avec une légère agitation.Avant de purifier l’immunoconjugate huA33-TCO à l’aide d’une colonne de désaltage d’exclusion de taille jetable préemballée, équilibrer la colonne d’exclusion de taille décrite par le fournisseur pour éliminer les agents de conservation présents dans la colonne pendant le stockage, ce qui implique habituellement de laver la colonne cinq fois avec un volume de PBS qui correspond au volume de la colonne. Ajouter le mélange de réaction à la colonne d’exclusion de taille, en notant le volume du mélange de réaction. Une fois que le mélange de réaction est entré dans la colonne ajouter une quantité appropriée de PBS pour apporter le volume total de solution ajoutée à la colonne jusqu’à 2,5 millilitres.Recueillir le produit à l’aide de deux millilitres de PBS que l’élitente. Mesurer la concentration du huA33-TCO à l’aide d’un spectrophotomètre UV vis surveillant la longueur d’onde à 280 nanomètres. Si une solution avec une concentration plus élevée d’immunoconjugate est désirée, concentrez la solution huA33-TCO à l’aide d’une unité de filtre centrifuge avec un seuil de poids moléculaire de 50 000 selon les instructions du fabricant.Conservez l’immunoconjugate huA33-TCO complété à 4 degrés Celsius dans l’obscurité. S’il doit être utilisé plus de quatre jours à l’avenir le stocker à 80 degrés Celsius dans l’obscurité. Dans un tube centrifugeuse de 1,7 millilitres ajouter 200 microlitres de 0,25 tampon d’acétate d’ammonium molaire ajusté au pH 5,5.Ajouter la quantité désirée de chlorure lutérium-177 à la solution tampon. La quantité ajoutée dépendra du nombre de sujets dans l’expérience et des doses radioactives administrées. Ajouter tetrazine PEG7-DOTA dans DMSO au mélange radioactif.Le montant ajouté dépend du nombre de sujets testés. Laissez la solution couver à 37 degrés Celsius pendant 20 minutes. Vérifiez que la radioétique est complète à l’aide de la chromatographie radio-instantanée-mince couche avec 50 millimolar EDTA pH 5.5 que la phase mobile.Le Lutetium-177-DOTA-PEG7-Tetrazine étiqueté restera à la ligne de base tandis que le Lutetium-177 libre sera coordonné par l’EDTA et voyagera avec le front solvant. Il est essentiel que le placement des tumeurs sous-cutanées n’interfère pas avec votre technique de contention. Je recommande de les placer sur le flanc qui est opposé à votre main restrictive.Depuis que je me retienne avec ma main gauche, j’ai choisi de placer les tumeurs sur le flanc droit. Trier les souris nues athymiques femelles atteintes d’un xénographe du cancer colorectal, de sorte que le volume moyen de tumeurs dans chaque cohorte soit à peu près égal. Pour ce faire, énumérez les numéros d’identification des animaux, le motif de l’encoche d’oreille et le volume tumoral dans trois colonnes distinctes d’un programme de feuille de calcul.Trier les données du plus petit au plus grand volume tumoral. Dans une quatrième colonne, attribuez à chaque animal un numéro de cage. Pédalez à travers les cages dans un modèle de serpent jusqu’à ce que tous les animaux se voient attribuer une cage.Une fois que les cages sont assignées trier les données par numéro de cage. Injecter les doses immunoconjuguées de 150 microlitres de solution huA33-TCO dans des seringues prétraitées avec de l’albumine de sérum 1% bovin dans PBS, et conserver ces seringues sur de la glace. Pour injecter le radioligand, prélouillez d’abord des doses dans 150 microlitres de saline stérile de 0,9 % contenant 1,1 équivalence molaire de la tetrazine-PEG7-DOTA radioétique par rapport à la quantité de huA33-TCO administrée.Utilisez des étriers pour mesurer le côté le plus long de la tumeur oblongue ainsi que la largeur qui est perpendiculaire à la longueur. Pesez chaque souris sur un équilibre pour suivre le gain de poids ou la perte de poids au fil du temps. Enfin, calculer le volume en utilisant la formule pour le volume d’un ellipsoid en supposant que la hauteur est à peu près égale à la largeur.Montré ici est la biodistribution d’un précibétrage in vivo avec huA33-TCO et Lutetium-177-DOTA-PEG7-Tetrazine chez les souris nues athymiques portant des tumeurs sous-cutanées SW1222 caner colorectal humain. Tous les intervalles d’injection produisent des concentrations d’activité élevées dans le tissu tumoral ainsi que de faibles concentrations d’activité dans les organes sains. L’intervalle d’injection de 24 heures permet l’absorption tumorale la plus élevée à 120 heures après injection.Basé sur ces résultats un intervalle de 24 heures a été choisi pour l’étude longitudinale suivante de thérapie. Montré ici est l’étude longitudinale de thérapie de cinq groupes de souris portant les tumeurs sous-cutanées de SW1222 dépeintes dans le volume moyen de tumeur en fonction du temps, et le volume de tumeur normalisé au volume initial en fonction du temps. Il y a une différence marquée dans la réponse des cohortes expérimentales par rapport aux groupes de contrôle.Tandis que les tumeurs dans les souris recevant seulement un composant de la stratégie prétargeted de radioimmunotherapy ont continué à se développer sans contrôle, les tumeurs des souris recevant le régime complet de radioimmunothérapie prétargeted ont cessé de croître et ont finalement diminué. Fait important, aucun effet secondaire toxique n’a été observé, et tous les animaux ont maintenu un poids dans les 20% de leur masse initiale. Étonnamment, les souris des cohortes expérimentales avaient un dossier parfait de survie à la fin de l’enquête.Lors de la tentative de cette procédure, il est de la plus haute importance de mesurer avec précision et reproductibilité les tumeurs. Lorsque vous travaillez avec la radioactivité, consultez l’agent de radioprotentgie de votre établissement pour élaborer des protocoles et des installations sécuritaires. La place de contrôles de sécurité appropriés limitera votre exposition et évitera la contamination.Le préciblage permet une dose de rayonnement plus faible aux organes de fond que la radiothérapie traditionnelle. En partageant ce protocole, nous espérons que d’autres pourront tester leurs propres modèles et idées qui mèneront à de nouvelles avancées passionnantes pour le traitement des patients.

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Cette vidéo décrit la technique de radioimmunothérapie préciblée ou PRIT, dans laquelle des immunoconjugués suivis de radioligands sont administrés pour traiter les tumeurs. Cette radio-immunothérapie réduit les doses de rayonnement dans les tissus sains et utilise des radionucléides à très faible demi-vie incompatibles avec les vecteurs à base d’anticorps.

Radioimmunothérapie préciblée : méthode d’administration ciblée de radionucléides thérapeutiques à des tumeurs

La cycloaddition de Diels-Alder bioorthogonale à demande d’électrons inverses a été exploitée pour créer une stratégie d’imagerie TEP préciblée efficace et modulaire pour le cancer. Dans ce protocole, les étapes de cette méthodologie sont décrites dans le contexte d’un système modèle utilisant l’anticorps ciblant le cancer colorectal huA33 et un radioligand marqué au Cu 64.

Exploiter la demande Bioorthogonal inverse Electron Diels-Alder Cycloaddition pour préalablement visées PET Imaging

En raison de sa demi-vie radioactive de plusieurs jours et de ses propriétés de désintégration favorables, le radiométal 89Zr émetteur de positrons est extrêmement bien adapté à une utilisation dans les produits radiopharmaceutiques à base d’anticorps pour l’imagerie TEP. Dans ce protocole, la bioconjugaison, la radiosynthèse et l’application préclinique de 89anticorps marqués au Zr seront décrites.

La bioconjugaison et radiosynthèse de<sup&gt; 89</sup&gt; Anticorps Zr-DFO-étiquetés

Ici, nous décrivons un protocole de radiomarquage et de test in vivo de dérivés tridentés de chélate-tétrazine de Tc(I) 99mpour le pré-ciblage et la chimie bioorthogonale.

Préparation et évaluation des<sup&gt; 99m</sup&gt; Tc marquée tridenté chélates de pré-ciblage utilisant Bioorthogonal Chemistry

Dans ce protocole, nous allons décrire la synthèse des GOUSSES, un réactif à base de sulfone phenyoxadiazolyl méthyl pour la fixation site sélectif de cargaisons sur les thiols de biomolécules, en particulier les anticorps. En outre, nous allons décrire la synthèse et la caractérisation d’un chélateur bifonctionnel portant des GOUSSES et sa conjugaison à un anticorps de modèle.

Synthèse et bioconjugaison de Thiol-réactifs pour la création de Site-sélectivement modifiés immunoconjugués

La photoimmunothérapie dans le proche infrarouge (NIR-PIT) est une stratégie thérapeutique émergente contre le cancer qui utilise un conjugué anticorps-photoabsorbeur (IR700Dye) et une lumière NIR pour détruire les cellules cancéreuses. Ici, nous présentons une méthode pour évaluer l’effet antitumoral de NIR-PIT dans un modèle murin de cancer du poumon disséminé pleural et de mésothéliome pleural malin en utilisant l’imagerie par bioluminescence.

Photoimmunothérapie proche infrarouge pour des modèles murins de dissémination pleurale

Ce protocole décrit la méthodologie de suivi non invasif des lymphocytes T génétiquement modifiés pour exprimer les récepteurs d’antigènes chimériques in vivo avec une plate-forme cliniquement disponible.

Imagerie dynamique des lymphocytes T récepteurs de l’antigène chimérique avec [18F]Tomographie par émission de positons tétrafluoroborates/Tomodensitométrie

Cette étude illustre le potentiel méthodologique de la combinaison de la radioembolisation transartérielle à l’yttrium-90 (Y-90 TARE) avec un anticorps monoclonal anti--1 en tant que stratégie néoadjuvante efficace conduisant à l’hépatectomie chez les patients atteints d’un carcinome hépatocellulaire (CHC) présentant un risque initial élevé de récidive. Il met l’accent sur la sécurité, la faisabilité et l’orientation procédurale étape par étape de cette approche.

Radioembolisation à l’y-90 et inhibiteur de-1 comme traitement néoadjuvant dans le carcinome hépatocellulaire

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Assistée par micro-déshydrogénation intramoléculaire de Diels-Alder pour la synthèse des naphtalènes fonctionnalisés / Colorants solvatochromes

Nous présentons une méthode pour rapide, l'immobilisation réversible de petites molécules et des ensembles de nanoparticules fonctionnalisées pour résonance plasmonique de surface (SPR) des études, utilisant séquentielle sur puce chimie de cycloaddition bioorthogonal et anticorps-antigène capture.

Microfluidique Capture-cyclo-réaction sur puce pour immobiliser de façon réversible de petites molécules ou structures multi-composants pour applications biocapteurs

Découvrez la radio-immunothérapie pré-ciblée basée sur la réaction de Diels-Alder demande inverse d'électrons pour le traitement du cancer colorectal chez la souris. Cette méthode utilise une chimie de clic in vivo.

Pretargeted radio-immunothérapie basée sur la réaction de Diels-Alder demande Inverse d’électrons

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