Modèle de Murine des tumeurs métastatiques de foie dans le cadre des dommages de reperfusion d'ischémie

Les preuves expérimentales et cliniques montrent que la reperfusion d’ischémie de foie peut augmenter la formation des foyers métastatiques en faisant circuler des cellules cancéreuses et la croissance de la maladie micrométastatique. Ce modèle murin reproductible permet l’étude pertinente de l’établissement des métastases et de la croissance de la tumeur préexistant dans le foie. La chirurgie hépatique, le saignement, et le choc septique sont tous associés à la reperfusion d’ischémie de foie et peuvent affecter la croissance de la maladie métastatique.

Ces techniques permettent l’étude de ce phénomène dans un effort pour mieux diagnostiquer et prévenir l’effet préjudiciable de la reperfusion d’ischémie sur la croissance de tumeur dans un arrangement clinique. Après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des orteils chez un mâle anesthésié de huit à 12 semaines C57 noir 6 souris, désinfecter la peau de la paroi abdominale exposée avec un gommage povidone-iode et utiliser des forceps dentaires pour soulever la peau. À l’aide d’un scalpel chirurgical, faire une incision à mi-ligne dans la peau et soulever le muscle abdominal et le péritoine pour faciliter la création d’une incision de trois centimètres à mi-ligne pour exposer le contenu abdominal.

Après avoir placé un hémostat des deux côtés de l’incision et sous le processus xiphoïde, tirez et collez la queue vers le bas pour étendre l’abdomen et utilisez un applicateur stérile de pointe de coton de six pouces pour séparer et exposer la rate du tissu adipeux pancréatique. Ensuite, vortex de la suspension des cellules cancéreuses d’intérêt pour dissocier les touffes de cellules et de charger les cellules dans une seringue d’insuline de 0,5 millilitre équipée d’une aiguille de calibre 28. Injectez lentement et soigneusement 100 microlitres de cellules dans le bout de la rate, en plaçant une pointe de coton adjacente au côté de la ponction d’aiguille pour absorber tout déversement possible de tumeur dans la cavité péritonéale tout en ajoutant une pression douce pour stabiliser la rate pendant l’injection.

Une injection réussie sera évidente par un changement dans la couleur du foie. Lorsque toutes les cellules ont été livrées, placez un morceau de gaze stérile imbibé de PBS sur la zone disséquée et placez la souris sur un coussin chauffant pendant 15 minutes pour permettre aux cellules cancéreuses de circuler dans le système. Pour induire une ischémie et des blessures de reperfusion, utilisez deux pointes de coton humidifié pour déplacer doucement l’intestin de la cavité pour exposer la veine portail et placer la souris sous un microscope disséquant.

Soulevez le terre-plein central et les lobes latéraux gauches de foie vers le haut contre le diaphragme. Placez un petit coton-tige humide entre le lobe médian et le lobe latéral droit pour créer suffisamment d’espace pour serrer et passer soigneusement un forceps de dilatateur de navire derrière la triade du portail et, à l’aide des forceps du dilatateur du navire, utilisez un morceau de 10 centimètres de suture de polypropylène de 4 à 0 pour passer derrière et soulever la triade portail. Utilisez un applicateur à pinces micro-serrifine avec une serrure pour placer une pince microvasculaire sur les lobes hépatiques gauches et médians pour occluser toutes les structures de la triade portail.

Lorsque le blanchiment est observé, enlever la suture de polypropylène 4-0 et le petit coton-tige et retourner soigneusement l’intestin dans la cavité abdominale. Couvrez la paroi abdominale d’un nouveau morceau de gaze imbibée de PBS et recouvrez la gaze d’une pellicule plastique pour minimiser la perte d’évaporation. Ensuite, placez la souris sur le coussin chauffant pendant 60 minutes.

Tout au long de l’intervalle ischémique, visualisez le blanchissage pâle des lobes médials, médiaux gauches et latériels droit pour confirmer l’évidence de la blessure d’ischémie. À la fin de la période de blessure, retirez la pince. Pour effectuer une splenectomy, soulevez soigneusement la rate avec des forceps lisses et utilisez un dispositif portatif de cautérisation pour cautériser les vaisseaux sanguins spléniques pour éviter le saignement excessif.

Transect les vaisseaux à la section cautérisée pour enlever la rate et immédiatement utiliser 4-0 sutures de polypropylène pour fermer les incisions musculaires et cutanées dans un modèle de suture à double couche. Ensuite, placez la souris dans sa cage d’accueil avec surveillance jusqu’à ce que la récupération complète. Le stress chirurgical augmente considérablement la quantité de micrométastases préétamentées dans le foie.

Cette différence est observée même deux semaines après la reperfusion d’ischémie comparée aux souris reperfusées de non-ischémie. La reperfusion d’ischémie hépatique et l’injection de cellules tumorales peuvent être affectées par la température ambiante et la viabilité cellulaire, alors prenez soin de contrôler ces variables. Cette technique facilite l’étude des effets du stress chirurgical et des lésions hépatiques sur la croissance de la maladie métastatique.

Ceci aidera des chercheurs à mieux comprendre le phénomène de croissance chirurgicale-induite de tumeur.