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DOI: 10.3791/62878-v
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This study explores the crucial role of co-translational interactions in nascent-chain modifications, targeting, folding, and assembly pathways using selective ribosome profiling. The model organism employed is the eukaryote Saccharomyces cerevisiae.
Les interactions co-traductionnelles jouent un rôle crucial dans les modifications de la chaîne naissante, le ciblage, le pliage et les voies d’assemblage. Nous décrivons ici le profilage sélectif des ribosomes, une méthode d’analyse directe in vivo de ces interactions dans le modèle eucaryote Saccharomyces cerevisiae.
Les interactions co-traductionnelles jouent un rôle crucial dans les modifications naissantes de la chaîne ciblant les voies de pliage et d’assemblage. Nous décrivons ici le profilage sélectif des ribosomes, une méthode d’analyse directe in vivo de ces interactions dans le modèle eucaryote Saccaromyces cerevisiae. Le profilage sélectif des ribosomes est la seule méthode à ce jour qui capture et caractérise les interactions co-translationnelles in vivo de manière directe.
Le profilage sélectif des ribosomes permet un profilage global de tous les facteurs et interactions avec la traduction des ribosomes en résolution proche du codon. Commencez par collecter les cellules de levure construites contenant les protéines marquées souhaitées. Effectuer la lyse cellulaire à l’aide d’un broyage cryogénique dans un broyeur mélangeur deux fois pendant deux minutes à 30 Hertz.
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