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DOI: 10.3791/64090-v
Brandy N. Curtis*1, Ellysa J. D. Vogt*2, Kevin S. Cannon1,3, Amy S. Gladfelter1,2,3
1Department of Biochemistry and Biophysics,University of North Carolina at Chapel Hill, 2Curriculum in Genetics and Molecular Biology,University of North Carolina at Chapel Hill, 3Department of Biology,University of North Carolina at Chapel Hill
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol guides researchers on how membrane shape influences the organization of protein assemblies, particularly focusing on membrane binding proteins. It highlights the versatility of the technique across different protein types and membrane geometries.
La reconstitution sans cellules a été un outil clé pour comprendre l’assemblage du cytosquelette, et les travaux de la dernière décennie ont établi des approches pour étudier la dynamique des septines dans des systèmes minimaux. Voici trois méthodes complémentaires pour observer l’assemblage de septines dans différents contextes membranaires : les bicouches planes, les supports sphériques et les supports de tiges.
Ce protocole guidera ceux qui travaillent sur les protéines de liaison membranaire pour déterminer comment la forme de la membrane joue un rôle dans l’organisation des assemblages de protéines. Le principal avantage de cette technique est sa polyvalence pour le type de protéine, la composition de la membrane et la géométrie de la membrane. Il permet également d’interroger sur la façon dont une bicouche lipidique peut modifier les propriétés des protéines associées.
Pour identifier une bonne membrane pour l’expérience, nous suggérons d’établir une liste de contrôle qui pourrait inclure les taux de diffusion des lipides, la mobilité de la protéine d’intérêt et s’il existe des liposomes non éclatés ou des liposomes fusionnés collés à la surface. Pour commencer le nettoyage plasma des lames, purgez le nettoyant plasma pendant cinq minutes avec de l’oxygène pour éliminer l’air des conduites et de la chambre. Disposez les glissières de verre à couvercle sec dans un berceau en céramique.
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