Name: Isolement et culture de somates ganglionnaires vestibulaires et spiralés de rongeurs nouveau-nés pour les enregistrements Patch-Clamp (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-21T12:40:00.000+00:00
Duration: 11 min 5 s
Description: Découvrez l'isolement et la culture de neurones ganglionnaires vestibulaires et spiralés de rongeurs nouveau-nés pour enregistrements patch-clamp. Cette méthode permet d'étudier les propriétés électrophysiologiques des canaux ioniques impliqués dans l'audition et l'équilibre.

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Nous remercions les Drs Jing Bing Xue et Ruth Anne Eatock pour leurs premières contributions à ces méthodes. Ce travail a été soutenu par NIH NIDCD R03 DC012652 et NIH NIDCD DC012653S, et R01 DC0155512 à RK et T32 DC009975 à DB, NN et KR.

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<li>Needham, K., Nayagam, B. A., Minter, R. L., O'Leary, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+application+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+and+its+impact+on+spiral+ganglion+neuron+firing+properties+and+hyperpolarization-activated+currents%5BTitle%5D)+AND+%22Hearing+Research%22%5BJournal%5D)">Combined application of brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 and its impact on spiral ganglion neuron firing properties and hyperpolarization-activated currents.</a> Hearing Research. 291 (1-2), 1-14 (2012).</li>
<li>Adamson, C. L., Reid, M. A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opposite+actions+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+neurotrophin-3+on+firing+features+and+ion+channel+composition+of+murine+spiral+ganglion+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Opposite actions of brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-3 on firing features and ion channel composition of murine spiral ganglion neurons.</a> The Journal of Neuroscience. 22 (4), 1385-1396 (2002).</li>
<li>Zhou, Z., Liu, Q., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complex+regulation+of+spiral+ganglion+neuron+firing+patterns+by+neurotrophin-3%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Complex regulation of spiral ganglion neuron firing patterns by neurotrophin-3.</a> The Journal of Neuroscience. 25 (33), 7558-7566 (2005).</li>
<li>Liu, X. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+channel+diversity+in+the+vestibular+ganglion%3A+NaV1.5%2C+NaV1.8%2C+and+tetrodotoxin-sensitive+currents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurophysiology%22%5BJournal%5D)">Sodium channel diversity in the vestibular ganglion: NaV1.5, NaV1.8, and tetrodotoxin-sensitive currents.</a> Journal of Neurophysiology. 115 (5), 2536-2555 (2016).</li>
</ol>

Les auteurs déclarent qu’il n’y a pas de conflits d’intérêts.

Les méthodes présentées ici sont spécifiques aux enregistrements de neurones isolés ; Des études antérieures se sont concentrées sur des enregistrements à partir de terminaisons axonales dans une préparation semi-intacte. Par rapport aux techniques d’enregistrement terminales existantes, les enregistrements isolés offrent un comportement supérieur en termes de pince d’espace et d’isopotentiel. De plus, ce protocole permet d’accéder à un échantillon plus large de neurones, puisque seules les sous-populations portant le ca...

Les neurones bipolaires du nerf vestibulocochléaire relient les cellules ciliées sensorielles de l’oreille interne au tronc cérébral. Ils sont les principaux vecteurs d’informations sur le son et les mouvements de la tête ; Les dommages causés à ces cellules importantes entraînent une surdité et des troubles de l’équilibre. Les parties vestibulaire et auditive du nerf sont chacune composées de types cellulaires distincts qui sont morphologiquement et fonctionnellement diversifiés 1,2. Dans le système vestibulaire, deux sous-populations afférentes se déclenchent spontanément à des intervalles réguliers ou irréguliers2. On pense que la synchronisation des pics afférents reflète une diversité sous-jacente dans la composition des canaux ioniques 3,4. Dans le système auditif, il existe deux sous-populations principales de neurones ganglionnaires spiralés (SGN) ; alors que les SGN de type I entrent en contact avec des cellules ciliées internes individuelles5, les SGN de type II entrent en contact avec plusieurs cellules ciliées externes5. Des enregistrements in vitro de cultures semi-intactes et organotypiques suggèrent des différences dans les propriétés membranaires des SGN de type I et de type II 6,7.
De nombreux canaux ioniques et récepteurs de neurotransmetteurs situés aux extrémités de ces neurones se trouvent également dans leurs corps cellulaires. Ainsi, les cultures du somata vestibulaire isolé et du somata ganglionnaire spiral peuvent être étudiées in vitro pour comprendre comment les canaux ioniques et les récepteurs des neurotransmetteurs contribuent à la réponse de ces neurones. La morphologie compacte des corps cellulaires isolés permet des enregistrements électriques de haute qualité, adaptés à la caractérisation détaillée des canaux ioniques voltage-dépendants et des récepteurs des neurotransmetteurs. L’accès facile à une variété représentative de sous-types de neurones permet une analyse à haut débit de la diversité cellulaire.
Cet article présente une méthode d’isolement et de culture des corps cellulaires ganglionnaires dissociés de la partie supérieure du ganglion vestibulaire chez le rat au jour postnatal (P)9 à P20. Des suggestions sont également fournies pour étendre ces méthodes au ganglion spiralé, en plus des étapes nécessaires pour extraire, dissocier et plaquer avec succès les cellules ganglionnaires. Ces méthodes sont une évolution de celles mises au point dans les publications de divers laboratoires 8,9,10. Ce document contient également des conseils pour la sélection de cellules saines pour les enregistrements patch-clamp.
Enfin, le protocole décrit la procédure d’enregistrement des patch-clamps à l’aide de la configuration des patchs perforés11. Bien que la configuration du patch perforé soit plus longue et plus difficile techniquement que la configuration plus courante du patch rompu, elle est préférable pour maintenir le milieu cytoplasmique qui permet des sessions d’enregistrement longues et stables. Les avantages de cette configuration d’enregistrement sont illustrés ici par l’amélioration de la stabilité des courants cationiques activés par l’hyperpolarisation dans les enregistrements en patch perforé par rapport aux enregistrements en patch rompu.
Ce protocole est organisé en cinq sections. Les sections 1 à 3 décrivent les solutions et les outils qui peuvent être préparés et stockés à l’avance. La section 4 décrit les étapes de dissection et de placage du vestibulaire et des SGN. La section 5 décrit les étapes de l’enregistrement des neurones après une période de culture. Entre nos mains, la section 4 et la section 5 sont effectuées sur une période de 2 jours consécutifs.

<table><tbody><tr><td>Amphotéricine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4888-100MG</td><td>Pour les enregistrements de patchs perforés.</td></tr><tr><td>ATP di-sodium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7699</td><td>Additif à la solution interne</td></tr><tr><td>B27 Supplément (50x), sans sérum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17504044</td><td>additif au milieu de culture, pour SGN</td></tr><tr><td>Beakers (1000, 100, 10) centrifugeuse de</td> paillasse millilitre <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>USA Scientific</td><td>2641-0016</td><td></td></tr><tr><td>Bec Bunsen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>J.T. Baker</td><td>1311-01</td><td>Additif à la solution interne</td></tr><tr><td>Collagénase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5318</td><td>une enzyme sur trois pour digérer les tissus</td></tr><tr><td>Couvre-objet, rectangulaire, épaisseur #1, 22x40&nbsp ;</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0707</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Biotium</td><td>90082</td><td></td></tr><tr><td>Dnase I, du pancréas bovin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11284932001</td><td>une enzyme sur trois pour digérer les tissus</td></tr><tr><td>Dumont #3 Forceps (Blunt)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11231-30</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forceps (Fine)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Forceps ( Fine)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E0396</td><td>Additif à la solution interne</td></tr><tr><td>Extracteur d’électrodes</td><td>Narashige</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>Source lumineuse d’épi-illumination&nbsp ;</td><td>Zeiss&nbsp ;</td><td>CL 1500 ECO</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>2716</td><td>pour le nettoyage de la tête et autour du banc de dissection</td></tr><tr><td>Capillaires en borosilicate filamenté pour électrodes</td><td>Sutter Instruments</td><td>BF140-117-10</td><td></td></tr><tr><td>Lame de dissection à arêtes fines</td><td>Outils de science fine</td><td>10010-00</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes Pasteur en verre</td><td>VWR</td><td>14673-010</td><td>pour tirer des pipettes de trituration</td></tr><tr><td>Sérum de veau fœtal inactivé par la chaleur</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16140063</td><td>additif au milieu de culture</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-100G</td><td>pour tamponner le pH toutes les solutions dans le protocole</td></tr><tr><td>Plaque chauffante / agitateurs magnétiques&nbsp ;</td><td>VWR</td><td>76549-914</td><td></td></tr><tr><td>Seau isotherme rempli de glace</td><td></td><td></td><td>pour garder tous les échantillons et solutions au frais</td></tr><tr><td>K2SO4, Sulfate</td><td>de potassium Sigma Aldrich</td><td>P9458-250G</td><td>Additif à la solution interne</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P93333</td><td>Additif à la solution interne</td></tr><tr><td>KOH (1 M)</td><td>Honeywell</td><td>319376-500ML</td><td>Pour apporter la solution interne à pH souhaité.</td></tr><tr><td>Grands ciseaux à ressort</td><td>Fine Science Tools</td><td>14133-13</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz medium&nbsp ;</td><td>Solutions de dissection et de bain</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>L4386</td></tr><tr><td>Chambre d’enregistrement à bain discret pour paraboles de culture</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0236</td><td></td></tr><tr><td>Seringues Luer-Lok, 30 ml</td><td>BD</td><td>302832</td><td>pour l’aspiration de la solution L-15/HEPES/HEPES.</td></tr><tr><td>Supplément MEM + Glutamax</td><td>Fisher Scientific</td><td>41-090-101</td><td>base du milieu de culture</td></tr><tr><td>MgCl2-Hexahydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1028</td><td>Additif à la solution interne</td></tr><tr><td>Aiguille microFil pour le remplissage des micropipettes - calibre 34&nbsp ;</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF34G</td><td></td></tr><tr><td>Microforge</td><td>Narashige</td><td>MF-90</td><td>Pour le polissage des électrodes.</td></tr><tr><td>N2 Supplément (100x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17502-048</td><td>additiif au milieu de culture, pour SGN</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7653</td><td>Additif à la solution interne</td></tr><tr><td>NaOH (1 M)</td><td>Thomas Scientific</td><td>319511-500ML</td><td>pour titrage</td></tr><tr><td>pH Osmometer</td><td>Advanced Instruments Inc.</td><td>3320</td><td></td></tr><tr><td>Oxygène, qualité médicale, avec régulateur et tubulure adéquats</td><td>USC Material Management</td><td>MEDOX200 (Identifiant : 00015)</td><td>pour dissolution dans des solutions de dissection et de bain</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM992</td><td></td></tr><tr><td>Poire de pipette Pasteur (3 ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-25</td><td>poire pour pipettes de trituration</td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine</td><td>Thermo Fisher </td> Additif <td>scientifique 15140122</td><td>pour prévenir la contamination du milieu de culture</td>Solution d’euthanasie</tr><tr><td>à base de pentobarbital (par exemple, Fatal Plus. 50 à 60 mg/kg de dosage)&nbsp ;</td><td>MWI Animal Health</td><td>15199</td><td>pour l’euthanasie</td></tr><tr><td>Filtres à membrane PES ,&nbsp ; 0,2 micromètre&nbsp ;</td><td>Nalgene</td><td>566-0020</td><td>pour solutions de filtrage</td></tr><tr><td>Filtres à seringue stériles à membrane PES, 0,22 um, 30 mm&nbsp ;</td><td>CELLTREAT</td><td>229747</td><td>pour solutions de filtration aspirées dans des seringues Boîtes</td></tr> de <tr><td>Pétri, 35 x 10 mm</td><td>Genessee Scientific</td><td>32-103</td><td>pour la micro-dissection et pour la rétention Solution de trempage de pointe en configuration à patch perforé</td></tr><tr><td>Boîtes de Pétri, 60 x 15 mm</td><td>Midland Scientific</td><td>P7455</td><td>pour la dissection macroscopique</td></tr><tr><td>PH-mètre</td><td>Mettler Toledo</td><td>Modèle S20</td><td></td></tr><tr><td>Pipettors (1000, 200, 10) microlitre</td><td>USA Scientific</td><td></td><td></td>Plat</tr> de <tr><td>culture à fond de verre enduit de poly-d-lysine</td><td>Mattek</td><td>P35GC-0-10-C</td><td>à plaque de neurones pour la culture</td></tr><tr><td>Plate-forme à changement rapide, base chauffée, pour plats de culture de 35 mm</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0375</td><td></td></tr><tr><td>Référence Cell</td><td>World Precision Instruments</td><td>RC1T</td><td></td></tr><tr><td>Lame de scalpel</td><td>Miltex</td><td>4-315</td><td></td></tr><tr><td>Poignée de scalpel</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Échelle scientifique</td><td>Mettler Toledo</td><td>XS64</td><td></td></tr><tr><td>Pipettes sérologiques (10, 25) millilitre</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de graisse silicone (pour sceller le verre de protection et la chambre)</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0378</td><td></td></tr><tr><td>Guillotine pour petits animaux</td><td>Kent Scientific</td><td>DCAP</td><td></td></tr><tr><td>Petit animal guillotine</td><td>Kent Scientific</td><td>DCAP</td><td>pour la décapitation si disséquer des rats de plus de P15.</td></tr><tr><td>Microscope à stéréodissection&nbsp ;</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000</td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux chirurgicaux droits</td><td>Outils scientifiques fins</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>Seringue (3, 10, 30) millilitre</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T1426</td><td>une enzyme sur trois pour digérer les tissus</td></tr><tr><td>Seringue à tuberculine&nbsp ;</td><td>Covidien</td><td>8881500105</td><td>pour l’administration d’une solution d’euthanasie par injection intrapéritonéale</td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort Vannas, 2,5 mm Cutting Edge</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Fiole jaugée, 1000 millilitres</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>945300</td><td></td></tr><tr><td>Eau, stérile u ltrapure, R>18,18 mégaOhms cm (par exemple, filtrée par une purification d’eau Millipore-Sigma </td><td>Millipore-Sigma</td><td>CDUFBI001</td><td></td></tr></tbody></table>

isolement et culture de somates ganglionnaires vestibulaires et spiralés de rongeurs nouveau-nés pour les enregistrements patch-clamp

Isolating and Culturing Vestibular and Spiral Ganglion Somata from Neonatal Rodents for Patch-Clamp Recordings

La morphologie compacte des neurones ganglionnaires de l’oreille interne isolés et cultivés permet de caractériser en détail les canaux ioniques et les récepteurs des neurotransmetteurs qui contribuent à la diversité cellulaire au sein de cette population. Ce protocole décrit les étapes nécessaires à la dissection, à la dissociation et à la culture à court terme réussies des somata des neurones bipolaires de l’oreille interne à des fins d’enregistrements patch-clamp. Des instructions détaillées pour la préparation des neurones ganglionnaires vestibulaires sont fournies avec les modifications nécessaires nécessaires au placage des neurones ganglionnaires spiralés. Le protocole comprend des instructions pour effectuer des enregistrements de patch-clamp de cellules entières dans la configuration de patch perforé. Des exemples de résultats caractérisant les enregistrements par pince de tension de courants cycliques activés par hyperpolarisation et dépendants des nucléotides (HCN) mettent en évidence la stabilité de la configuration d’enregistrement de patch perforé par rapport à la configuration plus standard de patch rompu. La combinaison de ces méthodes, somata isolée et enregistrements perforés-patch-clamp, peut être utilisée pour étudier les processus cellulaires qui nécessitent des enregistrements longs et stables et la préservation du milieu intracellulaire, tels que la signalisation par des récepteurs couplés aux protéines G.

L’exécution de protocoles de pince de tension en appliquant des familles de pas de tension révèle l’activation dépendante de la tension d’une variété de familles de courants différentes. Des exemples représentatifs de courants de cellules entières évoqués à partir d’un VGN et adaptés d’enregistrements publiés13 sont présentés à la figure 1A,B. L’application de tensions dépolarisantes (Figure 1B) active un courant entrant ...

Les méthodes présentées ici fournissent des instructions détaillées pour la dissection, la dissociation, la culture et l’enregistrement patch-clamp à partir de neurones ganglionnaires vestibulaires et ganglionnaires spiralés de l’oreille interne.

Isolement et culture de somates ganglionnaires vestibulaires et spiralés de rongeurs nouveau-nés pour les enregistrements Patch-Clamp

The compact morphology of isolated and cultured inner ear ganglion neurons allows for detailed characterizations of the ion channels and neurotransmitter ...

De nombreux canaux ioniques et récepteurs de neurotransmetteurs qui se trouvent aux extrémités des neurones afférents auditifs et vestibulaires se trouvent également dans leurs corps cellulaires. Les cultures de corps cellulaires isolés peuvent être étudiées in vitro pour comprendre comment ces canaux ioniques et récepteurs influencent les réponses des neurones. La morphologie compacte des corps cellulaires permet des enregistrements électriques de haute qualité pour caractériser les propriétés voltage-dépendantes des canaux ioniques et des récepteurs des neurotransmetteurs.De plus, l’accès facile à une grande variété de types de cellules permet un débit élevé grâce à une analyse physique de la diversité cellulaire. Les procédures seront démontrées par Katherine Regalado, étudiante aux cycles supérieurs, ainsi que par les boursiers postdoctoraux, le Dr Daniel Bronson et Nathaniel Nowak de mon laboratoire. Pour commencer, tenez une pipette de pâturage en verre sur la flamme d’un bec Bunsen pour préparer des pipettes de tritration pour la dissociation cellulaire.Une fois que la pointe du verre commence à fondre, étirez le verre jusqu’au diamètre de pointe souhaité. Retirez une extrém

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Cette vidéo montre le processus d’isolement des explants de ganglions spiralés de l’oreille interne et de leur co-culture avec l’organe de Corti sur un réseau de multiélectrodes. Les ganglions en spirale sont soigneusement extraits et sectionnés en sections de tissus plus petites ou en explants. Ces explants sont cultivés sur la zone active du réseau de multiélectrodes pour favoriser la croissance des processus neuronaux.

Culture d’explants de neurones du ganglion spiralé murin sur des réseaux de multiélectrodes

Cette vidéo présente une méthode permettant d'isoler les neurones vestibulaires de l'oreille interne d'un bébé souris. Il décrit méticuleusement les étapes de la dissection de l’oreille interne, de la récolte du ganglion vestibulaire, puis de la dissociation du ganglion en cellules uniques. Ces cellules sont ensuite cultivées sur des boîtes à fond de verre pour établir une culture de neurones vestibulaires.

Isolement des neurones ganglionnaires vestibulaires de l’oreille interne d’une souris

Cette vidéo présente une technique de patch-clamp à cellules entières pour l’enregistrement électrophysiologique à partir d’une rétine de souris à montage plat. Une fine pipette en verre avec une électrode est utilisée pour approcher les cellules amacrines en étoile (SAC) dans la rétine. Après avoir formé un joint, une aspiration est appliquée pour rompre la membrane et former la configuration patch-clamp à cellules entières. Enfin, le flux d’ions à travers les récepteurs synaptiques SAC est...

Mise en place d’une pince de patch à cellules entières pour l’enregistrement électrophysiologique à partir d’une rétine de souris à montage plat

Cette vidéo présente la technique du patch-clamp pour mesurer les courants ioniques dans les corps cellulaires sensoriels des neurones de l’oreille interne. Il détaille la préparation et l’utilisation d’une pipette polie remplie d’une solution interne contenant de l’amphotéricine B, qui perfore la membrane pour permettre le mouvement des ions tout en préservant les conditions intracellulaires. Des impulsions de tension sont appliquées pour déclencher et enregistrer l’activité des canaux...

Enregistrements perforés de corps cellulaires sensoriels de neurones sensoriels de l’oreille interne

La stimulation du nerf infrarouge a été proposé comme alternative à une stimulation électrique dans une gamme de types nerveuses, y compris ceux qui sont associés avec le système auditif. Ce protocole décrit une méthode de patch-clamp pour l'étude du mécanisme de la stimulation du nerf infrarouge dans une culture de neurones auditifs primaires.

Whole Patch Clamp cellulaire pour étudier les mécanismes de la stimulation neurale infrarouge

Analyse de la fonction des cellules ciliées vestibulaires est compliquée par leur localisation profonde dans la partie la plus difficile du crâne, l'os temporal rocher. La plupart des études sur les cellules capillaires fonctionnels ont utilisé intensément les cellules ciliées isolées. Nous décrivons ici une préparation semi-intactes de souris épithélium vestibulaire pour les études de microscopie électrophysiologiques et à deux photons.

Une préparation semi-intact d&#39;isolement de la souris vestibulaire épithélium sensoriel pour électrophysiologie et haute résolution microscopie à deux photons

Nous décrivons la dissection du système nerveux du lièvre marin...

Isolation des neurones sensoriels de<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Patch pour les enregistrements de serrage des courants glutamatergiques

Ce manuscrit décrit comment préparer des ganglions de la racine dorsale intacts pour les enregistrements par patch clamp. Cette préparation maintient le microenvironnement des neurones et des cellules gliales satellites, évitant ainsi les changements phénotypiques et fonctionnels observés à l’aide de neurones DRG dissociés.

Patch Clamp Recordings sur Intact ganglions rachidiens de rats adultes

Ce protocole décrit les méthodes pour enregistrer la réponse auditif du tronc cérébral de ratons postnatal. Pour examiner le développement fonctionnel des cellules ciliées externes, la procédure expérimentale de cellules entières patch clamp d’enregistrement en isolé les cellules ciliées externes est décrit étape par étape.

Réponse auditif du tronc cérébral et des cellules ciliées externes Whole-cell Patch Clamp enregistrement chez le rat Postnatal

Ici, nous présentons un protocole pour l’isolement, la purification et la culture des cellules marginales primaires à partir de la strie vasculaire de la souris, ainsi que pour établir des modèles in vitro du stress oxydatif et de la sénescence cellulaire afin d’étudier les troubles de la paroi latérale cochléaire.

Isolement et culture des cellules marginales primaires de la strie vasculaire à partir de souris néonatales

We present a new dissection method to extract the vestibular ganglion and all five vestibular organs (utricle, saccule, and three cristae: lateral/horizontal, anterior, and posterior) as one whole-mount vestibular complex. Confocal imaging allows visualization of vestibular neuron cell bodies for quantification, as well as neuronal projections to the sensory...

Whole-Mount Dissection of the Vestibular Complex and Quantification of Vestibular Ganglion Neurons in Mice

Découvrez l'isolement et la culture de neurones ganglionnaires vestibulaires et spiralés de rongeurs nouveau-nés pour enregistrements patch-clamp. Cette méthode permet d'étudier les propriétés électrophysiologiques des canaux ioniques impliqués dans l'audition et l'équilibre.

Isolement et culture de somates ganglionnaires vestibulaires et spiralés de rongeurs nouveau-nés pour les enregistrements Patch-Clamp (Vidéo) | JoVE Journal

Isolement et culture de somates ganglionnaires vestibulaires et spiralés de rongeurs nouveau-nés pour les enregistrements Patch-Clamp

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