Name: Évaluation dynamique multiparamétrique de la fonction plaquettaire à l’aide d’un biocapteur capacitif (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T12:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Découvrez une méthode d'évaluation multiparamétrique de la fonction plaquettaire utilisant un biocapteur capacitif en microenvironnement semi-rigide. Cette approche permet de mesurer le nombre de plaquettes et leurs voies d'activation dans des conditions physiologiques améliorées.

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<li>Rassaei, L., Mathwig, K., Kang, S., Heering, H. A., Lemay, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+biodetection+in+a+nanofluidic+device%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Integrated biodetection in a nanofluidic device.</a> ACS Nano. 8 (8), 8278-8284 (2014).</li>
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<li>Zhurauski, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+and+selective+affimer-functionalized+interdigitated+electrode-based+capacitive+biosensor+for+her4+protein+tumor+biomarker+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Sensitive and selective affimer-functionalized interdigitated electrode-based capacitive biosensor for her4 protein tumor biomarker detection.</a> Biosens Bioelectron. 108, 1-8 (2018).</li>
<li>Pourang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+fibrinolytic+status+in+whole+blood+using+a+dielectric+coagulometry+microsensor%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Assessment of fibrinolytic status in whole blood using a dielectric coagulometry microsensor.</a> Biosens Bioelectron. 210, 114299(2022).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Dodécanéthiol</td><td>Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>471364-100ML</td><td>1 mM</td></tr><tr><td>200-proof ethanol</td><td>Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>EX0276-1</td><td></td></tr><tr><td>Imprimante 3D</td><td>Shenzhen Creality 3D Technology Co, Ltd.</td><td>Ender-3 V3</td><td></td></tr><tr><td>Matériau d’impression 3D</td><td>HATCHBOX 3D, CA, U.S.A</td><td>3D PLA-1KG-1.75</td><td></td></tr><tr><td>Adénosine 5&prime ;-diphosphate</td><td>Sigma Aldrich, U.S.A</td><td>01905-250MG-F</td><td></td></tr><tr><td>ADP Aspirine&nbsp ;</td><td>Sigma-Aldrich, MO, États-Unis</td><td>A2093-100G</td><td></td></tr><tr><td>Gravure ionique réactive profonde</td><td>Omega Engineering, Inc.</td><td>SPTS Rapier DRIE</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>D8418-50ML</td><td></td></tr><tr><td>DMSO High Vacuum Deposition</td><td>Systems CHA&nbsp ;</td><td>SEC-600</td><td></td></tr><tr><td>Fibronectine humaine</td><td>Sigma-Aldrich, MO, États-Unis</td><td>CLS356008-1EA</td><td>Fn</td></tr><tr><td></td><td>KOH Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>P1767-250G</td><td></td></tr><tr><td>LCR meter&nbsp ;</td><td>Keithley Instruments, Inc., OH, U.S.A</td><td>Keithley EL 4980AL</td><td></td></tr><tr><td>Supports de compteur LCR</td><td>Signatone Corporation, CA, U.S.A</td><td>SCA-50-4</td><td></td></tr><tr><td>Système d’alignement de masque</td><td>ABM, U.S.A, Inc.</td><td>ABM/6/350/NUV/DCCD/SA</td><td></td></tr><tr><td>Micropositionneurs</td><td>Signatone, CA, U.S.A</td><td>S-725</td><td></td></tr><tr><td>sonde à aiguille</td><td>Signatone Corporation, CA, U.S.A</td><td>SCAT5T-4</td><td>12.5 &mu ; rayon m</td></tr><tr><td>Phosphate salin tamponné</td><td>Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>P4474-1L</td><td>PBS, pH 7,4</td></tr><tr><td>Gravure ionique réactive</td><td>Plasma-Therm, U.S.A</td><td>RIE Substrat de silicium Vision 320</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Wafer World Inc SKU</td><td># 1766</td><td></td></tr><tr><td>Tubes standard de citrate 3,2 %</td><td>Tiger Medical, NJ, U.S.A.</td><td>Covidien / Cardinal Health 8881340478 Monoject</td><td></td></tr><tr><td>Thrombin</td><td>Enzyme Research Laboratories, U.S.A</td><td>HT 1002a</td><td></td></tr><tr><td>Ticagrelor</td><td>Sigma-Aldrich, MO, U.S.A</td><td>PHR2788-400MG</td><td></td></tr><tr><td>Tyrode' s tampon</td><td>Boston Bioproducts, U.S.A</td><td>BSS-375</td><td></td></tr><tr><td>UV photoresist</td><td>AZ electronic materials, NC, U.S.A.</td><td>AZ 9260</td><td>15um</td></tr></tbody></table>

Évaluation dynamique multiparamétrique de la fonction plaquettaire à l’aide d’un biocapteur capacitif

Dynamic Multiparameter Platelet Function Assessment Using a Capacitive Biosensor

Cette étude vise à effectuer une évaluation dynamique de la fonction plaquettaire. En suivant le protocole décrit ci-dessus, la solution de c-PRP a été préparée et les plaquettes ont été ensemencées sur l’électrode enrobée de Fn dans le T-MCC. Les plaquettes flottantes ont été lavées par l’étape de lavage, et un agoniste a été ajouté pour activer les plaquettes attachées. Les résultats détaillés et l’analyse se trouvent dans notre précédent rapport28.
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Platelets play a fundamental role in blood clotting through a series of regulated responses, including adhesion, spreading, granular secretion, ...

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Cette vidéo montre la méthode d’évaluation de l’impact de la contrainte de cisaillement sur les plaquettes. Le traitement par anticorps induit la dissociation et les changements de conformation dans les complexes mécanorécepteurs, activant les plaquettes et exprimant des marqueurs à la surface. Ces marqueurs sont observés par immunomarquage et cytométrie en flux.

Les effets du stress de cisaillement sur les plaquettes traitées avec des anticorps contre les récepteurs mécanosensoriels

La transfusion de plaquettes et l’hémostase ont été modélisées à l’aide de la reconstitution sanguine et des chambres de flux microfluidique pour étudier la fonction des plaquettes de banque de sang. Les données démontrent les conséquences de la lésion de stockage plaquettaire sur l’hémostase, in vitro.

Microfluidique flux Chambers Utilisation de sang Reconstitué au modèle Hémostase et Platelet Transfusion<em&gt; In vitro</em

Cet article décrit un modèle expérimental d'hémostase qui permet de mesurer simultanément la fonction plaquettaire et de la coagulation. Plaquettaires et de la fluorescence de la fibrine est mesurée en temps réel et le taux de plaquettes d'adhérence, la vitesse de coagulation, et le début de la coagulation sont déterminés. Le modèle est utilisé pour déterminer les propriétés des plaquettes procoagulantes sous flux de concentrés pour la transfusion.

A microfluidique débit Chambre Modèle pour Platelet Transfusion et Hémostase mesures Platelet Déposition et la formation de fibrine en temps réel

Nous présentons ici un protocole pour la détection et la quantification des molécules abondantes faibles dans des solutions complexes en utilisant moléculaire en combinaison avec un biocapteur capacité d’impression.

Base de détection ultrasensible des biomarqueurs à l’aide d’une empreinte moléculaire biocapteur capacitif

Un protocole détaillé pour l’imagerie de plaquettes migrantes uniques à l’aide de sattaches avidine-biotine fonctionnalisées par RGD avec une densité ajustable est fourni, révélant que les plaquettes génèrent suffisamment de force pour rompre la liaison avidine-biotine.

Un test in vitro pour étudier la migration plaquettaire à l’aide de câbles avidine-biotine fonctionnalisés par RGD

La formation de plaquettes procoagulantes a été corrélée à un risque accru de thrombose. Voici un protocole précis d’isolement des plaquettes lavées du sang humain, destiné à quantifier l’exposition à la phosphatidylsérine et la libération de microvésicules, qui sont des caractéristiques distinctives des plaquettes procoagulantes.

Caractérisation des plaquettes procoagulantes par mesure de l’exposition à la phosphatidylsérine et de la libération de microvésicules à partir de plaquettes humaines purifiées

La fonction plaquettaire sous flux peut être évaluée et la réanimation hémostatique simulée peut être modélisée à l’aide d’un dispositif microfluidique, qui a des applications en traumatologie et en médecine transfusionnelle.

La microfluidique dans l’évaluation de la fonction plaquettaire

La cytométrie en flux multicolore pour les plaquettes permet d’identifier de nouveaux sous-types de plaquettes au sein des sous-populations de plaquettes classiques, telles que les plaquettes au repos, agrégées, procoagulantes et apoptotiques. Cela permet de comparer différents modèles de sous-populations induits par divers agonistes plaquettaires. Ici, une procédure d’établissement d’un panel de cytométrie en flux multicolore est décrite en détail.

Analyse des sous-populations plaquettaires par cytométrie en flux multicolore

Le protocole actuel fournit un ensemble complet de procédures nécessaires à l’analyse des plaquettes procoagulantes, qui présentent des caractéristiques de nécrose, d’apoptose et d’activation plaquettaire qui se chevauchent.

Analyse complète des plaquettes procoagulantes présentant des caractéristiques de nécrose, d’apoptose et d’activation plaquettaire

Ce travail décrit un test microfluidique qui utilise la contrainte de cisaillement pour déclencher la formation de thrombus dans le sang et caractérise le thrombus par plusieurs dimensions de lecture. Ce test peut mesurer la tendance prothrombotique des échantillons sanguins, et est donc utile pour le diagnostic des maladies, la découverte de médicaments, ainsi que pour les études mécanistes fondamentales liées à la thrombose.

Analyse de profilage de thrombus : une plateforme basée sur la microfluidique pour caractériser de manière exhaustive la thrombogenèse biomécanique

Découvrez une méthode d'évaluation multiparamétrique de la fonction plaquettaire utilisant un biocapteur capacitif en microenvironnement semi-rigide. Cette approche permet de mesurer le nombre de plaquettes et leurs voies d'activation dans des conditions physiologiques améliorées.

Évaluation dynamique multiparamétrique de la fonction plaquettaire à l’aide d’un biocapteur capacitif

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