Name: Méthode simple et efficace pour tester des agents immunomodulateurs pour la génération de cellules dendritiques tolérogènes à partir de monocytes CD14+ humains (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Découvrez une méthode pour générer des cellules dendritiques tolérogènes à partir de monocytes CD14+ humains en utilisant des agents immunomodulateurs. Cette approche permet d'induire des cellules T régulatrices pour la recherche en immunologie.

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<li>Nakayama, M., Michels, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+antigen+specificity+of+human+islet+infiltrating+T+cells+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Determining antigen specificity of human islet infiltrating T cells in type 1 diabetes.</a> Front Immunol. 10, 365(2019).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,1 à 10 et micro ; L Pointes de pipette filtrées</td><td>VWR</td><td>76322-158</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>1,5 mL Tube à centrifuger</td><td>VWR</td><td>77508-358</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>10 mL Pipettes sérologiques</td><td>VWR</td><td>414004-267</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>100-1000 & micro ; L Pointes de pipette filtrées</td><td>VWR</td><td>76322-164</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>15 mL Tube conique</td><td>VWR</td><td>77508-212</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>20-200 & micro ; L Pointes de pipette filtrées</td><td>VWR</td><td>76322-160</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>2-Mercaptoethanol</td><td>MP Biomedical</td><td>194834</td><td>T Culture cellulaire</td></tr><tr><td>50 mL Tube conique</td><td>VWR</td><td>21008-736</td> Culture <td>cellulaire générale</td></tr><tr><td>Plat 60 x 15 mm, Nunclon Delta</td><td>Thermo Fischer</td><td>150326</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>96 Plaque inférieure conique (V), surface non traitée</td><td>Thermo Fischer</td><td>277143</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>Plaque à fond plat 96 puits</td><td>Thermo Fischer</td><td>161093</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 anti-humain CD272 (BTLA)</td><td>Biolégende</td><td>des anticorps 344518</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>Attune NxT (laser rouge/bleu, 7 canaux)</td><td>Thermo Fischer</td><td>A24863</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Thermo Fischer</td><td>15260-037</td><td>Cellule générale Culture</td></tr><tr><td>CD14 Anticorps monoclonal (61D3), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-0149-42</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>CD1c Anticorps monoclonal (L161), PE-Cyanine7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0015-42</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>CD209 (DC-SIGN) Anticorps monoclonal (eB-h209), PerCP-Cyanine5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>45-2099-42</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>CD25 Anticorps monoclonal (CD25-4E3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0257-42</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>CD274 (-L1, B7-H1) Anticorps monoclonal (MIH1), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-5983-42</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>CD4 Anticorps monoclonal (RPA-T4), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>53-0049-42</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>CD40 Anticorps monoclonal (5C3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0409-42</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>CD40 Anticorps monoclonal (5C3), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>47-0409-42</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>Anticorps monoclonal CD69 (FN50), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>MA1-10276</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>CD86 Anticorps monoclonal (BU63), FITC</td><td>Thermo Fischer</td><td>MHCD8601</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>Anticorps monoclonal CD8a (RPA-T8), PE-Cyanine7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0088-42</td><td>Cytométrie</td></tr> <tr><td>en fluxPlaque à 96 puits à fond conique (puits en V)</td><td>Thermo Fischer</td><td>2605</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>Flacons cryogéniques, 2 mL</td><td>Thermo Fischer</td><td>430488</td><td>T Culture cellulaire</td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO), grade de séquençage</td><td>Thermo Fischer</td><td>20688</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14200166</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>EasySep Kit d’isolement de</td> <td>monocytes humainsStem Cell Technologies</td><td>19359</td><td>Séparation cellulaire</td></tr><tr><td>EasySep Kit d’isolement de cellules T humaines</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>17951</td><td>Séparation cellulaire</td></tr><tr><td>EasySep Magnet</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>18000</td><td>Séparation cellulaire</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Thermo Fischer</td><td>AIM9260G</td><td>General Cell Culture</td></tr><tr><td>Falcon Tubes en polystyrène à fond rond, 5 mL</td><td>Technologies des cellules</td> <td>souches38025</td><td>Séparation cellulaire</td></tr><tr><td>Inhibiteur de liaison au récepteur Fc Anticorps polyclonal</td><td>Thermo Fischer</td><td>14-9161-73</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr>Sérum<td>fœtal bovin</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670701</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>Viabilité fixable Colorant eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>65-0865-18</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>Foxp3 / Facteur de transcription Ensemble de tampons de coloration</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-5523-00</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>FOXP3 Anticorps monoclonal (PCH101), PE-Cyanine5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>35-4776-42</td><td>Cytométrie</td></tr><tr><td>en flux HBSS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14170-112</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr>Sérum de<td>veau fœtal inactivé par la chaleur</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670801</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15630106</td><td>moDC Cell Culture</td></tr><tr><td>HLA-DR Anticorps monoclonal (L243), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>A51009</td><td>Cytométrie</td></tr><tr><td>en flux Activateur de cellules T humaines CD3/CD28/CD2 StemCell</td><td>Technologies</td><td>10970</td><td>Culture de cellules T</td></tr><tr><td>Protéine recombinante humaine GM-CSF</td><td>Thermo Fischer</td><td>300-03</td><td>moDC Culture cellulaire</td></tr><tr><td>humaine IL-10 Kit ELISA, haute sensibilité</td><td>Thermo Fischer</td><td>BMS215-2HS</td><td>Test ELISA</td></tr><tr><td>IL-4 humaine, protéine recombinante exempte d’animaux</td><td>Thermo Fischer</td><td>AF-200-04</td><td>moDC Culture cellulaire</td></tr><tr><td>humaine PBMC (fraîchement isolée)</td><td>UPenn HIC</td><td>N/A</td><td>Cells</td></tr><tr><td>Human TNF alpha ELISA Kit</td><td>Thermo Fischer</td><td>BMS223-4</td><td>ELISA</td></tr><tr><td>Microscope optique (DMi1)</td><td>Lucia</td><td>391240</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>Lipopolysaccaride (LPS)</td><td>Invivogen</td><td>tlrl-eblps</td><td>moDC CELL CULTURE</td></tr><tr><td>LIVE / DEAD Kit de coloration à cellules mortes fixable dans le proche infrarouge</td><td>Thermo Fischer</td><td>L34975</td><td>Cytométrie en flux</td></tr><tr><td>MEM Solution d’acides aminés non essentiels (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>11140050</td><td>T Cell Culture</td></tr><tr><td>Pénicilline-Streptomycine (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15140122</td><td>General Cell</td></tr><tr><td>Culture Pipette Controller</td><td>VWR</td><td>77575-370</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr><tr><td>Rapamycine, 98+ %</td><td>Thermo Fischer</td><td>J62473. MF</td><td>moDC Culture</td></tr><tr><td>cellulaire RPMI 1640 avec Glutamax</td><td>Thermo Fischer</td><td>61870-036</td> Tampon <td>de séparation de culture cellulaire générale</td></tr><tr><td></td><td>Stem Cell Technologies</td><td>20144</td><td>Séparation cellulaire</td></tr><tr><td>Cocktail de stimulation des cellules T (500x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-4970-93</td><td>Culture cellulaire</td></tr><tr><td>T UltraComp eBead Plus Perles de compensation</td><td>Thermo Fischer</td><td>01-3333-41</td><td>Flow Cytométrie</td></tr><tr><td>Jeu de pipettes variables</td><td>Fischer Scientific</td><td>05-403-152</td><td>Culture cellulaire générale</td></tr></tbody></table>

méthode simple et efficace pour tester des agents immunomodulateurs pour la génération de cellules dendritiques tolérogènes à partir de monocytes cd14+ humains

A Simple and Efficient Method for Testing Immunomodulatory Agents for Generation of Tolerogenic Dendritic Cells from Human CD14+ Monocytes

Nous avons décrit un protocole pour les PBMC humains, isolé à la fois les lymphocytes T CD3+ et les monocytes CD14+ à l’aide de kits de séparation magnétique disponibles dans le commerce, différencié les monocytes en moDC CD14-, HLA-DR+, CD141+, CD1c+ à l’aide de GM-CSF et IL-4, les traitons pendant 24 h, et co-cultivons avec des lymphocytes T autologues avec stimulation anti-CD3/CD28 pendant 72 h. Un schéma expérimental est illustré à <strong class="xfig"...

Méthode simple et efficace pour tester des agents immunomodulateurs pour la génération de cellules dendritiques tolérogènes à partir de monocytes CD14+ humains

Tolerogenic dendritic cells (tolDCs) are a subset of dendritic cells (DCs) that are known to influence na&#239;ve T cells toward a regulatory T cell ...

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Immunologie et infection

Présentation de l'antigène dans les organes lymphoïdes secondaires par des cellules dendritiques est crucial pour l'initiation de la cellule T médiée réponse immunitaire adaptative. Ici nous démontrons la culture de la moelle osseuse des cellules dendritiques dérivées de souris, l'activation et d'étiquetage pour les deux photons d'imagerie.

Génération de la moelle osseuse des cellules dendritiques dérivées murin pour l&#39;utilisation dans l&#39;imagerie 2-photons

Cette vidéo montre la génération de cellules dendritiques immatures, matures et tolérogènes, ou DC, à partir de monocytes humains. L’incubation des monocytes avec des facteurs de croissance et des cytokines conduit à la production de CD immatures. En réponse aux molécules régulatrices immunitaires, les CD immatures se différencient en CD tolérogènes et matures.

Génération de cellules dendritiques immatures, matures et tolérogènes à partir de monocytes

Cette vidéo présente une méthode de conversion de cellules dendritiques (DC) en DC tolérogènes (TolDCs) à l’aide d’un agent pharmacologique immunomodulateur. Cette conversion est confirmée par l’évaluation de la fonction de TolDC à travers leur effet immunosuppresseur sur les lymphocytes T CD4+.

Effet d’un agent pharmacologique immunomodulateur sur l’interaction entre les cellules dendritiques et les lymphocytes T CD4+

Les cellules dendritiques immatures peuvent être différenciées sélectivement en cellules dendritiques tolérogènes ou matures pour réguler l’équilibre entre l’immunité et la tolérance. Ce travail présente un moyen de générer à partir de cellules dendritiques (moDC) dérivées de monocytes immatures, des moDC tolérogènes in vitro et matures qui diffèrent par leurs phénotypes métaboliques.

Génération de Immature, d&#39;âge mûr et tolérogène cellules dendritiques avec Metabolic Différentes phénotypes

Cette étude compare deux méthodes différentes d’isolement de monocytes humains pour obtenir des cellules dendritiques (DC) in vitro. Les monocytes sont sélectionnés par adhérence ou enrichis négativement par séparation magnétique. Le rendement et la viabilité des monocytes ainsi que la viabilité, la prolifération et l’expression des marqueurs de surface CD11c/CD14 seront comparés entre les deux méthodes.

Caractérisation des monocytes dérivées des cellules dendritiques humaines par imagerie cytométrie de flux: une comparaison entre deux protocoles monocytes d&#39;isolement

Ici, nous démontrons comment les monocytes sont isolés par séparation par billes magnétiques des cellules mononucléées du sang périphérique après centrifugation par gradient de densité du sang anticoagulé humain. Après une incubation de 5 jours, les monocytes humains sont différenciés en cellules dendritiques immatures et sont prêts pour des procédures expérimentales dans un cadre non clinique.

Génération de cellules humaines dérivées de monocytes dendritiques du sang total

Nous présentons ici un protocole visant à développer et caractériser les cellules dendritiques tolérogène (TolDCs) et évaluer leur utilité immunothérapeutique.

Développement et caractérisation fonctionnelle des cellules dendritiques tolérogène murin

Le dispositif de transimmunization (TI) ou la plaque et les protocoles connexes ont été élaborés pour reproduire les principales caractéristiques de la photochimiothérapie extracorporeuse (ECP), dans un contexte expérimental, permettant la production de cellules dendritiques activables physiologiquement activées et réglables cellules (DCs) pour l’immunothérapie du cancer.

Nouveau protocole pour la génération de cellules dendritiques immunogéniques physiologiques

Ici nous présentons un protocole pour l'augmentation in vivo de l'induction réglementaire de cellule T d'intestin-homing. Dans ce protocole, les cellules dendritiques sont conçues pour produire localement des concentrations élevées de la vitamine Active D (1,25-dihydroxyvitamin D ou 1,25[OH]2D) et de la vitamine A active (acide rétinoïque ou RA) de novo.

In Vivo Augmentation of Gut-Homing Regulatory T Cell Induction

La méthodologie décrit la génération de cellules dendritiques dérivées de monocytes bovins (MoDC) et leur application pour l’évaluation in vitro de candidats antigéniques au cours du développement de vaccins vétérinaires potentiels chez les bovins.

Détermination de l’immunogénicité du vaccin à l’aide de cellules dendritiques dérivées de monocytes bovins

Un protocole unique et complet pour générer des cellules dendritiques dérivées de monocytes humains désialylés (mo-DCs) à partir de cellules mononucléées isolées du sang périphérique (PBMC) à l’aide d’un traitement à la sialidase est présenté. De plus, des méthodes permettant d’évaluer la caractérisation phénotypique et fonctionnelle des mo-DC et d’évaluer comment le traitement à la sialidase améliore le niveau de maturation des mo-DC sont décrites.

Génération de cellules dendritiques dérivées de monocytes avec différents phénotypes sialylés

Découvrez une méthode pour générer des cellules dendritiques tolérogènes à partir de monocytes CD14+ humains en utilisant des agents immunomodulateurs. Cette approche permet d'induire des cellules T régulatrices pour la recherche en immunologie.

Méthode simple et efficace pour tester des agents immunomodulateurs pour la génération de cellules dendritiques tolérogènes à partir de monocytes CD14+ humains (Vidéo) | JoVE Journal

Méthode simple et efficace pour tester des agents immunomodulateurs pour la génération de cellules dendritiques tolérogènes à partir de monocytes CD14⁺ humains

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