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Immunologie
0 vues • 2:40 min • July 8th, 2025
Commencez par ajouter un agent pharmacologique immunomodulateur aux cellules dendritiques immatures, ou DC.
Les DC expriment un complexe majeur d’histocompatibilité, ou molécule de classe II du CMH et des molécules co-stimulatrices, cruciales pour favoriser la prolifération des lymphocytes T pendant les réponses immunitaires.
L’agent immunomodulateur s’engage avec la DC et déclenche la régulation négative du CMH de classe II et l’expression des molécules co-stimulatrices, convertissant ainsi la DC en une cellule dendritique tolérogène ou TolDC.
Co-culture de TolDC avec des lymphocytes T CD4+ naïfs.
Ajouter un peptide antigénique à la co-culture.
Les TolDC internalisent le peptide, puis traitent et chargent l’antigène résultant sur la molécule du CMH.
La molécule du CMH liée à l’antigène se déplace vers la membrane cellulaire.
Leslymphocytes T CD4+ naïfs interagissent directement avec le complexe antigène-CMH sur les TolDC.
L’interaction avec la molécule de co-stimulation sur le DC mature permet l’activation complète de la cellule T naïve.
Sans costimulation, le lymphocyte T CD4+ naïf reste dormant et ne peut pas initier de réponse immunitaire contre l’antigène présenté.
Remettez les cellules en suspension à une concentration de 2 x 105 cellules dendritiques par millilitre, et traitez-les avec la concentration expérimentale appropriée du triterpénoïde d’intérêt pendant 1 heure à 37 degrés Celsius.
Au cours du dernier tiers de l’incubation, remettre les lymphocytes T en suspension à une concentration de 1 x 10 cellules par millilitre et à 1 CFSE micromolaire pendant 15 minutes à 37 degrés Celsius. Ensuite, lavez les cellules avec du PBS et réajustez le volume à une concentration finale de 2 x 106 cellules T par millilitre.
Co-cultivez 100 microlitres de cellules dendritiques traitées avec 100 microlitres de cellules T CD4 CD4 positives marquées au CFSE dans chaque puits d’une plaque de 96 puits, et ajoutez 100 nanogrammes par millilitre de peptide OVA 322-329 aux cellules, en mesurant l’intensité CFSE des lymphocytes T par cytométrie en flux après 2 à 3 jours d’incubation.