Name: Quantification de l’absorption des acides gras endothéliales à l’aide d’analogues d’acides gras fluorescents (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-15T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Découvrez comment quantifier l'absorption des acides gras dans les cellules endothéliales à l'aide d'analogues fluorescents BODIPY. Cette méthode in vitro permet d'étudier le métabolisme lipidique et d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques pour les maladies métaboliques.

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<ol><li>Schwenk, R. W., Holloway, G. P., Luiken, J. J. F. P., Bonen, A., Glatz, J. F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+transport+across+the+cell+membrane%3A+regulation+by+fatty+acid+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Leukot+Essent+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Fatty acid transport across the cell membrane: regulation by fatty acid transporters.</a> Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 82 (4-6), 149-154 (2010).</li>
<li>He, Q., Chen, Y., Wang, Z., He, H., Yu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+uptake%2C+metabolism+and+sensing+of+long-chain+fatty+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Landmark+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Cellular uptake, metabolism and sensing of long-chain fatty acids.</a> Front Biosci (Landmark Ed). 28 (1), 10(2023).</li>
<li>Mashek, D. G., Coleman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+fatty+acid+uptake%3A+the+contribution+of+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Cellular fatty acid uptake: the contribution of metabolism.</a> Curr Opin Lipidol. 17 (3), 274-278 (2006).</li>
<li>Jang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+branched-chain+amino+acid+metabolite+drives+vascular+fatty+acid+transport+and+causes+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A branched-chain amino acid metabolite drives vascular fatty acid transport and causes insulin resistance.</a> Nat Med. 22 (4), 421-426 (2016).</li>
<li>Hagberg, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+B+controls+endothelial+fatty+acid+uptake%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor B controls endothelial fatty acid uptake.</a> Nature. 464 (7290), 917-921 (2010).</li>
<li>Hwangbo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+APLNR+regulates+tissue+fatty+acid+uptake+and+is+essential+for+apelin%27s+glucose-lowering+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial APLNR regulates tissue fatty acid uptake and is essential for apelin's glucose-lowering effects.</a> Sci Transl Med. 9 (407), eaad4000(2017).</li>
<li>Ibrahim, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin-stimulated+adipocytes+secrete+lactate+to+promote+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Insulin-stimulated adipocytes secrete lactate to promote endothelial fatty acid uptake and transport.</a> J Cell Sci. 135 (5), jcs258964(2022).</li>
<li>Kuo, A., Lee, M. Y., Sessa, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+droplet+biogenesis+and+function+in+the+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Lipid droplet biogenesis and function in the endothelium.</a> Circ Res. 120 (8), 1289-1297 (2017).</li>
<li>Ibrahim, A., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+endothelium+buffer+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Does endothelium buffer fat.</a> Circ Res. 120 (8), 1219-1221 (2017).</li>
<li>Kim, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+lipid+droplets+suppress+eNOS+to+link+high-fat+consumption+to+blood+pressure+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Endothelial lipid droplets suppress eNOS to link high-fat consumption to blood pressure elevation.</a> J Clin Invest. 133 (24), e173160(2023).</li>
<li>Dubikovskaya, E., Chudnovskiy, R., Karateev, G., Park, H. M., Stahl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+long-chain+fatty+acid+uptake+into+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Measurement of long-chain fatty acid uptake into adipocytes.</a> Methods Enzymol. 538, 107-134 (2014).</li>
<li>Watkins, O. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+13C-labeled+fatty+acids+in+term+human+placental+explants+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Metabolism of 13C-labeled fatty acids in term human placental explants by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Endocrinology. 160 (6), 1394-1408 (2019).</li>
<li>Spangenburg, E. E., Pratt, S. J. P., Wohlers, L. M., Lovering, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+BODIPY+%28493%2F503%29+to+visualize+intramuscular+lipid+droplets+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Use of BODIPY (493/503) to visualize intramuscular lipid droplets in skeletal muscle.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 598358(2011).</li>
<li>Fraser, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid+uptake+in+diabetic+rat+adipocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fatty acid uptake in diabetic rat adipocytes.</a> Mol Cell Biochem. 167 (1-2), 51-60 (1997).</li>
<li>Ibrahim, A., Yucel, N., Kim, B., Arany, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+mitochondrial+ATP+production+regulates+endothelial+fatty+acid+uptake+and+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Local mitochondrial ATP production regulates endothelial fatty acid uptake and transport.</a> Cell Metab. 32 (2), 309-319.e7 (2020).</li>
<li>Mehling, M., Tay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microfluidic cell culture.</a> Curr Opin Biotechnol. 25, 95-102 (2014).</li>
<li>Zhao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Methods+Primers%22%5BJournal%5D)">Organoids.</a> Nat Rev Methods Primers. 2 (1), 1-21 (2022).</li>
<li>Maiullari, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+breast+cancer+dynamics+through+modulable+small+vessel+environment+bioreactor+%28sVEB%29%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Modeling breast cancer dynamics through modulable small vessel environment bioreactor (sVEB).</a> Biomaterials. 323, 123441(2025).</li>
<li>Murphy, A. R., Franco, R. A., Allenby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fabricating+microfluidic+co-cultures+of+immortalized+cell+lines+uncovers+robust+design+principles+for+the+simultaneous+formation+of+patterned%2C+vascularized%2C+and+stem+cell-derived+adipose+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Fabricating microfluidic co-cultures of immortalized cell lines uncovers robust design principles for the simultaneous formation of patterned, vascularized, and stem cell-derived adipose tissue.</a> Small. , e2501834(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-hydroxyisobutyrate (3-HIB)</td><td>Cayman Chemicals</td><td>26105</td><td>Contrôle positif, concentration finale de 5 ou 20 mM</td></tr><tr><td>Microplaque de polystyrène noire à fond transparent à 96 puits</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3603-48EA</td><td>Pour analyser les cellules de placage</td></tr><tr><td>BODIPY FL C12 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3822</td><td>Acide gras fluorescent vert à chaîne longue</td></tr><tr><td>BODIPY FL C16 (Bodipy-FA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3821</td><td>Acides gras verts fluorescents très longue</td></tr><tr><td>Solution d’albumine sérique bovine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9205-50ML</td><td>Utilisé pour préparer le complexe Bodipy :BSA</td></tr><tr><td>Diméthylsulfoxyde (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>Solvant pour les actions pharmaceutiques</td></tr><tr><td>Réservoirs de pipet jetables</td><td>VWR</td><td>89094-680</td><td>Contient les différentes solutions à pipeter sur les cellules</td></tr><tr><td>Dulbecco » s Modified Eagle s Medium</td><td>Corning Life Sciences</td><td>10-013-CV</td><td>Supports pour cellules EA.hy926</td></tr><tr><td>Cellules EA.hy926</td><td>ATCC</td><td>CRL-2922&nbsp ;</td><td>Lignée hybride cellulaire endothéliale immortalisée</td></tr><tr><td>EGM-2 Milieu de croissance cellulaire endothéliale-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td>Médias pour les HUVECs</td></tr><tr><td>Sérum fœtal-bovin (FBS) & nbsp ;</td><td>VWR</td><td>97068-085</td><td>Supplément de 10 % en EGM-2 et DMEM</td></tr><tr><td>Lecteur de microplaques à fluorescence</td><td>Divers</td><td>N/A</td><td>Tout lecteur de microplaques capable de mesurer la fluorescence</td></tr><tr><td>Solution de gélatine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1393-100ml</td><td>Utilisé pour recouvrir les plaques à 0,1 % de concentration de travail</td></tr><tr><td>Hoechst 33342 Solution</td><td>Sciences de la vie</td><td>62249</td><td>Coloration nucléaire pour la normalisation cellulaire (4 & mu ; M)</td></tr><tr><td>Cellules endothéliales des veines ombilicales humaines (HUVEC)</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td>Cellules endothéliales humaines primaires</td></tr><tr><td>Pipette multicanal</td><td>VWR</td><td>76627-768</td><td>Pour la pipetage dans une plaque à 96 puits</td></tr><tr><td>Niclosamide &nbsp ;</td><td>Millipore Sigma</td><td>N3510-50G</td><td>Témoins négatif, 1 & mu ; M&nbsp ; Concentration finale</td></tr><tr><td>PBS, avec du calcium et du magnésium</td><td>Fisher Scientific</td><td>21031CV</td><td>Utilisé pour préparer des traitements et comme tampon de lavage (avec BSA)</td></tr><tr><td>PBS, sans calcium ni magnésium</td><td>Genesee Scientific</td><td>25-508</td><td>Pour la dilution de la gélatine, la coloration Hoechst et les lavis généraux</td></tr><tr><td>Pénicilline/Streptomycine</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>supplément de 1 % dans l’EGM-2 et le DMEM</td></tr><tr><td>Sodium L-lactate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L7022-5G</td><td>Contrôle positif, concentration finale de 5 ou 20 mM</td></tr><tr><td>Solution Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8154-20ML</td><td>Utilisé à 0,08 % pour éteindre la fluorescence extracellulaire</td></tr><tr><td>Systèmes de filtres à vide, membrane PES de 500 ml, 0,45 & micro ; m</td><td>GenClone</td><td>25-227</td><td>Stériliser la solution de gélatine</td></tr></tbody></table>

quantification de l’absorption des acides gras endothéliales à l’aide d’analogues d’acides gras fluorescents

Quantification of Endothelial Fatty Acid Uptake using Fluorescent Fatty Acid Analogs

Quantification de l’absorption des acides gras endothéliales à l’aide d’analogues d’acides gras fluorescents

Endothelial cells (ECs) play a central role in regulating fatty acid (FA) transport from the bloodstream into metabolic tissues, yet tools to quantify EC ...

quantification-endothelial-fatty-acid-uptake-using-fluorescent-fatty

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Biology

Biologie

Dans cette vidéo, nous démontrons une technique ex vivo pour mesurer l’épuisement extracellulaire des analogues du glucose dans les organes de souris prélevés. Il s’agit d’incuber le tissu de la souris dans une solution contenant du désoxyglucose marqué par fluorescence, qui est absorbé par les cellules. L’absorption des analogues du glucose peut être déterminée indirectement en mesurant la fluorescence du milieu incubé.

Mesure de la déplétion extracellulaire en analogue du glucose fluorescent : une technique de mesure de substitution pour évaluer l’absorption du glucose dans les organes de souris ex vivo

Nous rapportons une méthode in vitro qui permet de quantifier le nombre réel de cellules adhésives au sein d’une monocouche de cellules endothéliales.

La quantification des cellules endothéliales adhésivité<em&gt; In Vitro</em

Nous fournissons un protocole détaillé pour étudier la dynamique des acides biliaires dans les cellules vivantes à l’aide d’un capteur BAS FRET génétiquement codé. Ce capteur d’acides biliaires représente un outil unique pour étudier (la régulation du) transport des acides biliaires et l’activation du FXR dans un large éventail de types de cellules.

Surveillance en temps réel des intracellulaire des acides biliaires Dynamics en utilisant un capteur acides biliaires base-FRET codées génétiquement

Cellules endothéliales primaires de la veine ombilicale humaine (HUVECs) ont été cultivées jusqu’à la confluence au sein d’un dispositif de réseau microfluidique. La jonction cellulaire endothéliale et les distributions de l’actine F ont été illustrées et les changements dans la concentration intracellulaire de calcium et la production d’oxyde nitrique en réponse à l’adénosine triphosphate (ATP) ont été quantifiés en temps réel au niveau cellulaire individuel.

Développement et caractérisation de<em&gt; In vitro</em&gt; Microvaisseaux réseau et des mesures quantitatives de l&#39;endothélium [Ca<sup&gt; 2+</sup&gt;]<sub&gt; i</sub&gt; Et production d&#39;oxyde nitrique

Endothélium vasculaire contrôle étroitement le recrutement des leucocytes. Extravasation de leucocyte inadéquate contribue aux maladies inflammatoires humaines. La recherche de nouveaux éléments régulateurs d’activation endothéliale est donc nécessaire de concevoir des traitements améliorés pour troubles inflammatoires. Nous décrivons ici une méthodologie globale afin de caractériser les nouveaux régulateurs endothéliales qui peuvent de modifier leucocytes traite au cours de l’inflammation.

Dépistage des essais pour caractériser les nouveaux régulateurs endothéliales impliqués dans la réponse inflammatoire

Les méthodes traditionnelles d’évaluation de la différenciation adipocytaire sont bon marché et facile à utiliser, mais ne sont pas spécifiques aux changements dans l’expression des gènes. Nous avons développé un test afin de quantifier la différenciation des cellules mésenchymateuses en adipocytes matures à l’aide d’un marqueur spécifique de la lignée. Ce dosage a diverses applications dans la recherche fondamentale et de la médecine clinique.

Visualisation et la Quantification du potentiel de différenciation des cellules mésenchymateuses adipocytaire avec un marqueur spécifique de la lignée

Ce protocole prévoit une approche efficace pour mesurer l’absorption de cholestérol LDL avec des taux de flux en temps réel à l’aide d’un système dans divers types de cellules d’imagerie de cellules vivantes. Cette technique fournit une plate-forme pour l’activité pharmacologique de composés affectant les afflux de LDL tout en surveillant pour la morphologie cellulaire et cytotoxicité donc potentielle de l’écran.

Test d’absorption LDL cholestérol analyse avec cellule d’imagerie de cellules vivantes surveillance sanitaire

Mesure de la capacité de l’efflux de cholestérol in vitro de sérum ou de plasma dans les modèles de cellules macrophages est un outil prometteur comme biomarqueur d’athérosclérose. Dans la présente étude, nous optimiser et uniformiser une méthode d’efflux de cholestérol NBD fluorescente et développer une analyse de haut-débit à l’aide de plaques de 96 puits.

Haut-débit Nitrobenzoxadiazole marqué cholestérol Efflux Assay

Les essais automatisés utilisant des microplaques multi-puits sont des approches avantageuses pour identifier les régulateurs de voie en permettant l’évaluation d’une multitude de conditions dans une seule expérience. Ici, nous avons adapté le protocole bien établi d’imagerie et de quantification des macropoinosomes à un format de microplaques à 96 puits et fournissons un aperçu complet de l’automatisation à l’aide d’un lecteur de plaques multimode.

Imagerie et analyse automatisées pour la quantification des macropinosomes marqués par fluorescence

Ici, nous démontrons un protocole optimisé basé sur la fluorescence BODIPY 493/503 pour la caractérisation des gouttelettes lipidiques dans le tissu hépatique. Grâce à l’utilisation de projections orthogonales et de reconstructions 3D, le fluorophore permet une discrimination réussie entre la stéatose microvésiculeuse et macrovésiculeuse et peut représenter une approche complémentaire aux protocoles histologiques classiques pour l’évaluation de la stéatose hépatique.

Analyse de gouttelettes lipidiques colorées par fluorescence avec reconstruction 3D pour l’évaluation de la stéatose hépatique

Découvrez comment quantifier l'absorption des acides gras dans les cellules endothéliales à l'aide d'analogues fluorescents BODIPY. Cette méthode in vitro permet d'étudier le métabolisme lipidique et d'identifier de nouvelles cibles thérapeutiques pour les maladies métaboliques.

Quantification de l’absorption des acides gras endothéliales à l’aide d’analogues d’acides gras fluorescents

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