Name: Une méthode simple et rapide pour l’isolement simultané des îlots primaires et des cellules acinares pancréatiques primaires à partir de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Découvrez une méthode simplifiée pour isoler simultanément les îlots pancréatiques et les cellules acineuses primaires de souris. Cette technique accessible sans perfusion spécialisée facilite l'étude des interactions endocrino-exocrines dans la pathogenèse du diabète.

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<ol><li>Manrai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+as+a+consequence+of+acute+severe+pancreatitis%3A+unraveling+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus as a consequence of acute severe pancreatitis: unraveling the mystery.</a> World J Diabetes. 14 (8), 1212-1225 (2023).</li>
<li>García-Compeán, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+pancreatitis+diabetes%3A+a+complication+waiting+for+more+recognition+and+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Post-acute pancreatitis diabetes: a complication waiting for more recognition and understanding.</a> World J Gastroenterol. 29 (28), 4405-4415 (2023).</li>
<li>Shen, H. N., Yang, C. C., Chang, Y. H., Lu, C. L., Li, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+diabetes+mellitus+after+first-attack+acute+pancreatitis%3A+a+national+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk of diabetes mellitus after first-attack acute pancreatitis: a national population-based study.</a> Am J Gastroenterol. 110 (12), 1698-1706 (2015).</li>
<li>Hohmeier, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+INS-1-derived+cell+lines+with+robust+ATP-sensitive+K%E2%81%BA+channel-dependent+and+-independent+glucose-stimulated+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation of INS-1-derived cell lines with robust ATP-sensitive K⁺ channel-dependent and -independent glucose-stimulated insulin secretion.</a> Diabetes. 49 (3), 424-430 (2000).</li>
<li>Hohmeier, H. E., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from pancreatic islets.</a> Mol Cell Endocrinol. 228 (1-2), 121-128 (2004).</li>
<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> J Vis Exp. (88), e50374(2014).</li>
<li>Villarreal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-efficiency+protocol+for+pancreatic+islet+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple high-efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice.</a> J Vis Exp. (150), e57048(2019).</li>
<li>Huang, C., Gu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+isolation+of+functional+islets+from+neonatal+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Effective isolation of functional islets from neonatal mouse pancreas.</a> J Vis Exp. (119), e55160(2017).</li>
<li>Petrov, M. S., Yadav, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+and+holistic+prevention+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology and holistic prevention of pancreatitis.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (3), 175-184 (2019).</li>
<li>Xiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+and+mortality+of+pancreatic+diseases%3A+a+systematic+review%2C+meta-analysis%2C+and+meta-regression+of+population-based+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global incidence and mortality of pancreatic diseases: a systematic review, meta-analysis, and meta-regression of population-based cohort studies.</a> Lancet Gastroenterol Hepatol. 1 (1), 45-55 (2016).</li>
<li>Sendler, M., Weiss, F. U., Golchert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+B-mediated+activation+of+trypsinogen+in+endocytosing+macrophages+increases+severity+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Cathepsin B-mediated activation of trypsinogen in endocytosing macrophages increases severity of pancreatitis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (3), 704-718.e10 (2018).</li>
<li>Modenbach, J. M., Möller, C., Asgarbeik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+analyses+of+cystatin-C+dimers+and+cathepsin-B+reveals+a+trypsin-driven+feedback+mechanism+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Biochemical analyses of cystatin-C dimers and cathepsin-B reveals a trypsin-driven feedback mechanism in acute pancreatitis.</a> Nat Commun. 16 (1), 1702(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,22 & mu ; Filtre m</td><td>Millex</td><td>SLGPR33RB</td><td>Filtrez la solution de collagénase P préparée</td></tr><tr><td>0,25 M chlorure de calcium (stérile)</td><td>Beyotime</td><td>ST365</td><td>Voie de signalisation dépendante du calcium pour activer la sécrétion d’insuline</td></tr><tr><td>1 ml de seringue</td><td>Jierui</td><td>10084692516405</td><td>Utilisé pour la perfusion de collagénase P dans le tissu pancréatique.</td></tr><tr><td>Solution de tribromoéthanol à 1,25 %</td><td>Beijing Yosida Biotechnology Co., Ltd.</td><td>JT0781</td><td>Anesthésie</td></tr><tr><td>Tube centrifugeuse de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121589</td><td>Collectez le surnageant de la cellule pour centrifugation et stockage.</td></tr><tr><td>1x Hank' Solution salée équilibrée s</td><td>Biosharp</td><td>BL561A</td><td>Préparez la solution de collagénase P et rincez le tissu pancréatique</td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire à 12 puits</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3921</td><td>Conservez le tissu pancréatique et l’acinaire extrait de la culture</td></tr><tr><td>Tube centrifugeuse de 15 mL</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-15A</td><td>Maintien des solutions pendant l’expérience</td></tr><tr><td>Plaque de culture cellulaire à 24 puits</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3922</td><td>Culture des îlots extraits</td></tr><tr><td>40-maillage&nbsp ; Tamis</td><td>Weidan Instruments</td><td>N/A</td><td>Filtrer le tissu pancréatique</td></tr><tr><td>Pipette Pasteur de 5 mL</td><td>Biosharp</td><td>BS-XG-03L</td><td>Pipettage des liquides et perturbation physique du tissu pancréatique</td></tr><tr><td>Tube centrifugeuse de 50 mL</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-50A</td><td>Maintenir les solutions pendant l’expérience, contenir les tissus et centrifuger</td></tr><tr><td>Antennes de culture cellulaire de 60 mm</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>12211</td><td>Contenant pour stocker un milieu de culture contenant des îlots pour faciliter la cueillette</td></tr><tr><td>Solution d’éthanol à 75 %</td><td>HYNAUT</td><td>N/A</td><td>Faites tremper les souris pour les désinfecter.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 2023</td><td>Adobe Inc.</td><td>N/A</td><td>Générez des images.</td></tr><tr><td>Centrifugeuse Beckman Allegra X-12/X-12R</td><td>BECKMAN</td><td>Allegra X-12/X-12R</td><td>Centrifugeuse</td></tr><tr><td>Albumine sérique bovine (BSA)-V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td>Maintenez la fonction physiologique normale des îlots et utilisez (it/this) pour préparer des solutions de glucose à différentes concentrations.</td></tr><tr><td>C57BL/6J, SPF, 6 et ndash ; 8 semaines, 18 ans et dash ; 25 g</td><td>Centre des animaux de laboratoire de l’Université médicale navale & nbsp ;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de test de viabilité et cytotoxicité des cellules de calcéine/PI</td><td>Beyotime</td><td>C2015L</td><td>Détecter la viabilité cellulaire et la cytotoxicité des cellules animales à partir de la coloration à double fluorescence de Calcein-AM (Calcein AM) et de Propidium iodure (PI) simultanément des cellules viables et mortes.</td></tr><tr><td>Chlorure de calcium (anhydre)</td><td>Sangon Biotech</td><td>10043-52-4</td><td>Préparez la solution de collagénase P</td></tr><tr><td>Filtre cellulaire (100 et mu ; m)</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-XBS</td><td>Filtrage des cellules acinaires</td></tr><tr><td>Colagnase P</td><td>Sigma</td><td>11213857001</td><td>Tissu pancréatique digestif</td></tr><tr><td>Solution D-(+)-glucose (20 %, stérile)</td><td>Beyotime</td><td>ST491</td><td>Stimulez la sécrétion d’insuline des îlots.</td></tr><tr><td>DMEM de base (1x) (Dulbecco' s Eagle Medium modifié)</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Culture des cellules acinaires</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Biowest</td><td>S140B-500</td><td>Préparez le support culturel</td></tr><tr><td>Solution stérile PREMIUM Ficoll-Paque</td><td>Cytiva</td><td>17544203</td><td>Milieu du gradient de densité pour la stratification du gradient de densité</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0.1</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Générer des images et effectuer des analyses statistiques.</td></tr><tr><td>HEPES solution (1 M)</td><td>Biosharp</td><td>BL1061A</td><td>Préparez la solution de collagénase P</td></tr><tr><td>Centrifugeuse à grande vitesse/réfrigérée</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td>Centrifugeuse</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Laboratoire des Instituts Nationaux de Santé pour l’Instrumentation Optique et Computationnelle (LOCI)</td><td>N/A</td><td>Analyser les images de fluorescence cellulaire et calculer la viabilité cellulaire.</td></tr><tr><td>Microscope biologique inversé</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td>Observez la morphologie cellulaire et sélectionnez les îlots.</td></tr><tr><td>Microscope à fluorescence inversée</td><td>OLYMPUS</td><td>IX73</td><td>Observez les signaux fluorescents cellulaires et capturez des images fluorescentes.</td></tr><tr><td>Tampon Krebs-Ringer bicarbonate HEPES</td><td>LEAGENE</td><td>CZ0103</td><td>Maintenez la fonction physiologique normale des îlots et utilisez (it/this) pour préparer des solutions de glucose à différentes concentrations.</td></tr><tr><td>Kit ELISA INS (insuline) de souris</td><td>Wuhan Fine Biotech Co., Ltd.</td><td>EM0260</td><td>Détectez le niveau de sécrétion d’insuline des îlots.</td></tr><tr><td>Pinces ophtalmiques (10 cm, courbées avec crochet)</td><td>Dispositifs médicaux Qingyi</td><td>N/A</td><td>Assistez à la dissection</td></tr><tr><td>Pinces ophtalmiques (10 cm, droites avec dent)</td><td>Dispositifs médicaux Qingyi</td><td>N/A</td><td>Assister à la dissection et à la séparation soudaine du tissu pancréatique ainsi qu’à l’extraction du tissu pancréatique</td></tr><tr><td>Solution de pénicilline et de streptomycine</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Préparez le milieu de culture pour prévenir la contamination</td></tr><tr><td>RPMI-1640 moyen,</td><td>KeyGEN BioTECH</td><td>KGL1501-500</td><td>Terminez la solution digestive P de collagénase et cultivez les îlots</td></tr><tr><td>Inhibiteur de la trypsine de Glycine max (soja)</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Préparez la solution de collagénase P</td></tr><tr><td>Ciseaux chirurgicaux (10 cm, pointe droite)</td><td>Dispositifs médicaux Qingyi</td><td>N/A</td><td>Assistance anatomique et découpe du tissu pancréatique en petits morceaux</td></tr><tr><td>Bain d’eau</td><td>OAICLAB</td><td>AÏE-HUM</td><td>Maintenez la température de digestion.</td></tr><tr><td>Kit d’évaluation d’activité &alpha ;-amylase et &beta ;-amylase</td><td>Elabscience</td><td>E-BC-K006-M</td><td>Détecter les niveaux d’amylase sécrétés par les cellules acinaires dans différentes conditions</td></tr></tbody></table>

une méthode simple et rapide pour l’isolement simultané des îlots primaires et des cellules acinares pancréatiques primaires à partir de souris

A Simple and Rapid Method for Simultaneous Isolation of Primary Islets and Primary Pancreatic Acinar Cells from Mice

Une méthode simple et rapide pour l’isolement simultané des îlots primaires et des cellules acinares pancréatiques primaires à partir de souris

In the research on the pathogenesis of post-acute pancreatitis diabetes mellitus (PPDM-A), abnormal bidirectional communication between pancreatic acinar ...

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Une description détaillée de la souris îlot isolement est décrit en utilisant la technique de la ponction du pancréas in situ canalaire et la perfusion d'une combinaison de collagénase purifiée et la protéase neutre.

Souris îlot de Langerhans isolement à l&#39;aide d&#39;une combinaison de la collagénase purifiée et protéase neutre

Cette vidéo décrit la technique utilisée pour isoler les cellules acineuses pancréatiques - des cellules exocrines - contenant une variété d’enzymes digestives. Les cellules acineuses primaires sont utiles dans l’étude ex vivo de la métaplasie acineuse-canalaire (MAA), un événement précoce du développement du cancer du pancréas.

Isolement de cellules acineuses primaires : une méthode pour isoler des cellules acineuses du pancréas de souris

Les îlots pancréatiques, également appelés îlots de Langerhans, sont un amas de cellules endocrines qui produisent des hormones pour la régulation du glucose et d’autres fonctions biologiques importantes. Ce protocole explique une méthode pour isoler les îlots pancréatiques en perfusant d’abord la collagénase via l’ampoule de Vater pour digérer le tissu pancréatique exocrine et une centrifugation simplifiée par gradient de densité pour purifier les îlots des souris.

Isolement des îlots pancréatiques par perfusion de collagénase : une méthode enzymatique pour isoler les cellules des îlots pancréatiques

Le dosage in vitro la fonction β-cellulaire en utilisant des îlots isolés de souris de Langerhans est un élément important dans l'étude du diabète physiopathologie et la thérapeutique. Alors que de nombreuses applications en aval sont disponibles, ce protocole décrit précisément la mesure intracellulaire d'adénosine monophosphate cyclique (AMPc) comme un paramètre essentiel de déterminer la fonction β-cellulaire.

Une méthode pour la souris Isolement îlots pancréatiques et AMPc intracellulaire Détermination

Dans cette publication, nous décrivons une procédure rapide et pratique pour les cellules acineuses pancréatiques primaires culture du pancréas murin isoler et. Cette méthode constitue une approche intéressante à étudier la physiologie des cellules pancréatiques exocrines normales / non transformé primaires fraîches.

Isolement et culture de cellules primaires de souris acineuses du pancréas

Nous présentons ici un protocole pour l’isolement des îlots à partir du modèle murin de diabète de type 2, Leprdb et les détails d’un test sur cellules vivantes pour la mesure de la sécrétion d’insuline à partir d’îlots intacts qui utilise la microscopie à 2 photons.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Modèle de souris de diabète de type 2: pancréatique isolement des îlots et des cellules vivantes 2-Photon Imaging d&#39;îlots intacts

Nous décrivons ici un protocole pour isoler les îlots intacts de souris néonatales. Pancreata ont été partiellement digéré avec de la collagénase, suivi d'un lavage et cueillette à la main. 20 - 80 amas d'îlots peuvent être obtenus par le pancréas de souris nouveau-nés, qui sont appropriés pour de nombreuses études d'îlots.

Isolation efficace des îlots fonctionnels de néonatales Pancréas souris

Ce protocole d'isolement d'îlots a décrit une nouvelle voie d'injection de collagène pour digérer le tissu d'exocrine et une procédure simplifiée de gradient pour purifier les îlots des souris. Il s'agit de la digestion enzymatique, de la séparation/purification des gradients et de la cueillette manuelle des islets. L'isolement réussi peut donner 250-350 îlots de haute qualité et entièrement fonctionnels par souris.

Un protocole simple à haut rendement pour l'isolement des îlettes pancréatiques des souris

Nous présentons ici un protocole visant à isoler les cellules des îlots pancréatiques souris pour contrôler les inductions de ROS par les xénobiotiques afin d’identifier les potentiels chimiques xénobiotiques diabétogène.

Un îlots pancréatiques Murine Cell-based Screening for diabétogène Environmental Chemicals

Ici, nous présentons un protocole pour la formation image et la quantification de la dynamique du calcium dans les populations cellulaires hétérogènes, telles que les cellules des isfètes pancréatiques. Les reporters fluorescents sont livrés dans la couche périphérique des cellules dans l'înet, qui est alors immobilisé et image, et l'analyse par cellule de la dynamique de l'intensité de fluorescence est effectuée.

Imagerie de la dynamique du calcium dans les sous-populations de cellules d'islet pancréatique de souris

Ce protocole décrit une méthode standardisée pour la prélèvement chirurgical, la digestion enzymatique et la purification par gradient de densité des îlots pancréatiques de rat Lewis, permettant des préparations à haut rendement et à haute pureté pour une utilisation directe dans des études de transplantation ou in vitro .

Isolement et purification des îlots pancréatiques à partir de rats de Lewis grâce à la digestion enzymatique et à la séparation par gradient de densité

Découvrez une méthode simplifiée pour isoler simultanément les îlots pancréatiques et les cellules acineuses primaires de souris. Cette technique accessible sans perfusion spécialisée facilite l'étude des interactions endocrino-exocrines dans la pathogenèse du diabète.

Une méthode simple et rapide pour l’isolement simultané des îlots primaires et des cellules acinares pancréatiques primaires à partir de souris (Vidéo) | JoVE Journal

Une méthode simple et rapide pour l’isolement simultané des îlots primaires et des cellules acinares pancréatiques primaires à partir de souris

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