Name: הכנה סטנדרטית של תא בודד השעיות מתוך רקמת הריאה באמצעות עכבר Dissociator gentleMACS (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-02T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: למד שיטה סטנדרטית להכנת תליית תאים בודדים מרקמת ריאה של עכברים באמצעות gentleMACS. הפרוטוקול משתמש בקולגנאז D ו-DNase לפירוק יעיל של תאים חיים ליישומים נוספים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

הכותבים הם עובדי Miltenyi BIOTEC GmbH, גרמניה.

כדי לעבוד בתנאים סטריליים, מומלץ לבצע את כל השלבים ברדס זרימה למינרית. 1. חומרים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> HEPES חיץ: 10 mM HEPES-NaOH pH 7.4, 150 mM NaCl, KCl 5 mM, 1 mM MgCl 2, 1.8 mM CaCl 2) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Collagenase פתרון D: collagenase D: 100 מ"ג / מ"ל ​​(collagenase D&gt; 0.15 U / מ"ג), ב HEPES חיץ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> DNase פתרון אני: 20,000 U / mL DNase אני </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PBS חוצץ ב-pH 7.2 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> PEB חיץ: 1 חלק BSA במלאי פתרון ב 20 חלקים autoMACS פתרון שטיפה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמות: ריאות הנגזרות 6 / 7 שבוע הישן נקבה בוגרת BALB / C העכבר, ללא איברים סמוכים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אופציונלי: microbeads CD11c, MACS עמודות MS, MACS מפריד עבור בידוד של תאים דנדריטים מן ההשעיה ריאות תא בודד העכבר </li></ol> 2. Dissociating רקמת הריאה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לשטוף את רקמת בצלחת פטרי המכילות PBS להסיר אריתרוציטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברה מרבי של רקמת הריאה עד 450 מ"ג Tube gentleMACS C המכיל 4.9 מ"ל HEPES חיץ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 100 μL פתרון D collagenase לריכוז סופי של 2 מ"ג / מ"ל ​​collagenase ד </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 פתרון μL DNase אני בעד רקמה 150 מ"ג (הריכוז הסופי של 40 U / ml DNase אני) או 20 μL DNase אני עבור רקמת הריאה 150-450 מ"ג (הריכוז הסופי של 80 U / mL DNase אני). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזק לסגור את Tube C וצרף אותו על Dissociator gentleMACS. ואז להפעיל את התוכנית "m_lung_01". </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה למשך 30 דקות ב 37 מעלות עם סיבוב אוטומטי או ידני להפוך כל 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור מדגם Dissociator gentleMACS ולהפעיל את התוכנית "m_lung_02". </li></ol> 3. סינון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן צינורית 50 מ"ל לאיסוף תאים מסוננים על ידי החלפת מכסה עם מסננת רשת 70 מיקרומטר התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר תוכנית second gentleMACS מסתיים, בהתאם לחלוקת חומר מדגם בצינור, ייתכן צנטריפוגות הצינור קצר כדי לאסוף את החומר מדגם בחלק התחתון של הצינור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את התאים באמצעות כובע חתום של מחצה התחתית C באמצעות קצה מתאים 1000 פיפטה μl ולהחיל אותן על מסננת את התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו את מסננת תא עם חיץ HEPES 5 מ"ל ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה את התאים גלולה בצינור 50 מ"ל ב 300xg במשך 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant ו resuspend התא גלולה בהיקף הרצוי מאגר PEB. </li></ol> חלק 4: תוצאות נציג: <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig1.jpg" alt="איור 1"> באיור 1. הביאה ריאות דיסוציאציה עם ™ gentleMACS Dissociator בתאים קיימא 92%. תאים מתים היו מוכתמים fluorescently עם יודיד propidium (PI) (העלילה נקודה הנכונה; העלילה נקודה שמאל: לא מכתים PI). <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig2.jpg" alt="איור 2"> איור 2. דיסוציאציה של רקמת הריאה באמצעות העכבר את התוצאות Dissociator gentleMACS באחוז גבוה של לויקוציטים לתאי אנדותל קיימא. נגזר תא בודד השעיות הוכתמו CD45-PE ו-CD146 FITC או CD31-FITC ונותחו על ידי cytometry הזרימה. <img src="/files/ftp_upload/1266/1266figure2c.png" alt="איור 2C"> איור 3. תא בודד ההשעיה נבעה רקמת הריאה העכבר היה מוכתם CD11c-FITC ואנטי mPDCA-1-APC לאתר עכבר CD11c נמוך מ-PDCA-1 + DCs plasmacytoid כמו גם תאים גבוה CD11c. <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig4.jpg" alt="איור 4"> איור 4. והעשרה של תאים דנדריטיים באמצעות microbeads CD11c, מפריד MiniMACS ושני טורים MS.

<ol><li>Swanson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flt3-Ligand%2C+IL-4%2C+GM-CSF%2C+and+Adherence-Mediated+Isolation+of+Murine+Lung+Dendritic+Cells%3A+Assessment+of+Isolation+Technique+on+Phenotype+and+Function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function.</a> J. Immunol. 173, 4875-4881 (2004).</li>
<li>Vermaelen, K., Pauwels, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+and+simple+discrimination+of+mouse+pulmonary+dendritic+cell+and+macrophage+populations+by+flow+cytometry%3A+Methodology+and+new+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Accurate and simple discrimination of mouse pulmonary dendritic cell and macrophage populations by flow cytometry: Methodology and new insights.</a> Cytometry Part A. 61A, 170-177 (2004).</li>
</ol>

המחברים הם עובדים של חברת Miltenyi Biotec GmbH, המייצרת את המכשיר המשמש במאמר זה.

בסרטון הזה, אנו מציגים שיטה חדשה דיסוציאציה של רקמת הריאה העכבר. אנו מראים כי שילוב של טיפול מכני האנזימטית של רקמת הריאה הניבו אחוז גבוה של לויקוציטים לתאי אנדותל קיימא. באופן ספציפי, התפוררות מכנית של רקמת הושגה על ידי Dissociator gentleMACS. C צינורות gentleMACS כוללים הרוטור - מערכת הסטטור, אשר מנתק רקמות בצורה עדינה. הליך זה נשלט על ידי הגדרות התוכנית של המכשיר. ההגדרות היו אופטימיזציה כדי להשיג תשואה גבוהה הכדאיות של תאים. נגזר תא בודד השעיות הוכתמו CD45-PE ו-CD146 FITC או C...

<table><tbody><tr><td>מבחנות C (C Tubes)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; ערכה להתחלה</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-093-235</td><td>&lt;הקישור הוא ל-&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; מסובב מבחנות</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; תמיסת שטיפה</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACS&amp;#174; תמיסת מלאי BSA</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-052-001</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c-FITC, CD11c-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-092-026130-091-830</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-mPDCA-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-091-963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD146-FITC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-092-026</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD45-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-091-610</td><td>&lt;קישור ל-&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>תמיסת פרופידיום יודאיד</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>מספר הזמנה 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>טיפי פ pipette עם הגעה ארוכה Art 1000</td><td>Molecular BioProducts</td><td>מספר הזמנה 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;כדי לעבוד בתנאים סטריליים, מומלץ לבצע את כל השלבים במנדף זרימה למינרית.

1. חומרים
בופר HEPES: (10 mM HEPES-NaOH pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1.8 mM CaCl2)
תמיסת Collagenase D: ‏Collagenase D בריכוז 100 mg/mL (Collagenase D > 0.15 U/mg), בבופר HEPES
תמיסת DNase I: ‏20,000 U/mL DNase I
בופר PBS ב-pH 7.2
בופר PEB: חלק אחד של תמיסת מקור BSA ב-20 חלקים של autoMACS Rinsing Solution
רקמה: ריאה המופקת מעכברת נקבה בוגרת מסוג BALB/C בת 6/7 שבועות, ללא איברים סמוכים.
אופציונלי: CD11c MicroBeads, עמודי MACS MS, ו-MACS Separator לצורך בידוד תאים דנדריטיים מתמיסת תאים בודדים של ריאת עכבר.

2. דיסוציאציה של רקמת הריאה
שטוף את הרקמה בצלחת פטרי המכילה PBS כדי להסיר אריתרוציטים.
העבר עד 450 מ"ג של רקמת ריאה לתוך gentleMACS C Tube המכיל 4.9 מ"ל בופר HEPES.
הוסף 100 מיקרוליטר מתמיסת Collagenase D עד לריכוז סופי של 2 mg/ml Collagenase D.
הוסף 10 מיקרוליטר מתמיסת DNase I עבור עד 150 מ"ג רקמה (ריכוז סופי של 40 U/ml DNase I), או 20 מיקרוליטר DNase I עבור 150-450 מ"ג רקמת ריאה (ריכוז סופי של 80 U/mL DNase I).
סגור היטב את ה-C Tube וחבר אותו למכשיר gentleMACS Dissociator. לאחר מכן, הפעל את התוכנית "m_lung_01".
דגור במשך 30 דקות ב-37°C עם סיבוב אוטומטי או על ידי סיבוב ידני מדי 5 דקות.
החזר את הדגימה למכשיר ה-gentleMACS Dissociator והפעל את התוכנית "m_lung_02".

3. סינון
הכן מבחנה של 50 מ"ל לאיסוף תאים מסוננים על ידי החלפת הפקק במסנן תאים (cell strainer) בעל רשת של 70 מיקרון.
עם סיום תוכנית ה-gentleMACS השנייה, בהתאם להתפלגות חומר הדגימה במבחנה, ניתן לצנטריפוג את המבחנה לזמן קצר כדי לרכז את חומר הדגימה בתחתית המבחנה.
הוצא את התאים דרך הפקק האטום במבנה הספטום של ה-C Tube באמצעות טיפ פפיטה מתאים של 1000 מיקרוליטר והעבר אותם למסנן התאים.
שטוף את מסנן התאים עם 5 מ"ל בופר HEPES בטמפרטורת החדר (RT).
צנטריפוג את התאים ליצירת משקע (pellet) במבחנה של 50 מ"ל ב-300xg למשך 10 דקות.
שאב את הנוזל העליון (supernatant) והשב את משקע התאים לתמיסה בנפח הרצוי של בופר PEB.

חלק 4: תוצאים מייצגים:
איור 1. דיסוציאציה של ריאה באמצעות gentleMACS™ Dissociator הניבה 92% תאים חיוניים. תאים מתים נצבעו פלואורסצנטית ב-propidium iodide (PI) (תרשים פיזור ימני; תרשים פיזור שמאלי: ללא צביעת PI).
איור 2. דיסוציאציה של רקמת ריאה של עכבר באמצעות gentleMACS Dissociator מניבה אחוז גבוה של לוקוציטים ותאי אנדותל חיוניים. תמיסות התאים הבודדים שהופקו נצבעו ב-CD45-PE ו-CD146-FITC או ב-CD31-FITC ונחקרו באמצעות ציטומטריית זרימה.
איור 3. תמיסת תאים בודדים שהופקה מרקמת ריאה של עכבר נצבעה ב-CD11c-FITC וב-Anti-mPDCA-1-APC כדי לזהות תאי DC פלסמציטואידיים מסוג CD11clow m-PDCA-1+ של עכבר, וכן תאים מסוג CD11chigh.
איור 4. העשרה של תאים דנדריטיים באמצעות CD11c MicroBeads, MiniMACS Separator ושני עמודי MS.&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

הכנה סטנדרטית של תא בודד השעיות מתוך רקמת הריאה באמצעות עכבר dissociator gentlemacs

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

הכנת תא בודד השעיות מרקמות היא תנאי חשוב ניסויים רבים במחקר הסלולר. תהליך dissociating איברים שלם דורש פרמטרים ספציפיים על מנת לקבל מספר גבוה של תאים חיים בצורה לשחזור. Dissociator gentleMACS מייעל את המשימה עם פרוטוקול, פשוט מעשית. המכשיר מכיל מתוכנתים מראש הגדרות מותאמות דיסוציאציה היעילה אך עדין של מגוון רחב של סוגי רקמות, כולל הריאות העכבר. בפרסום זה השימוש Dissociator gentleMACS על רקמת הריאה נגזר עכברים מודגם.

Dissociating תאים סוגי רקמות ספציפיות דורש פרמטרים ספציפיים תסיסה רקמות לקבל כמות גדולה של תאים קיימא culturable. GentleMACS Miltenyi dissociator מייעל את המשימה עם פרוטוקול, פשוט מעשית. בפרסום זה השימוש במנגנון הזה על רקמת הריאות הוא הסביר.

הכנה סטנדרטית של תא בודד השעיות מתוך רקמת הריאה באמצעות עכבר Dissociator gentleMACS

הכנת תרחיפי תאים בודדים מרקמות היא תנאי מוקדם חשוב לניסויים רבים במחקר תאי. התהליך של...

בפרוטוקול וידאו זה, תראו כיצד לבצע דיסוציאציה של רקמת ריאה מעכבר בוגר באמצעות gentle max לאחר פירוק רקמת הריאה. בנוכחות collagenase d ו-DNAS one, סספנסיות של תאים מסוננות באמצעות מסננת תאים של 70 מיקרון, עוברות צנטריפוגציה ומושעות עבור יישומים המשכיים. שלום, אני מלני מלו מ-Mil Biotech בגרמניה.היום אדגים לכם פרוצדורה אוטומטית וניתנת לשחזור להכנת תרחיף של תאים בודדים מרקמת ריאה של עכבר באמצעות שימוש ב-GenX dissociation. אנו משתמשים בפרוצדורה זו במעבדה שלנו כדי להכין תרחיפים של תאים בודדים לצורך בידוד של לוקוציטים או תאים אנדותליאליים. אשרינו, בואו נתחיל.לפני תחילת הפרוטוקול, יש להכין ולהכין מספר תמיסות סטנדרטיות. ראשית, נזדקק לבuffer Hebes. שנית, תמיסת collagenase D המכילה 100 mg/mL אנזים ו-buffer Hebes.שלישית, תמיסתו של dase one המכילה 20,000 units per milliliter של dase one. לבסוף, שתי תמיסות בופר נפוצות: בופר PBS טיפוסי ב-pH 7.2 ובופר PEB המופק מתמיסת שטיפה AutoMax ומסמיס BSA.נפתח את הפרוטוקול עם ריאה מנותחת שהופקה מעכבר ביופסיה נקבה בן שש עד שבעה שבועות. ודאו שהריאה נקייה מאיברים סמוכים כגון הלב והתימוס, כלי דם יוצאים ונכנסים, קנה הנשימה ורקמות חיבור. שטפו את הרקמה בצלחית פטרי המכילה PBS כדי להסיר אריתרוציטים.בדרך כלל, ריאה של עכבר בגיל זה שוקלת בין 110 ל-150 מיליגרם. אם אתם מתכנ

standardized-preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-lung

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

וידאו זה מתאר פשוטים, חוסך זמן טכניקה ניתוק אוטומטי רקמות באמצעות Dissociator gentleMACS להכין תא בודד השעיות של splenocytes העכבר.

הכנת תא בודד השעיות מן הטחול עכבר עם Dissociator gentleMACS

Dissociating תאים סוגי רקמות ספציפיות דורש פרמטרים ספציפיים aggitation רקמות לקבל כמות גדולה של תאים קיימא culturable. GentleMACS Miltenyi Dissociator מייעל את המשימה עם פרוטוקול, פשוט מעשית. בפרסום זה השימוש במנגנון הזה על רקמת nerual הוא הסביר.

הדור של תא בודד מרקמת השעיות עכבר עצבית

במאמר זה אנו מדגימים את הבידוד של Murine ריאות תושב בתאי גזע mesenchymal (ריאות MSC), הרחבה שלהם, אפיון וניתוח של מאפייני המערכת החיסונית.

בידוד &amp; אפיון Hoechst נמוך CD45 שלילי עכבר mesenchymal ריאות בתאי גזע

הכנה מטוהרים של ריאות תאים דנדריטים עכבר מתואר. דגש ספציפי ניתנת הבידוד של תת קונבנציונאלי תאים דנדריטים.

בידוד של ריאות תאים דנדריטים עכבר

סרטון זה מתאר את הכנת תרחיף תאי הריאה של עכבר לניתוח ציטומטרי זרימה לחקר ביטוי PD-L1 של תאי אדנוקרצינומה ריאתיים.

הכנת ריאות עכבר לציטומטריית זרימה: יצירת תרחיף תאים מרקמת הריאה לאנליזה ציטומטרית של זרימה

עבודה זו מתארת ​​את סטנדרטיזציה של שיטה להשיג אוכלוסיות תאים נבט מטופלים מרקמת האשכים של מינים שונים של יונקים. זהו פרוטוקול פשוט המשלב דיסוציאציה פשוטה מכנית, מכתים עם Hoechst-33342 ו propidium iodide, ו FACS מיון, עם יישומים רחב במחקרים השוואתיים של ביולוגיה הרבייה הגברית.

גישה סטנדרטית עבור multispecies טיהור תאים יונקים זכר יונקים על ידי דיסוציאציה רקמות מכנית זרימת cytometry

מחקר זה מציג שתי טכניקות ניסיוניות חיוניות: בניית מודל פצע עכברים להערכת סגירת פצע והכנת תרחיפים חד-תאיים מעור העכברים כדי לשמר את כדאיות התאים.

מודלים של פצעים בעכברים והכנת תרחיפי תאים בודדים

אנו מספקים פרוטוקול מפורט לבידוד וזיהוי אוכלוסיות נדירות של תאי T ספציפיים לאנטיגן בריאות עכברים באמצעות העשרת תאי T מבוססי חרוזים מגנטיים וטטרמרים מסוג peptide:major histocompatibility complex (MHC).

זיהוי תאי T נדירים ספציפיים לאנטיגן מריאות עכבר באמצעות פפטיד:טטרמרים מורכבים עיקריים של היסטותאימות

פרוטוקול זה מפרט את הבידוד של אוכלוסיות חיסוניות ולא מחוסנות מריאות העכבר במצב יציב ובעקבות זיהום בשפעת. הוא גם מספק אסטרטגיות שער לזיהוי תת-קבוצות של תאים אפיתל ומיאלואידים.

בידוד אוכלוסיות תאים מיאלואידיים ואפיתל חיים מריאת העכבר

הפרוטוקול המתואר להלן הוא דרך פשוטה ויעילה לבודד תאים המכילים רטינואיד מאוכלוסיות תאי ריאה הטרוגניות מאוד על ידי שימוש באוטופלואורסצנציה ספציפית של רטינואיד ועל ידי שימוש במיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנט.

בידוד תאים המכילים רטינואיד ריאה על ידי מיון תאים

פרוטוקול זה מציג שיטה מפורטת לבידוד תליות חד-תאיות איכותיות הן מרקמת ריאות עכברית בריאה והן מגידולים. פרוטוקול זה יכול להיות מיושם על scRNA-seq, ניתוח ציטומטריית זרימה, ובידוד תאים ראשוניים.

הכנה אופטימלית של רקמת ריאה נושאת גידול עכברוניים שלמים לצורך ציטומטריית זרימה וריצוף RNA חד-תאי

למד שיטה סטנדרטית להכנת תליית תאים בודדים מרקמת ריאה של עכברים באמצעות gentleMACS. הפרוטוקול משתמש בקולגנאז D ו-DNase לפירוק יעיל של תאים חיים ליישומים נוספים.

הכנה סטנדרטית של תא בודד השעיות מתוך רקמת הריאה באמצעות עכבר Dissociator gentleMACS

גלה סרטונים נוספים