בדיקת דו-שכבתית ליפידית נתמכת מישורית: טכניקת מבחנה מבוססת מיקרוסקופיה לחקר הרכבת ספטין על חיקויי קרום ביולוגי

ספטינים הם חלבונים ציטוסקלטליים המהווים תחום קשירת GTP המוקף בתחומי אמינו וקרבוקסיל סופיים, עם יכולת טבועה להרכיב את עצמם לחוטים ומבנים מסדר גבוה יותר בקרום הפלזמה הפנימי לפונקציות תאיות מגוונות.

כדי לחקור אינטראקציות בין ממברנת ספטין במבחנה באמצעות חיקוי ממברנה ביולוגית, השג צינור מיקרו-צנטריפוגה חתוך. מרחו דבק אולטרה סגול על השפה השטוחה והלא חתוכה ומקמו אותו על כיסוי זכוכית שעבר טיפול בפלזמה. עם חשיפה לאור אולטרה סגול, הדבק מתרפא ויוצר תא תגובה פתוח.

העבירו לתוך החדר שלפוחיות ליפידים חד-פיטריוניות חד-פיזוריות בהרכב השומנים הרצוי, בתוספת חיץ המכיל קטיון חד-וערכי. קטיונים מקלים על שלפוחיות השומנים לספוג ולהצטבר על הכיסוי. יש לנער בעדינות את החדר, ליזום קרע בשלפוחית ולדגור.

השלפוחיות הקרועות נפרשות ומתמזגות לכיסוי דרך קבוצות הראש ההידרופיליות שלהן, ויוצרות כתמי שומנים דו-שכבתיים. שולי המדבקות גורמים לשלפוחיות הנותרות להיקרע, ויוצרים שכבת שומנים דו-שכבתית רציפה הנתמכת במישורית, SLB. הסר עודפי שלפוחיות לא נספגות עם חיץ מתאים.

לאחר מכן, הוסף תרחיף ספטין עם תווית פלואורסצנטית עם מאגר המכיל חומר צפיפות ודגירה. חומרי צפיפות מאפשרים לספטין להפקיד על הכיסוי המצופה SLB. בתנאים אופטימליים, ספטינים עשויים להתחבר לליפידים ב-SLB, ולהרכיב למבנים מאורגנים.

האירו באופן סלקטיבי את הכיסוי באמצעות מיק