אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:55 דק׳ • July 8th, 2025
האינטראקציה הפיזית בין שני שותפי חלבון מווסתת את המנגנונים הביולוגיים במורד הזרם.
כדי לזהות אינטראקציות חלבון-חלבון באמצעות מבחן אימונוסורבנט מקושר לאנזים, ELISA, קח צלחת בדיקה חיסונית מרובת בארות. הוסיפו חוצץ ציפוי המכיל את אחד החלבונים המקיימים אינטראקציה - חלבון הפיתיון - ודגרו. חלבוני הפיתיון נספגים על פני הבאר באמצעות אינטראקציות הידרופוביות לא ספציפיות.
השליכו את התמיסה המושקעת ושטפו את הצלחת עם חיץ כדי להסיר חלבונים לא קשורים. הוסיפו תמיסת חסימה ודגרו, מה שמאפשר למולקולות החומר החוסם של התמיסה לחסום אתרי קישור לא ספציפיים על פני הבאר.
הוסף את שותף החלבון המקיים אינטראקציה - חלבון הטרף - המתויג עם שאריות היסטידין לכימות קל. דגירה, מה שמאפשר לחלבון הטרף להיקשר באופן ספציפי לשותף האינטראקטיבי שלו - הפיתיון. הוסף תמיסה של נוגדנים אנטי-היסטידין מצומדים עם אנזימי פרוקסידאז חזרת הנקשרים לטרף, ויוצרים קומפלקס פיתיון-טרף-נוגדנים.
פיפטה תמיסה המכילה את המצע של האנזים ומי חמצן ודגירה.
האנזים חזרת פרוקסידאז משתמש במי חמצן לחמצון הקטליטי של המצע שלו - ויוצר מוצר בצבע כחול. הוסף תמיסה חומצית המפרקת את האנזים כדי לעצור את התגובה, וליצור תוצר תגובה צהוב.
בעזרת קורא מיקרו-פלטות, מדוד את עוצמת הצבע של המוצר, שהיא פרופורציונלית לכמות חלבון הטרף הקשור ומצביעה על אינטראקציה מוצלחת בין חלבון לחלב
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים