בדיקת ברקוד לאפיון פנוטיפי ופונקציונלי של תאי מערכת החיסון

0 views • 5:42 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התחל עם דגימות בדיקה המכילות תאים חיסוניים מגורים וקבועים.

גירוי גורם לביטוי של סמנים ספציפיים בתאים, בעוד שקיבוע משמר סמנים פנוטיפיים, כולל אנטיגנים על פני התא, וסמני מצב תפקודי, כולל ציטוקינים.

הוסף שילוב ייחודי של נוגדנים מצומדים לאיזוטופים של מתכות כבדות לכל דגימה.

טכניקה זו מקודדת באופן ייחודי מספר דגימות, ומבדילה כל דגימה על ידי השילוב שלה של איזוטופים של מתכות כבדות.

הנוגדנים נקשרים לאפיטופ משותף, ומקודדים את כל התאים בדגימות.

שלב את כל הדגימות הברקודיות בצינור אחד, לעיבוד במורד הזרם.

הוסף קוקטייל נוגדנים מצומד מתכת כדי להכתים אנטיגנים על פני השטח.

הוסף מאגר חדירות כדי להגביר את חדירות קרום התא לצביעה תוך תאית.

הוסף קבוצה נוספת של נוגדנים מצומדים מתכת כדי להכתים ציטוקינים תוך-תאיים.

ברקוד מאפשר צביעה ורכישה בו זמנית של הדגימות המאוגדות באמצעות ציטומטריית מסה. טכניקה זו ממקסמת את יעילות הבדיקה, ומשפרת את ההערכה של סמני מצב פנוטיפיים ופונקציונליים.

כדי לקודד את התאים הקבועים הליזים, הפשירו את הדגימות מהאחסון של מינוס 80 מעלות צלזיוס, לאט על קרח. דלל את מאגר סלסול הברקוד פי 10 עם PBS ב-1 עד 10, וצור מספיק מאגר ל-3 מיליליטר לדגימה.

מלאו שוקת לא סטרילית אחת ב-CSM ואחת עם מאגר סלסול ברקוד 1x. לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של CSM קר כקרח לדגימות הטריות שהופשרו. מערבבים היטב ומעבירים לצינורות אשכול הפוליפרופילן המסומנים מראש.

כעת, קחו דגימה של 10 מיקרוליטר, וספרו את התאים באמצעות מונה תאים אוטומטי. נרמל את ספירת התאים בכל צינור אשכול על ידי הסרת נפח התאים העודפים. לאחר מכן, צנטריפוגה את התאים ב 600 פעמים גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. השעו מחדש את התאים ב-1 מיליליטר של מאגר סלסול ברקוד 1x עם פיפטה רב-ערוצית, וצנטריפוגה ב-600 פעמים גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, שאפו את הסופרנטנט.

סדר את צינורות האשכול על מתלה באותו סדר כפי שמצוין במקש הברקוד, כך שהדגימה תתאים לברקוד שלה. הוסף 800 מיקרוליטר של מאגר סלסול ברקוד 1x על ידי פיפטה רב-ערוצית לכל הדגימות בצינורות האשכול, מבלי לגעת בגלולת התא כדי להפחית את אובדן התאים.

לאחר מכן, הניחו בצד את המתלה עם צינורות האשכול. הסר את רצועות הצינור של ערכת הברקוד פלדיום 20-plex ממינוס 20 מעלות צלזיוס, והפשיר בטמפרטורת החדר. הוסף 100 מיקרוליטר של מאגר סלסול ברקוד 1x, ערבב היטב והעביר 120 מיקרוליטר מתערובת הברקוד המושעה לדגימות התאים המתאימות בצינורות האשכול.

מערבבים היטב על ידי פיפטה רב-ערוצית, כך שלא יהיה זיהום צולב בין דגימות ברקוד בנפרד. דגרו צינורות אשכול למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר כדי לאפשר לברקודים לתייג את התאים. לאחר 30 דקות, צנטריפוגה את הדגימות ב 600 פעמים גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר. שאפו את הסופרנטנט. לאחר מכן, השעו אותם במיליליטר אחד של CSM. לאחר מכן, צנטריפוגה והשעיה במעשן הסיגריות שוב.

לאחר מכן, צנטריפוגה בטמפרטורה של 600 פעמים גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר, ושואבים את הסופרנטנט. בעזרת פיפטה בודדת ובאמצעות אותו קצה, העבירו את כל כדורי התאים, וכ-70 עד 80 מיקרוליטר של נפח שיורי לצינור פוליסטירן אחד. אין להוציא את קצה הפיפטה. הניחו בצד את הפיפטה הבודדת עם הקצה הזה.

עם פיפטה רב-ערוצית וקצוות חדשים, הוסף 100 מיקרוליטר של CSM לכל צינור אשכול מקורי כדי למקסם את התאוששות התאים. בעזרת הפיפטה הבודדת עם הקצה שהונח בצד, העבירו את כל כדורי התא בנפח שיורי של 100 מיקרוליטר לאותו צינור פוליסטירן. הוסף CSM כדי להשלים את צינור הפוליסטירן לכ -3 מיליליטר. ספור ורשום את מספר התא של ערכת הברקודים במאגר. לאחר מכן, צנטריפוגה בטמפרטורה של 600 פעמים גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר, ושואבים את הסופרנטנט. המשך להכתים את הדגימות הברקודיות באותו יום.

06:28

לדוגמא הכנה לניתוח Cytometry Mass

Related Videos

0 Views

12:34

בידוד וכתמים של העור העכבר Keratinocytes עבור ניתוח מחזור התא הספציפי של חלבון הביטוי הסלולרי על ידי המוני הקיקומטריה

Related Videos

0 Views

08:09

הכנת מח עצם שלם לניתוח המוני Cy, לטיפול בניופיל-תאי השושלת

Related Videos

0 Views

14:45

ספירה של אוכלוסיות גדולות דם היקפיות יקוציט לניסויי multicenter קליניים באמצעות Assay phenotyping דם מלא

Related Videos

0 Views

08:17

גישה אוטומטית-למחצה הכנת קוקטיילי נוגדן עבור ניתוח Immunophenotypic של אדם דם היקפי

Related Videos

0 Views

08:41

אפיון פונקציונלי של מקרופאגים רגולטוריים המעכבים חסינות-תגובתי חסינות

Related Videos

0 Views

09:25

איתור והעשרה של נדיר- אנטיגן ספציפי בתאי B עבור ניתוח של הפנוטיפ ותפקוד

Related Videos

0 Views

12:36

ניתוח מתא בודד של Immunophenotype וייצור ציטוקין בדם כל הפריפריה באמצעות Cytometry המונית

Related Videos

0 Views

09:34

הגישה קומבינטורית תא בודד כדי לאפיין את מולקולרית והטרוגניות Immunophenotypic של גזע האדם ואוכלוסיות קדמון

Related Videos

0 Views

08:02

קביעת זהות התא החיסונית וטוהר באמצעות PCR כמותי מבוסס אפיגנטי

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026