בדיקת ברקוד לאפיון פנוטיפי ופונקציונלי של תאי מערכת החיסון

התחל עם דגימות בדיקה המכילות תאים חיסוניים מגורים וקבועים.

גירוי גורם לביטוי של סמנים ספציפיים בתאים, בעוד שקיבוע משמר סמנים פנוטיפיים, כולל אנטיגנים על פני התא, וסמני מצב תפקודי, כולל ציטוקינים.

הוסף שילוב ייחודי של נוגדנים מצומדים לאיזוטופים של מתכות כבדות לכל דגימה.

טכניקה זו מקודדת באופן ייחודי מספר דגימות, ומבדילה כל דגימה על ידי השילוב שלה של איזוטופים של מתכות כבדות.

הנוגדנים נקשרים לאפיטופ משותף, ומקודדים את כל התאים בדגימות.

שלב את כל הדגימות הברקודיות בצינור אחד, לעיבוד במורד הזרם.

הוסף קוקטייל נוגדנים מצומד מתכת כדי להכתים אנטיגנים על פני השטח.

הוסף מאגר חדירות כדי להגביר את חדירות קרום התא לצביעה תוך תאית.

הוסף קבוצה נוספת של נוגדנים מצומדים מתכת כדי להכתים ציטוקינים תוך-תאיים.

ברקוד מאפשר צביעה ורכישה בו זמנית של הדגימות המאוגדות באמצעות ציטומטריית מסה. טכניקה זו ממקסמת את יעילות הבדיקה, ומשפרת את ההערכה של סמני מצב פנוטיפיים ופונקציונליים.

כדי לקודד את התאים הקבועים הליזים, הפשירו את הדגימות מהאחסון של מינוס 80 מעלות צלזיוס, לאט על קרח. דלל את מאגר סלסול הברקוד פי 10 עם PBS ב-1 עד 10, וצור מספיק מאגר ל-3 מיליליטר לדגימה.

מלאו שוקת לא סטרילית אחת ב-CSM ואחת עם מאגר סלסול ברקוד 1x. לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של CSM קר כקרח לדגימות הטריות שהופשרו. מערבבים היטב ומעבירים לצ