בדיקה חיסונית מגנטית מבוססת ננו-חלקיקים באמצעות מכשיר מיקרופלואידי

קח מכשיר מיקרופלואידי המוצמד לשלב מיקרוסקופ, הכולל כניסה לחלוקת ריאגנטים, תעלות מחוברות זו לזו לזרימת נוזלים ושקעים לטיהור הנוזלים.

התעלה הראשית מכילה הגבלה מרכזית מדורגת עם מיקרו-חלקיקי ברזל מצטברים כלואים.

התעלות מודגרות בתמיסת חסימה למניעת קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הזרם מאגר כביסה, והסר תמיסת חסימה עודפת.

הציגו תרחיף אימונוקומפלקס בקצב זרימה מוגדר. הקומפלקס החיסוני מורכב מננו-חלקיקים מגנטיים, המצופים באנטיגנים הקשורים לנוגדנים ראשוניים, הקשורים עוד יותר לנוגדנים משניים מצומדים לפרוקסידאז.

להפעיל שדה מגנטי חיצוני, למגנט את המיקרו-חלקיקים המצטברים ולהפוך אותם למלכודת מגנטית ללכידת הקומפלקסים החיסוניים.

הכניסו מצע פלואורוגני המומר על ידי הפרוקסידאז לתוצר פלואורסצנטי וזורם דרך המלכודת.

באמצעות המיקרוסקופ, השווה את הקרינה לפני ואחרי המלכודת, ואשר את לכידת הקומפלקסים החיסוניים.

מלאו את התעלות במים מזוקקים בעזרת מזרק. טבלו את המכשיר באמבטיה אולטרסאונד למשך 10 דקות. לאחר מכן, רוקנו את המים בתוך תעלות המכשיר והשתמשו במזרק כדי להכניס תמיסת BSA של 5%.

הכן תרחיף של מיקרו-חלקיקי ברזל בקוטר 7.5 מיקרומטר ב-5% BSA. דגרו את השבב ואת תרחיף המיקרו-חלקיקים עם תמיסת החסימה למשך שעה לפחות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, הכנס את המיקרו-חלקיקים לשבב בעזרת מחט מזרק דרך צינור יציאת התעלה הצדדית.

הנח את השבב בצורה אנכית; לאחר מכן, סובב את השבב בשני שלבים של 90 מעלות כך שהמיקרו-חלקיקים מכוונים וקומפקטיים במגבלה של 5 מיקרומטר. אטום את כל הצינורות של המכשיר האקרילי בחום. חותכים את צינור הכניסה עד שנותרו רק כמה מילימטרים.

מלאו את מחט החלוקה במאגר כביסה והכנסו אותה לצינור החתוך. אפשר לתמיסה לטפטף ואז חבר את המחט למכשיר. חותכים את צינור היציאה מהתעלה הרוחבית ואז מחברים למשאבת המזרק. לאחר מכן, חזור על אותו הליך עבור צינור יציאת הערוץ הראשי, ולאחר מכן חבר את השבב למגנט.

לזיהוי חיסוני, שמור על מאגר הכביסה זורם למשך 10 דקות במהירות של 50 מיקרוליטר לשעה. הסר את מאגר הכביסה הנותר ממחט החלוקה בעזרת מיקרופיפטה והוסף 50 מיקרוליטר ממתלה הננו-חלקיקים. הזרימו את תרחיף הננו-חלקיקים למשך 7 דקות בקצב זרימה של 100 מיקרוליטר לשעה. לאחר מכן, שנה את קצב הזרימה ל-50 מיקרוליטר לשעה והמשך את הזרימה למשך 15 דקות נוספות.

החלף את מחט החלוקה, והזרם את מאגר הכביסה למשך 10 דקות באותו קצב. הסר את מאגר הכביסה שנותר ממחט החלוקה בעזרת מיקרופיפטה והוסף 100 מיקרוליטר מהמצע הפלואורוגני. התאם את קצב הזרימה ופרמטרי הזמן עבור קלט המצע, מדידת הקרינה ושלב הכביסה.

הפעל את זרימת הקלט של המצע הפלואורוגני למשך 6 דקות במהירות של 50 מיקרוליטר לשעה. 15 שניות לפני שזרימת המצע נעצרת, הפעל את הקרינה של המיקרוסקופ. התחל את לכידת התמונה עם התוכנה של מצלמת המיקרוסקופ 10 שניות לפני שהמצע נעצר עם זמן חשיפה של 1,000 אלפיות השנייה.

לחץ על כפתור ההתחלה של פרמטר קצב הזרימה הרצוי מיד לאחר הפסקת שטיפת המצע. בצע הדמיה במשך 6 דקות בפריים אחד לשנייה. לחץ על כפתור ההתחלה של זרימת הכביסה מיד לאחר הפסקת זרימת המדידה שנבחרה.