טיהור ננו-חלקיקי חלבון בהרכבה עצמית באמצעות כרומטוגרפיית זיקה

קחו תרחיף של חיידקים מהונדסים המבטאים ננו-חלקיקי חלבון רקומביננטיים בהרכבה עצמית עם תגי פוליהיסטידין.

סוניקט לשחרור רכיבים תוך-תאיים.

צנטריפוגה לאיסוף הסופרנטנט המכיל ננו-חלקיקי חלבון. מדללים אותו עם חוצץ נטול אימידזול.

קח עמודת כרומטוגרפיה של זיקה המכילה חרוזי אגרוז עם קטיוני ניקל משותקים.

הוסף מאגר עם ריכוז אימידזול נמוך לשיווי משקל עמודות.

הוסף את הליזט החיידקי על העמוד.

במהלך הריצה, הפוליהיסטידין על ננו-חלקיקי חלבון נקשר חזק לקטיוני ניקל.

בינתיים, מזהמים כמו ליפופוליסכרידים חיידקיים וחלבונים אחרים נקשרים חלש לעמודה.

שטפו עם מאגר המכיל ריכוז אימידזול נמוך כדי להסיר את החלבונים הקשורים חלש.

הכניסו איזופרופנול להסרת ליפופוליסכרידים ולאחר מכן שטפו.

לאחר מכן, הציגו מאגר עם ריכוז אימידזול בינוני. האימידזול מתחרה עם היסטידין על קשירה לקטיון הניקל, ומשחרר ננו-חלקיקי חלבון קשורים.

לאחר מכן, הוסף מאגר המכיל ריכוז גבוה של אימידזול כדי לחסל לחלוטין את ננו-חלקיקי החלבון.

אסוף את ננו-חלקיקי החלבון המטוהרים להמשך יישום.

לליזה של E. coli שנקטף המבטא את צרור ששת הסלילים SAPN, השתמש בבדיקה עם תפוקת סוניקציה של 150 וואט, עם ארבע שניות של סוניקציה ושש שניות של מנוחה כדי לסוניקציה של כדורי חיידקים תלויים ב-40 מיליליטר של מאגר נטול אימידזול על קרח למשך חמש דקות.

צנטריפוגה של הליזאט התאי כדי ליצור סו