בידוד של סוגי תאים מרובים ממוח עכבר על ידי הומוגניזציה מכנית

התחל בהנחת רכיבי מטחנת הרקמות על קרח. מכשיר זה כולל מרגמה ושני עליים בקטרים שונים.

יוצקים מאגר מלח צונן לתוך המרגמה ואז מוסיפים רקמת מוח של עכבר.

המאגר שומר על איזון אוסמוטי, שומר על מבנה התא ותפקודו.

טוחנים את הרקמה במשיכות עדינות מרובות באמצעות עלי בקוטר קטן יותר, שגוזז מכנית את הרקמה לחתיכות קטנות יותר.

לאחר מכן, שבץ עם עלי בקוטר גדול יותר, מה שמקל על פירוק נוסף של הרקמה לתאים המרכיבים אותה.

מעבירים את התערובת לצינור וצנטריפוגה.

הסר את ה-supernatant.

מוסיפים חוצץ מלח צונן ומערבולת כדי לשבור את גושי התאים ואת המיאלין.

לאחר מכן, הוסף מדיום שיפוע צפיפות וצנטריפוגה.

בשל הבדלים בצורה ובמסה, תאים ישקעו בשכבה התחתונה, ואילו פסולת ומיאלין מצטברים בשכבה העליונה.

השליכו את הסופרנטנט.

הוסף פתרון מתאים לקבלת תרחיף מרובה תאים לשימוש נוסף.

להומוגניזציה של רקמות, הוסף 3 מיליליטר של HBSS מקורר מראש למכתש הזכוכית המצוננת מראש של מטחנת רקמות Dounce, והעביר את מחצית אחד המוח שנקטף לטיט. השרו בעדינות את הרקמה עם 10 משיכות של עלי A, ולאחר מכן 10 משיכות של עלי B, והעבירו את התערובת ההומוגנית לצינור חרוטי חדש של 15 מיליליטר.

מלאו את הצינור לנפח סופי של 10 מיליליטר עם HBSS מקורר מראש לצנטריפוגה והשעו את הגלולה ב-7 מיליליטר של HBSS טרי עם מערבולת לפני החזקת הדגימה על קרח. להסרת פסולת, הוסף 3 מיליליטר של תמיסה איזוטונית מקוררת מראש לכל דגימה מעוכלת או הומוגנית, ומערבל בעדינות את הדגימות כדי לוודא שהן מעורבבות בצורה הומוגנית.

לאחר מכן, צנטריפוגה את הדגימות והסירו בזהירות את הדיסק הלבנבן של פסולת ומיאלין הצף על פני התמיסה. כאשר הפסולת הושלכה, אספו את כל המיקרוליטרים מלבד 100 המיקרוליטרים האחרונים של הסופרנטנט מכל צינור מבלי להפריע לכדורים. יש להשעות מחדש כל גלולה ב-1 מיליליטר של תמיסת FACS/BL להעברה לצינורות מיקרו-צנטריפוגה בודדים של 1.5 מיליליטר.

לאחר הצנטריפוגה עם תמיסת החלקיקים, חשוב להסיר את דיסקת הפסולת ואת הסופרנטנט בזהירות רבה, מבלי לעקור את כדורית התא, כדי למנוע אובדן דגימה.

לאחר הצנטריפוגה, שאפו בזהירות את הסופרנטנט מכל צינור והשעו מחדש את הכדורים ב-350 מיקרוליטר של FACS/BL טרי לכל צינור.