Name: תא כותרת Encapsulation על ידי טיפות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:09:54.000+00:00
Duration: 13 min 10 s
Description: למדו שיטת הדפסת תאים תלת-ממדית באמצעות אנקפסולציה של תאים בטיפות ושימוש בשסתומים סולנואידיים לשליטה מדויקת בהדפסה. מחקר זה מקדם את הנדסת הרקמות ומאפשר יצירת מבנים מורכבים ליישומים רפואיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH3T3 תאים הכנה: א תאים לניתוק <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Trypsinize תאים, ואז לדלל 1:01 עם התקשורת התא, ולהעביר מבקבוקון T75 כדי צינור פלקון 15 מ&quot;ל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין למטה תאים לתוך גלולה ידי centrifuging, לשאוב supernatant ולשטוף תאים עם DPBS </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין למטה תאים לתוך גלולה שוב, לשאוב supernatant </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תאים Resuspend בתקשורת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קביעת צפיפות התאים עם hemocytometer (~ 200 X 10 4 תאים / מ&quot;ל לכל בקבוק T75) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תא פתרון צנטריפוגה, לשאוב supernatant ו resuspend בסכום המתאים של מדיה עבור ריכוזים שונים בתא </li></ol> ב פליטה נייד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> וורטקס תאים לפני השימוש לניתוק </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 200 μL של פתרון התא לתוך מזרק </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרת מצב המתאים על הדופק גנרטור <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור טיפות יחיד ולהוציא ו טיפות מרובות (התפרצויות), להגדיר גנרטור הדופק למצב &quot;א Bur&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור פליטה אגל רציפה, קבע גנרטור הדופק למצב &quot;נורמה&quot; </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי הגדרות אות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סט ברמה גבוהה מתח נמוך התפוקה ברמה: HIL ל V 5 ו LOL ל V 0 וודא &quot;לים&quot; דולקת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קביעת אות כמו דופק מרובע </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי משך הזמן שסתום סולנואיד פתוח פליטה אגל ידי שינוי הערך עבור &quot;ויד&quot; או שינוי מחזור (&quot;חובה&quot;) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי התדירות של פליטה ידי שינוי הערך עבור &quot;PER&quot; </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שינוי מספר טיפות נפלט בפרץ ידי שינוי הערך עבור &quot;Bur&quot; </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תא פתרון הוצא על מצע מוכן דימות באמצעות מיקרוסקופ </li></ol> ג מכתים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להמציא פתרון לצבוע עם 0.5 μL calcein-AM ו 2 μL homodimer ethidium לכל מ&quot;ל של DPBS </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המצע מוכן לטבול בתמיסה צבע </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר המדגם כדי לדגור במשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס לפני הדמיה </li></ol> ניסוי אימות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום מיקרוסקופ Eclipse Nikon U TE-2000 פלורסנט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספוט תוכנה מתקדמים (Diagnostics, Inc) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חי / מת Assay </li></ol></li></ol>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

<table><tbody><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td></td><td>Nikon Instruments</td><td>Eclipse TE-2000 U</td><td></td></tr><tr><td>מזרק תאים בעל שסתום סולנואיד</td><td></td><td></td><td></td><td>תדר פעולה: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. דרייבר שסתום 12V: זרם הנעה 2.5 Amp</td></tr><tr><td>מיכל אוויר נייד של 5 גאלון</td><td></td><td>Coleman</td><td>Powermate CT5</td><td>אוויר דחוס: 30 PSI </td></tr><tr><td>ווסתי לחץ</td><td></td><td>Marsh Bellofram</td><td></td><td></td></tr><tr><td>מחולל פולסים</td><td></td><td></td><td>HP8112A</td><td>יצירת תדר הפעלה: 50 MHz</td></tr><tr><td>במת XYZ</td><td></td><td>Newmark Systems</td><td></td><td>עם מנוע פסיעות: במת xy בטווח תנועה של 6inch (NLS4-6-25), במת z בטווח תנועה של 2.5inch (NLS4-2.5-25), בקר 3 צירים (NSC-G3), רזולוציה של 0.1um</td></tr><tr><td>NIH 3T3</td><td>קו תאים</td><td></td><td></td><td>פיברובלסטים</td></tr><tr><td>טריפסין</td><td></td><td></td><td></td><td>תמיסה בריכוז 0.05%</td></tr><tr><td>מצע גידול לתאי NIH 3T3</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>בופר</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>T75</td><td></td><td></td><td></td><td>בקבוקי תרבית רקמה</td></tr><tr><td>מבחנות פלסטיק קוניות</td><td></td><td></td><td></td><td>15 ml, לתרבית רקמה</td></tr></tbody></table>

תא כותרת encapsulation על ידי טיפות

Title Cell Encapsulation by Droplets

תא כותרת Encapsulation על ידי טיפות

שמי הוא Hang Moon. אני עובד עם הפרופסור למניעות. הוא ואני עובדים עם במת XYJ כדי ליצור מבנה תלת-ממדי של תא.שלום, אני PE ולין ואני עובדת על פרויקט הדפסת תאים הכולל כליאה של תאים, מצעי גידול וג'לים. זהו שסתום סולנואיד להזרקת תא ותערובת תאים של aros על מצע גידול לתאים. השסתום מופעל על ידי שני קווי איתות.קו האות מגיע מלוח יבש כאן. האות מגיע מכאן. הקו הזה עובר דרכו, זהו מחולל הפונקציות הראשון.ראשית, התהליך נוצר בדרך התכנותית שלנו. לכן, אם ברצונכם לשנות את הפעימה, תוכלו לשנות את התוכנית באמצעות שורת המתגים או לשלוט במחולל התהליך באמצעות המחשב. השסתום התאי נפתח ונסגר על ידי אות חשמלי, אך התא מקבל אספקה דרך קו זה.התאים והמדיום או האגרו-ג'ל מוזנים באמצעות המזרקים. המזרקים נמצאים בתוך המים, ובתוך המזרק מופעל לחץ על ידי אוויר. האוויר בלחץ מסופק ממכל, כפי שניתן לראות בקו זה.כך, הקו הקטן והאוויר המיונן עוברים דרך מסנן האוויר. מסנן האוויר מסנן את האבק וסוגים אחרים של לכלוך. זהו מחולל הלחץ, המייצר את האות המשמש לפתיחה או לסגירה של שסתום האוויר הסולארי; המחשב מחובר באמצעות מחבר P-I-B-U-S-V.ניתן להשתמש בחיבור ה-USB באופן ישיר דרך המחשב שלנו, מחשב הלפטופ. חיבור זה מחובר לצד זה כאן. ולאחר מכן נוכל לשלוט באמצעות מחשב הלפטופ המבקר כאן.לכן, אם ברצוננו לסנכרן את תנועת הבמה ואת פתיחת הפעמון, ניתן לשלוט בהם באמצעות אותו בקר, שהוא מחשב נייד. כך אנו יכולים לשלוט בתזמון הפתיחה, הסגירה, התנועה והעצירה, ולסנכרן את התנועה עם פתיחת הפעמון.במה זו היא הבמה הממוטרת. היא נעה באופן אוטומטי באמצעות קו אות המוות והמנוע. רזולוציית המנוע היא 0.1 micrometers.בצורה אידיאלית, הוא יכול לצייר קו באורך של עד 100 millimeter. ציר ההזרקה נע למעלה ולמטה באופן זה, ובכך הוא שולט במרווח שבין התשתית לסרט הסולאר.כך הוא יכול לשלוט על גובה ההשפרה. תשתית זו מחוברת לבמות ה-XY כאן, X כאן ו-Y שם. לכן היא נעה במישור XY.לכן הוא שואב דמו של מאפיין בשלביו הימניים, שהם שלושה צירים: X, Y ו-Z. כך שציר הסילון או ציר ה-XY נשלט על ידי אות כאן. קו האות מחובר לבקר התנועה כאן. לבקר התנועה הזה אין שalter ידני כלל, כיוון שאינו ניתן לשליטה ידנית.השליטה מתבצעת באמצעות המחשב הנייד. לפיכך, המחשב הנייד מחובר. בחלק האחורי של הבקר, יש לנו שלושה צירים עבור תא הדפסה XY jet.כך הוא מייצר שלושה סוגים שונים של אותות באופן עצמאי. לאחר מכן, בקר התנועה מתקשר באמצעות מחברי rf 2, 3, 2 המחוברים ישירות ל-USV. ואז ה-USV מחובר למחשב נייד.כך שהשליטה מתבצעת באמצעות מחשב נייד. אנו משתמשים בתוכנת AutoCAD, יוצרים נתיב G-code באופן הזה, ולאחר מכן הוא מומר לשפת מכונה.כך שפת המכונה מועברת כתווים ומספרים פשוטים. לכל מיקום קיימת התייחסות לבמות X, Y ו-Z; כאן אני בוחר את הקובץ המכיל את סוג התכנית הזה, ולאחר מכן פותח את הורדת התכנית בדרך זו. ואז אני בוחר מהקובץ, בדיוק באותו אופן, את קובץ הטקסט.רק קובץ הטקסט יורד, בחרו בקובץ הטקסט והורדה תתבצע באופן אוטומטי מהמחשב הנייד לבקר התנועה של ה-com motion, ולאחר מכן הוא יעבור לתו BAM כפי שציינתי קודם לכן, BAM. בבקבוק זה נמצאים תאי פיברובלסטים של עכברים מסוג NIH 3G. ראשית, אני אשאב את כל המצע.תהליך זה נועד להעביר את התאים, כאשר התאים דבקים לתחתית הבקבוק. לכן, לאחר שאיבת המדיום, אני אהוסיף ששה מיקרוליטר של טריפסין, שהוא אנזים. לאחר שהטריפסין הוכנס לבקבוק, עלינו להמתין שלושה עד חמישה דקות עד שהתאים ינשלטו מהתחתית של הבקבוק.כעת אנו מוכנים להוסיף את המצע ולהעביר את התאים למבחנה לצנטריפוגה. זהו דילול של 1:1. לכן, אני מוסיפה 6 mL מהמצע הזה כאן, ואני אשטוף מעט את התאים כדי לוודא שכולם הועברו.כעת התאים מוכנים לסבב צנטריפוגה בפעולה זו בתוך המבחנה. כעת נסובב את התאים במהירות של 1,000 RPM למשך 3 עד 5 דקות. כעת, לאחר שהתאים שקעו למשקע, אשאב את הנוזל העליון (supernatant).כעת אני אשטוף את התאים עם PBS. פעולה זו נועדה לשלב צביעת התאים. הצבעים שבהם אנו משתמשים הם סובסטראטים של אסטראז.כעת נבצע סבב צנטריפוגה נוסף כדי לשקיע את התאים למשקע. אשאב את ה-PBS ואשחזר את התאים לתוך מדיום לצורך ספירה.אני מערבב את התאים כך שבעת דגימה שלהם, הריכוז יהיה אחיד לאורך כל המבחנה. כעת אני לוקח 100 µL של התאים כדי למדוד את צפיפות התאים. כעת אני מוסיף 100 µL של trypan blue, שהוא צבע.נמתין שלוש עד חמש דקות כדי לאפשר לצבע לחדור דרך ממברנות של תאים מתים. בעת ספירת התאים, לא נספור את התאים הכחולים. התאים מוכנים לספירה באמצעות המוציטומטר (hemo cytometer), ואעביר 50 µL מתערובת התאים לכל צד של ההמוציטומטר.בסדר, אני אכסה זאת באמצעות פלשטר זכוכית. ל-hemo cytometer יש שני צדדים. אני אספור את הצד הראשון, ולאחר ספירת שני הצדדים, אחשב את הממוצע ואכפיל אותו בשניים, כיוון שביצענו דילול של 1:1 עם ה-trypan blue.אם כך, צפיפות התאים שלנו תהיה 135 כפול 10 לraising 4 תאים למל. עבור הניסוי שלנו, נשתמש בתמיסת תאים בריכוז של חצי מיליון תאים למל. ומכיוון שיש לנו 13.5 מיליון תאים, אני אשחזר את התאים ב-27 מל של מצע גידול.אנו משתמשים בשני סוגים שונים של צבעים. זהו מבחן חיות-מוות (live dead assay) מבית Molecular Probes. הצבע הראשון שלנו נקרא calcium am.הצביעה השנייה שלנו נקראת AUM homodimer. היא צובעת תאים מתים. אנו משתמשים בעירור כחול כדי לקבל פלואורסצנציה ירוקה ובעירור ירוק כדי לקבל פלואורסצנציה אדומה. עבור שתי צביעות אלו, בעת הדמיית הדגימות, תמיסת הצביעה תוכרח ב-PBS.ראשית, אעביר 5 mL של PBS (סלוציון סלין עם בופר פוספט) למבחנה. זהו תמיסות סלין. כעת אוסיף 0.5 µL של calcium am per mil.כעת אני מוסיף 2.5 µL של calcium am לשפופרת ושני µL של athe homodimer לכל מ"ל של PBS. כאן נמצא מכשיר ה-btex. הוא דואג לפיזור אחיד של התאים והמצע בכל הנפח.כעת נטען 200 µL של תאים אל תוך המזרק. לאחר מכן נסגור את הפקק, זהו חריץ אטום היטב באופן הזה. אני פותח את השסתום, ואז האוויר נכנס בלחץ, ולאחר מכן אני מכוון את השסתום כך. ובכך משתנה הלחץ.לכן אני מכוון. הלחץ הוא 5 PSI. הלחץ בתוך הצינור הוא 5 PSI.מכאן ועד כאן, החיבור התבצע באמצעות ה-this בתוך החור. לכן, אנו פותחים את הפעמון כאן, ואז התא מוזרק בלחץ של 5 PSI ולאחר מכן נפתח. לאחר מכן, שסתום הסולנואיד מתחיל לפעול.לאחר מכן אנו גולגלים את התשתית. התשתית היא פשוטהית זכוכית רגילה. לאחר מכן אנו טוענים את הכמות המתאימה, ואני מדביק סרט דביק כדי לקבע את התשתית באופן הזה, נכון?ואני פשוט מקבע זאת. אנו מגדירים את כל המערכת – התא, שסתום ה-ary והמצע – ובמהלך תנועת ה-ary הוא מתחיל לפעול. לפיכך, אנו מקבלים את כל המערכת ואז פותחים את שסתום ה-ary להתחלה.ואז אנחנו מזיזים את השולחן כך, נכון? ואז אנחנו יוצרים תבנית על התשתית, תבנית על התשתית, ובום - תו. אני עומד לטבול את הטיפות שהדפסנו בתמיסת הצבע שהכנו קודם לכן.כעת הטיפות יודגרו למשך 10 דקות ולאחר מכן יצולמו. ראשית, אכוון את התמונה דרך העינית. התמונה הראשונה שלנו היא תמונת שדה בהיר בלבד.אני אכבה את האור ואחליף את המסנן כך שנקבל עירור כחול, אשר יראה פלורסצנציה ירוקה. ואת התמונה השלישית שנצלם היא של התאים המתים, שזהו הצביעה של Thm Homodimer. ועם אור ירוק, נקבל פלורסצנציה אדומה.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

אנו מציגים פרוטוקולים אנקפסולציה (3D) 3 ממדי של תאים בתוך הידרוג סינתטי. ההליך המתואר אנקפסולציה עבור שתי השיטות הנפוצות של crosslinking (מייקל מסוג בנוסף ואור יזומה מנגנוני רדיקלים חופשיים), כמו גם מספר טכניקות להערכת התנהגות התא כמוס.

Encapsulation נייד ב הידרוג 3D עבור הנדסת רקמות

שילוב הדור monodisperse טיפה עם סידור אינרציה של תאים וחלקיקים, אנו מתארים שיטה כדי לתמצת המספר הרצוי של תאים או חלקיקים בטיפה אחת בשיעורים kHz. אנחנו מדגימים את יעילות פעמיים העולה על אלו של אנקפסולציה לא מסודרת עבור טיפות יחיד ו פעמיים החלקיקים.

קצב העברת נתונים גבוה תא יחיד ו מרובה תאים מיקרו אנקפסולציה

סרטון זה מדגים טכניקה לצביעת תאים חיסוניים העטופים בהידרוג'ל תלת-ממדי. תרבית ההידרוג'ל המכילה תאי אב עצביים קבועה, חדירה ומטופלת בתמיסת חסימה למניעת כתמים חיסוניים לא ספציפיים. קוקטייל נוגדנים ראשוני מתווסף כדי לקשור חלבונים ספציפיים, ואחריו נוגדנים משניים המסומנים פלואורסצנטית וכתם גרעיני. לאחר מכן הדגימה מורכבת על שקופית ונצפית תחת מיקרוסקופ קונפוקלי.

Immunostaining של תאים עטופים במערכת הידרוג'ל 3D

זה וידאו כתב היד לתאר שיטה המבוססת על תחליב לתמצת תאים יונקים 0.5% עד 10% חרוזים alginate אשר ניתן לייצר בקבוצות גדולות באמצעות כלי זעיר זעיר. תאים המארז יכול להיות מתורבת במבחנה או המושתלים עבור יישומים טיפול סלולרי.

אנקפסולציה תא יונקים ב Alginate חרוזים באמצעות כלי פשוט מתערבל

מאמר זה מציג עבור זריעה נדיר אוכלוסיית תאים באמצעות פיפטה-טיפים droplet microfluidic התקנים על מנת לספק יעילות גבוהה יותר כימוס של תאים בטיפות פרוטוקול.

טיפ פיפטה המבוסס על שיטה עבור תאים זריעה על פלטפורמות Microfluidic רביב

מוצג כאן הוא פרוטוקול לשימוש קילוף פלסטיצידיות כמו פולימר במיקרועטיפת של תאים מונצח למסירה לטווח ארוך של מוצרים ביולוגיים לעיניים מכרסמים.

טכנולוגיית תאים באנקפסולציה להעברת מוצרים ביולוגיים לעין העכבר

ניתן להשתמש בפרוטוקול הניסיוני המוצג לביצוע מדידות בזמן אמת של פעילות cavitation במכשיר תרבות תאים במטרה לאפשר חקירה של התנאים הנדרשים לאספקת תרופות מוצלחת ו/או ביו-אפקטים אחרים.

לימוד טיפול משופר Cavitation

בדיקות טיפות מים בשמן שימושיות לכימיה אנליטית, התפתחות אנזימים וניתוח תאים בודדים, אך בדרך כלל דורשות מיקרופלואידיקה כדי ליצור את הטיפות. כאן, אנו מתארים תחליב בתבנית חלקיקים, גישה נטולת מיקרופלואידים לביצוע בדיקות טיפות.

תחליב בתבנית חלקיקים מאפשר בדיקות טיפות נטולות מיקרופלואידים

מאמר זה מתאר אנקפסולציה של תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים (hPSCs) באמצעות התקן מיקוד זרימה צירית משותפת. אנו מראים שטכנולוגיית אנקפסולציה מיקרופלואידית זו מאפשרת היווצרות יעילה של כדוריות hPSC.

ייצור מיקרופלואידי של מיקרו-מעטפת ליבה הנושאים כדוריות תאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים

מאמר זה מציג שיטה פשוטה לייצור מהיר של שלפוחיות חד-שכבתיות ענקיות עם חלבוני שלד ציטוסקטליים עטופים. השיטה מוכיחה את עצמה כיעילה לשילוב מחדש מלמטה למעלה של מבנים ציטוסקטליים באינטראקציות כליאה וציטוסקלטון-ממברנה.

אנקפסולציה מהירה של שלד ציטוסקי משוחזר בתוך בועיות יונילאמלריות ענקיות

מדריך זה למתחילים מציג פרוטוקול כללי להכנת שלפוחיות ענק חד-פעמיות (GUVs) באמצעות שיטת העברת טיפות, דן בשלבים הקריטיים ומספק תובנות שיעזרו להתאמות אפשריות הנדרשות ליישומים שונים, כולל ביולוגיה סינתטית ומיקרו-רובוטיקה.

שימוש בשיטת העברת טיפות להכנה אמינה של שלפוחיות יונילמלריות ענקיות

למדו שיטת הדפסת תאים תלת-ממדית באמצעות אנקפסולציה של תאים בטיפות ושימוש בשסתומים סולנואידיים לשליטה מדויקת בהדפסה. מחקר זה מקדם את הנדסת הרקמות ומאפשר יצירת מבנים מורכבים ליישומים רפואיים.

תא כותרת Encapsulation על ידי טיפות

גלה סרטונים נוספים