Name: ניתוח של נדידת תאים עצביות קרסט טרונק באמצעות Assay השתנה Zigmond הקאמרי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-19T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 17 s
Description: למדו לנתח נדידת תאים עצביים קרסט טרונק באמצעות Assay השתנה Zigmond הקאמרי. שיטה זו מאפשרת להבחין בין כימוטקסיס לבין השפעות נדידה אחרות בעלות נמוכה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנחנו נותנים תודה מיוחדת ללינוי קים, סטיב גוזמן וUjit Satyarthi לסיוע טכני במהלך הפיתוח של שיטה זו. מיירון הות&#39;ורן, ריצ&#39;רד Spengel, ורוברטו רוחאס מכונת התאים משמשים כאן וספקו סיוע טכני נחוץ. יש לציין, רוברטו רוחאס הופק איור 4. אנחנו גם אסירת תודה על העצות היקרות הערך של סקוט פרייזר לקראת הפיתוח של assay chemotaxis לעיל. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי SCORE-5S06GM048680-13-NIH MBRS לMEdB ופרס מהמחלקה לזיהוי הפלילי, תכנית תמיכת תזת בוגר Northridge לCW.

<ol><li>Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+avian+embryo+as+a+model+to+study+the+development+of+the+neural+crest%3A+a+long+and+still+ongoing+story%5BTitle%5D)+AND+%22Mechanisms+of+Development%22%5BJournal%5D)">The avian embryo as a model to study the development of the neural crest: a long and still ongoing story.</a> Mechanisms of Development. 121, 1089-1102 (2004).</li>
<li>Baker, C. V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+CV+%22Neural+Crest+and+Cranial+Ectodermal+Placodes%22">Neural Crest and Cranial Ectodermal Placodes</a>. , 4th edn, Springer. New York. (2005).</li>
<li>Gammill, L. S., Roffers-Agarwal, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Division+of+labor+during+trunk+neural+crest+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Division of labor during trunk neural crest development.</a> Dev. Biol. 344, 555-565 (2010).</li>
<li>Kulesa, P. M., Gammill, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+migration%3A+patterns%2C+phases+and+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neural crest migration: patterns, phases and signals.</a> Dev. Biol. 344, 566-568 (2010).</li>
<li>Wang, H. U., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eph+family+transmembrane+ligands+can+mediate+repulsive+guidance+of+trunk+neural+crest+migration+and+motor+axon+outgrowth%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Eph family transmembrane ligands can mediate repulsive guidance of trunk neural crest migration and motor axon outgrowth.</a> Neuron. 18, 383-396 (1997).</li>
<li>Krull, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+Eph-related+receptors+and+ligands+confer+rostrocaudal+pattern+to+trunk+neural+crest+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Interactions of Eph-related receptors and ligands confer rostrocaudal pattern to trunk neural crest migration.</a> Curr. Biol. 7, 571-580 (1997).</li>
<li>Gammill, L. S., Gonzalez, C., Gu, C., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+of+trunk+neural+crest+migration+requires+neuropilin+2%2Fsemaphorin+3F+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Development%2C+Cambridge%2C+England%22%5BJournal%5D)">Guidance of trunk neural crest migration requires neuropilin 2/semaphorin 3F signaling.</a> Development, Cambridge, England. , 133-199 (2006).</li>
<li>De Bellard, M. E., Rao, Y., Bronner-Fraser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+function+of+Slit2+in+repulsion+and+enhanced+migration+of+trunk%2C+but+not+vagal%2C+neural+crest+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Dual function of Slit2 in repulsion and enhanced migration of trunk, but not vagal, neural crest cells.</a> The Journal of cell biology. 162, 269-279 (2003).</li>
<li>Kasemeier-Kulesa, J. C., McLennan, R., Romine, M. H., Kulesa, P. M., Lefcort, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CXCR4+controls+ventral+migration+of+sympathetic+precursor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">CXCR4 controls ventral migration of sympathetic precursor cells.</a> J. Neurosci. 30, 13078-13088 (2010).</li>
<li>Zigmond, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ability+of+polymorphonuclear+leukocytes+to+orient+in+gradients+of+chemotactic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Ability of polymorphonuclear leukocytes to orient in gradients of chemotactic factors.</a> The Journal of Cell Biology. 75, 606-616 (1977).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chicken+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morph%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chicken embryo.</a> J. Morph. 88, 49-52 (1951).</li>
<li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> The Journal of Experimental Medicine. 115, 453-466 (1962).</li>
<li>Davis, E. M., Trinkaus, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+cell-to+cell+contacts+for+the+directional+movement+of+neural+crest+cells+within+a+hydrated+collagen+lattice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Embryology+and+Experimental+Morphology%22%5BJournal%5D)">Significance of cell-to cell contacts for the directional movement of neural crest cells within a hydrated collagen lattice.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 63, 29-51 (1981).</li>
<li>Zicha, D., Dunn, G. A., Brown, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+direct-viewing+chemotaxis+chamber%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">A new direct-viewing chemotaxis chamber.</a> Journal of Cell Science. 99, 769-775 (1991).</li>
</ol>

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

מחקר chemotaxis על NCCs הגזע הוכיח מאתגר עבור סדרה של סיבות. NCCs Trunk מהווה אוכלוסייה הטרוגנית של תאי גזע שתתמיין ואם תרבותי לטווח ארוך, ולכן יש לקבל NCCs הגזע מexplantation העיקרי של NT תא מטען ברמה. שיטות מקובלות ללימוד תגובת chemotactic של אוכלוסיות תאים חולקו homogenously במבחנה קשות לבדוק בNCCs הגזע כי הם דורשים ראשונים שהתאים מבודדים וhomogenously replated בchemotaxis התא (לדוגמה, 12 Boyden קאמרית). בידוד מספיק NCCs יכול להיות משעמם כמו explantation של ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> אומגה מדעית </td><td> DM-22 </td><td></td></tr><tr><td> פתרון סטרפטומיצין פניצילין </td><td> אומגה מדעית </td><td> נ.ב.-20 </td><td> ריכוז המניות 100X </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </td><td> אומגה מדעית </td><td> GS-60 </td><td> ריכוז המניות 100X </td></tr><tr><td> סרום שור עוברי </td><td> אומגה מדעית </td><td> FB-11 </td><td> לוט # 105247 (או אחר שניתן להשוות) </td></tr><tr><td> שינוי Zigmond קאמרי </td><td> תוצרת הבית </td><td> N / </td><td> נפח מאגר: ~ 160 ea μl; למפרטים נוספים, ראה איור. 4 ופרוטוקול המשלים ייצור </td></tr><tr><td> צלחת תרבית תאים </td><tד&gt; Denville </td><td> T6040 </td><td> 40 10 מ&quot;מ x </td></tr><tr><td> פיברונקטין </td><td> BD </td><td> 354008 </td><td> מניית 10X prepped על ידי דילול 1 מ&quot;ג FN במיליליטר H 2 O 1 ו המ&quot;ל DMEM 9 </td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> דיג </td><td> 12-548-B </td><td> Precleaned; 22 x 22 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> L15 בינוני </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30525.02 </td><td></td></tr><tr><td> וזלין </td><td> מנחם </td><td> 011110794642 </td><td> 100% </td></tr><tr><td> צינור צנטריפוגה </td><td> Biologix </td><td> 10-9152 </td><td> 15 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> מערכות סלולריות </td><td> 4Z0-850 </td><td> ריכוז המניות 10X </td></tr><tr><td> מזרק </td><td> BD </td><td> 309602 </td><td> 1 מ&quot;ל </td></tr><tr><td> מחט </td><td> BD </td><td> 305127 </td><td> 25 G x 1.5 פנימה </td></tr><tr><td> Alexa פלואוריד 488-IgM </td><td> אניnvitrogen </td><td> A21042 </td><td> מניות הן 2 מ&quot;ג / מ&quot;ל; IgM 7 שומות צבע / שומה </td></tr><tr><td> מלקחיים מבתרים </td><td> FST </td><td> שונה. </td><td> דומון # 5 או 55; נירוסטה או טיטניום, ישר הטתה </td></tr><tr><td> מחט טונגסטן </td><td> N / </td><td> N / </td><td> עשה בית; להציב בעל סיכה </td></tr><tr><td> מלקחי בלאנט </td><td> Tiemann </td><td> 160-18 </td><td> משמש להעברת עוברים לצלצול של מחלמון הביצה </td></tr></tbody></table> פרוטוקול משלים: המצאה של שינוי Zigmond קאמרי אנא עיין באיור 4 כנקודת התייחסות לפרוטוקול שלהלן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש גיליון &quot;אקריליק המלוטש העבה 3/16 (עובי 4.45 מ&quot;מ בפועל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בטבלה ראה, לחתוך חסר קאמרי גדול מדי לממדים הגסים של 33.25 מ&quot;מ x 64.57 מ&quot;מ. זה מאפשר חומר נוסף 3.175 מ&quot;מ לעיבוד שבבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדרה הריקה הקאמרי בvise. עם מכונת טחינה ו6.35 מ&quot;מ (1/4 &quot;) קצת טחנת הסוף, עיבוד שבבי לסיים את הצדדים של התא למידות המדויקות שלהם: 30.07 מ&quot;מ x 61.39 מ&quot;מ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את הריק הקאמרי במכונת הטחינה ולאתר את המרכז הריק לאורך שני צירי x ו-y עם מאתר קצה, ואז לאפס את מיקום המרכז. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש את גובה התא (ציר Z-) על ידי נגיעה קצת טחנת הסוף למשטח העליון ולאפס את הגובה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש קצת טחנת סוף 3.91 מ&quot;מ (0.154 &quot;), קוזז 3.03 המ&quot;מ קצת לאורך ציר X (כיוון חיובי) למאגר הראשון. בגין עיבוד לתוך החדר לעומק של 2.84 מ&quot;מ ואילו נע לאורך ציר y ( כיוון חיובי) ל7.62 מ&quot;מ (0.300 &quot;) ולאחר מכן לעבור ל7.62 מ&quot;מ (0.300&quot;) בכיוון ההפוך (שלילי) לאורך מאגר מלא של 15.24 מ&quot;מ (0.600 &quot;). לקזז קצת ל3.03 מ&quot;מ (0.119 &quot;) לאורך ציר X (כיוון שלילי) ולחזור על אותו התהליך למאגר השני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקם את החדר בקצה שלהולקדוח חור באמצעות 1.09 מ&quot;מ (0.043 אינץ&#39;) מקדח בסיומו של כל מאגר (4 סה&quot;כ) שמחבר את קצו של המאגר לצד של החדר לטעינה בינונית במהלך ניסויים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרה את החדר היטב במים חמים וסבון כדי לסייע להסיר את כל מזהמים כימיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משרים ולשטוף היטב במי החדר מזוקקי פעמים כדי להסיר כל סבון. התאים מוכנים כעת לשימוש כמתואר לעיל. </li></ol>

ניתוח של נדידת תאים עצביות קרסט טרונק באמצעות assay השתנה zigmond הקאמרי

Analysis of Trunk Neural Crest Cell Migration using a Modified Zigmond Chamber Assay

תאי רכס עצביים (NCCs) הם אוכלוסייה זמנית של תאים הנמצאים בפיתוח חוליות שלהגר מצינור העצבי הגבה (NT) לאחר שעבר 1,2 מעבר אפיתל-mesenchymal. בעקבות EMT, NCCs לנדוד מרחקים גדולים לאורך מסלולים סטריאוטיפיים עד שהם מגיעים ליעדיהם. NCCs להתמיין למגוון רחב של סוגי תאים, כוללים תאי עצב, גליה המלנוציטים, תאי 1-3 chromaffin. היכולת של NCCs להגיע ולהכיר מקומות היעד הנכונים שלהם היא יסוד להיווצרות המתאימה של כל המבנים המכילים תא מטען נגזר NCC-3 מרכיבים. הבהרת מנגנוני ההדרכה לגזע NCC הגירה הייתה אפוא עניין בעל חשיבות רבה. מולקולות רבות שהפגינו להדריך NCC הגירת 4. לדוגמה, NCCs גזע ידוע להיות דחוי על ידי רמזי הדרכה שליליים כגון Semaphorin, Ephrin, וligands חריץ 5-8. עם זאת, לאעד לאחרונה היה לי chemoattractants של NCCs מטען זוהה 9. גישות קונבנציונליות במבחנה ללימוד התנהגות chemotactic של תאי חסיד עבודה הטובה ביותר עם ​​תאים הנציחו, homogenously מופץ, אך מאתגרים יותר לפנות לתרבויות מסוימות העיקריות בתאי גזע שתחילה חסרות הפצה הומוגני ומהירות להבדיל (כגון NCCs). גישה אחת לומוגני חלוקת NCCs מטען ללימודי chemotaxis היא לבודד NCCs גזע מתרבויות explant NT העיקריות, ואז להרים וreplate להיות כמעט 100% confluent. עם זאת, גישה זו דורשת ציפוי כמויות ניכרות של זמן ומאמץ כדי explant מספיק תאים, היא קשה, ומפיצת NCCs מטען באופן שונה מזו שנמצא בתנאי vivo. כאן, אנו מדווחים גישה במבחנה כי הוא מסוגל להעריך את התגובות נודדות Chemotaxis ואחרות של NCCs מטען ללא requirinGA חלוקת תא הומוגנית. טכניקה זו מנצלת הדמיה זמן לשגות של ראשוני, ואינה נרתעת NCCs מטען בתוך modified Zigmond קאמרי (קאמרי Zigmond סטנדרטי מתואר במקום אחר 10). על ידי חשיפת NCCs מטען בפריפריה של התרבות לשיפוע chemotactant שניצבת ליווניות הטבעיות חזו, שינויים בקוטביות נודדת הנגרמים על ידי שיפוע chemotactant מיושם ניתן לאתר. טכניקה זו היא זולה, דורשת culturing של רק שני explants NT לטיפול לשכפל, נמנע מהרמת תא קשה (כגון trypsinization), משאיר NCCs מטען בהפצה דומה יותר לתנאי vivo, חותך את כמות הזמן בין explantation וניסויים (שסביר להניח מפחית את הסיכון לבידול), ומאפשר הערכת זמן לשגות של מאפיינים נודדים רבים.

גישה לנתח את ההגירה של תאים (תאי explanted רכס עצביים גזע) הוא תאר. שיטה זו היא זולה, עדינה, ומסוגלת להבחין chemotaxis משני chemokinesis והשפעות אחרות על קוטביות נדידה כגון אלה נגזרים מאינטראקציות תא תא בתוך התרבות העיקרית הגזע עצבי פסגת התא.

ניתוח של נדידת תאים עצביות קרסט טרונק באמצעות Assay השתנה Zigmond הקאמרי

תאי רב רב גוניים של הרכס העצבי (NCCs) הם אוכלוסיית תאים ארעית המופיעה בהתפתחות חוליתיים, אשר נודדים מהצינור העצבי (NT) הגבי לאחר ...

המטרה הכוללת של פרוצדורה זו היא להעריך את יכולתה של מולקולה לעורר כימוטקסיס ותגובות נדידה אחרות בתאי רב-עצב (neural crest) שבודדו מהגב. דבר זה מושג תחילה על ידי בידוד צינורות עצביים מגזע הגב באורך של בערך שמונה עד 15 סומריטים, ותרביות של כל אחד מהצינורות העצביים למשך לילה על לביבות זכוכית נפרדות מצופות בפיברונקטין כדי לאפשר הגירה של תאי הרב-עצב. לאחר מכן, נבחרת תרבית אופטימלית של תאי רב-עצב.מוציאים את צינור העצבים מהתרבית, ומקבעים את זכוכית הכיסוי המכילה את התרבית אל תוך תא זיגמונד (zigmund chamber) משונה, כך שהגבול הישר ביותר של התרבית יהיה מקבילה לווקטור של המפל המולקולרי שיופעל על פני התרבית. השלב השלישי הוא יצירת מפל מולקולרי על פני התרבית, ולאחר מכן צילום נדידת תאי הרכס העצבי ההיקפיים לאורך הגבול הישר שנבחר קודם לכן בתרבית. השלב הסופי הוא מעקב וניתוח של נדידת תאי הרכס העצבי ההיקפיים הממוקמים לאורך הגבול הנבחר של התרבית באמצעות תוכנת Image J.בסופו של דבר, ניתן לקבוע האם המולקולה שנבחרה מסוגלת לשנות את כיווניות התא או מאפייני נדידה אחרים, כגון מהירות, באמצעות ניתוח נתוני מסלול התא שהתקבלו. היתרון המרכזי של טכניקה זו על פני טכניקות קיימות, כגון בדיקת תא בוידן (Boyden chamber assay), הוא עלותה הנמוכה מאוד. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לנתח את נדידתם של תאים מקוטבים כבר בשלב מוקדם בפרי

analysis-trunk-neural-crest-cell-migration-using-modified-zigmond

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

פרוטוקול זה מתאר הדמיה של נוירונים בודדים או תאים הרכס העצבי החיים עוברים דג הזברה. שיטה זו משמשת כדי לבחון התנהגויות הסלולר לוקליזציה אקטין פלואורסצנטי באמצעות מיקרוסקופיה confocal זמן לשגות.

הדמיה חיה של תנועתיות התא ואת cytoskeleton אקטין של נוירונים בודדים לבין תאים קרסט עצבית בעוברים דג הזברה

הגישה לניתוח הגירה גורלו הסופי של העופות לפסגה תאים עצביים שליו, חומוס עוברים chimeric מתואר. שיטה זו היא טכניקה פשוטה וישירה לאיתור תאים עצביים לפסגה במהלך הגירה והבחנה שקשה אחרת להבחין בתוך העובר גוזל unmanipulated.

ניתוח של הגירה קרסט בידול עצבית ועל ידי חוצה מינים להשתלות

בפרוטוקול זה אנו מדגימים כיצד לבנות תאים מותאמים אישית המאפשרים יישום של שדה חשמלי בזרם ישר כדי לאפשר הדמית זמן לשגות של המוח מבוגר נגזר טרנסלוקציה תא מבשר העצבית במהלך galvanotaxis.

Assay Galvanotaxis לניתוח של קינטיקס נדידת תאים העצביים המבשר בשדה חשמלי נוכחי לשימוש חיצוני ישיר

Mesenchyme הגולגולת עובר תנועות morphogenic דרמטיות שעשויים מספקת כוח מניע לגובה של הקפלים...

Assay Explant להערכת התנהגות ניידת של mesenchyme הגולגולת

בשילוב של השתלת תאים, תיוג שלד ציטו וגישות אובדן/רווח תפקוד, פרוטוקול זה מתאר כיצד ניתן להשתמש בצלחת הקדם-כורדלית הפוטנציאלית של דג הזברה הנודד כדי לנתח את תפקודו של גן מועמד בנדידת תאים in vivo.

ניתוח<em&gt; In vivo</em&gt; נדידת תאים באמצעות השתלות תא והדמיה זמן לשגות עוברי דג הזברה

פרוטוקול זה מפרט שיטה להתאמה אישית למדוד נדידת תאים בתגובת chemoattractants שעשוי לשמש גם כדי לקבוע את קצב הדיפוזיה של תרופה מתוך פולימר מטריקס.

תא להתאמה אישי עבור נדידת תאים מדידות

שילוב של טכניקות אופטי מתקדם של סריקת מיקרוסקופ עם זמן עירור קרינה פלואורסצנטית פוטון מרובה אורך גל לייזר בוצע כדי ללכוד דימות ברזולוציה גבוהה, תלת מימדי, בזמן אמת של הרכס העצבי הגירה ב Tg (sox10:EGFP) ו- Tg (foxd3:GFP) דג זברה עוברי.

פוטון רב זמן לשגות הדמיה כדי להמחיש את התפתחות בזמן אמת: ויזואליזציה של העברת תאי הרכס העצבי עוברי דג זברה

פרוטוקול זה מתאר את הניתוח והתרבות של תאי ציצה עצביים הגולגולת מדגמי העכבר, בעיקר למחקר של הגירה תא. אנו מתארים את טכניקות ההדמיה החי בשימוש וניתוח של מהירות וצורה תא שינויים.

חיתוך, תרבות וניתוח של הגולגולת הראשי ציצה עצביים תאים מעכבר לחקר של ציצה של תא העצבים העצבי והגירה

פרוטוקול רב-תכליתי זה מתאר את הבידוד של תאי פסגה עצבית קדם-מיגרטיבית (NCCs) באמצעות כריתה של קפלים עצביים גולגולתיים מעוברי אפרוחים. עם הציפוי והדגירה, NCCs נודדים מגיחים מתוך קצוות עצביים, מה שמאפשר הערכה של מורפולוגיה של תאים ונדידה בסביבה דו-ממדית פשוטה.

הכנה וניתוח מורפולוגי של תרביות תאי צמרת עצביים גולגולתיים של אפרוחים

פרוטוקול זה מתאר ניסוי נדידה חוץ גופית המתאים לניתוח פונקציונלי של המולקולות המעורבות בנדידת in vivo של תאי פסגה עצבית לתוך מטריצה חוץ-תאית עשירה בהיאלורונן.

במבחנה חקר ההשפעות של מטריצה חוץ-תאית עשירה בהיאלורונן על נדידת תאי קרסט עצביים

למדו לנתח נדידת תאים עצביים קרסט טרונק באמצעות Assay השתנה Zigmond הקאמרי. שיטה זו מאפשרת להבחין בין כימוטקסיס לבין השפעות נדידה אחרות בעלות נמוכה.

ניתוח של נדידת תאים עצביות קרסט טרונק באמצעות Assay השתנה Zigmond הקאמרי

גלה סרטונים נוספים