Name: Dissection, תרבות וניתוח של Xenopus laevis רקמת רשתית עוברית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 22 s
Description: למד כיצד לבצע ניתוח, תרבית וניתוח של רקמת רשתית עוברית מ-Xenopus laevis באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית. שיטה זו מאפשרת חקר פעילות סידן בתאי רשתית ומסייעת להבנת פיזיולוגיה עינית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים אדיבות ד&quot;ר ג&#39;ון הייס לתסריטים; בני זוג. אריק בראדלי וכריסטופר דל ניגר לקבלת סיוע במיקרוסקופיה confocal; דר יוז, לורה Odorizzi, אלכס Garafalo, רבקה Lowden, וליז MacMurray עבור עבודתם בפיתוח פרויקט ומתן נתונים ראשוניים; ד&quot;ר גרג סמית להצעות מועילות על ניתוח סטטיסטי. עבודה זו נתמכה על ידי מענק NIH (NINDS IR15N5067566-01) לMSS והווארד יוז הרפואי במכון לחינוך מדעי גרנט למכללת ויליאם ומרי.

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

עם סוגי תאים המאופיינים היטב הנשמרים לאורך כל החוליות, הרשתית מספקת מודל שימושי לחקר התהליכים מולקולריים התאיים המסדירים מפרט ובידול סוג תא. תרבית תאים ראשונית מקנה שיטה רבה עצמה לחקר מגוון רחב של תהליכים, כולל ביטוי גנים, דינמיקת חלבון וסידן ופעילות חשמלית ברמת רזולוצית תא בודדה. כאן אנו מציגים טכניקה פשוטה לתרבית תאים ראשונית מרקמת רשתית משוערת גזורה בXenopus laevis, האורגניזם במיוחד נוח ללימודים כאלה בהתחשב בכך שהרשתית המשוערת היא נגישה מהשלבים מאוד המוקדמים של פיתוח ו...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> לניתוחים וculturing </td></tr><tr><td> מנות BD פלקון קלות גריפ רקמות תרבות, 35 מ&quot;מ </td><td> דיג </td><td> 08-772A </td><td></td></tr><tr><td> כלים חד פוליסטירן פטרי, 60 15 מ&quot;מ x </td><td> דיג </td><td> 0875713A </td><td></td></tr><tr><td> 35 מנות מ&quot;מ Nunclon Surface פטרי (עם Airvent) </td><td> דיג </td><td> 12-565-91 </td><td></td></tr><tr><td> דומון פיין מלקחיים (Dumostar # 55) </td><td> דיג </td><td> NC9341917 </td><td></td></tr><tr><td> Cellattice מייקר קבע coverslip פלסטיק, 25 מ&quot;מ </td><td> דיג </td><td> 50-313-17 </td><td></td></tr><tr><td> אתיל-מ-Aminobenzoate Methanesulfonate המלח (MS-222) </td><td> חבר הפרלמנט Biomedicals, LLC </td><td> 103106 </td><td></td></tr><tr><td> סולפט גנטמיצין </td><td> אנזו מדעי חיים </td><td> 380-003-G025 </td><td></td></tr><tr><td> Gibco טריפסין (1:250) אבקה </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> 27250-018 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase B מClostridium histolyticum </td><td> רוש </td><td> 11088831001 </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין סטרפטומיצין </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> סולפט בלו נייל (אופציונלי) </td><td> Pfaltz &amp; באואר </td><td> N05550 </td><td></td></tr><tr><td> מערכת סינון אבק 500 מ&quot;ל / אחסון בקבוקים, 0.22 מיקרומטר ממברנה הנקבובית 33.2 סנטימטר 2 CN </td><td> קורנינג </td><td> 430758 </td><td></td></tr><tr><td></td><td> &lt;/ Td&gt; <td></td><td> לדימות סידן </td></tr><tr><td> Fluo-04:00 פתרון 1 מ&quot;מ DMSO, תא קבוע </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> F-14217 </td><td></td></tr><tr><td> ה-F-127 10% פתרון Pluronic במים </td><td> חי טכנולוגיות </td><td> P-6866 </td><td></td></tr><tr><td> מערכת מיקרוסקופ LSM 510 Confocal </td><td> Zeiss </td><td> דגם הופסק </td><td></td></tr><tr><td> חסימת מגיב </td><td> רוש </td><td> 11096176001 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> לפלורסנט כלאה באתר (FISH) </td></tr><tr><td> אנטי Digoxigenin-POD, שברי Fab </td><td> רוש </td><td> 11207733910 </td><td></td></tr><tr><td> נוגדן אנטי DNP-HRP </td><td> פרקין אלמר- </td><td> NEL747A </td><td></td></tr><tr><td> Cy3NHS אסטר </td><td> GE Healthcare </td><td> PA13101 </td><td></td></tr><tr><td> NHS-fluorescein </td><td> Thermo Scientific </td><td> 46409 </td><td></td></tr><tr><td> Formamide, deionized </td><td> Amresco </td><td> 0606-950ML </td><td></td></tr><tr><td> Torula רנ&quot;א, הסוג IX </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> R3629 </td><td></td></tr><tr><td> מלח נתרן הפארין, מרירית מעי חזירית </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> H3393-250KU </td><td></td></tr><tr><td> בחורים </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> C3023 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> טבלת 2. ריאגנטים וציוד ספציפיים. </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td><table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> פתרון </td><td> עיון </td><td> תוכן </td></tr><tr><td> בינוני תא תרבות </td><td> צ&#39;אנג ושפיצר, 2009 54 </td><td> 116 המ&quot;מ NaCl 0.67 mM KCl 2 המ&quot;מ CaCl 2 1.31 mM MgSO 4 4.6 mM טריס % 1 (v: v) פניצילין / סטרפטומיצין התאם pH ל 7.8 עם HCl. סנן לעקר על ידי עובר דרך מסנן CN מיקרומטר 0.22. לאחסן ב 4 ° C. </td></tr><tr><td> סידן מגנזיום בינוני חינם (CMF) </td><td> הגו et al, 1994 42;. גו ושפיצר, 1995 55 </td><td> 116 המ&quot;מ NaCl 0.67 mM KCl 4.6 mM טריס 0.4 המ&quot;מ EDTA % 1 (v: v) פניצילין / סטרפטומיצין התאם pH ל 7.8 עם HCl. סנן לעקר על ידי עובר דרך מסנן CN מיקרומטר 0.22. לאחסן ב 4 ° C. </td></tr><tr><td> מאגר החומצה Maleic (MAB) </td><td> Sive et al., 2000 53 </td><td> 100 חומצת maleic mM 150 המ&quot;מ NaCl (pH 7.5). </td></tr><tr><td> אצבעותיו של מארק השינוי (MMR), 10X </td><td> Sive et al., 2000 53 </td><td> 100 המ&quot;מימ NaCl mM KCl 1 המ&quot;מ MgSO 4 2 המ&quot;מ CaCl 2 5 מ&quot;מ HEPES חומציות מותאמת ל7.4 עם NaOH 0.1x MMR מכיל גם 50 מ&quot;ג / המ&quot;ל גנטמיצין סולפט והחומציות מותאם ל 7.4 עם NaOH. </td></tr><tr><td> פתרון MEMFA, 10X </td><td> Sive et al., 2000 53 </td><td> 0.1 מגבי M (pH 7.4) 2 המ&quot;מ EGTA 1 המ&quot;מ MgSO 4 3.7% פורמלדהיד פתרון 10X, ללא פורמלדהיד, ניתן לאחסן ב 4 ° C. פורמלדהיד הוסיף טרי (1/10 נפח של 37% מניות רגילות). </td></tr><tr><td> במאגר ההכלאה באתר </td><td> סיבדואר et al., 2000 53 </td><td> 50% פוראמיד SSC 5X 1 מ&quot;ג / המ&quot;ל Torula רנ&quot;א 100 מ&quot;ג / המ&quot;ל הפרין הפתרון של 1X Denhart 0.1% Tween 20 בחורי 0.1% 10 mM EDTA. </td></tr></tbody></table> פתרונות. * גנטמיצין, אנטיביוטיקה, משמש בפתרונים שלנו, תוך MMR פניצילין וסטרפטומיצין משמשים בתקשורת התרבות שלנו. </td></tr></tbody></table>

dissection, תרבות וניתוח של<em&gt; xenopus laevis</em&gt; רקמת רשתית עוברית

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

התהליך שבו האזור הקדמי של הצלחת העצבית מעורר רשתית החוליות ממשיך להיות מוקד עיקרי של מחקר קליני ובסיסי. בנוסף לרלוונטיות הרפואיות הברורות להבנה וטיפול במחל רשתית, הפיתוח של רשתית החוליות ממשיך לשמש כמערכת מודל חשובה ואלגנטית לנחישות הבנה עצבית תא סוג ובידול 1-16. הרשתית העצבית מורכבת משישה סוגים בדידים תא (גנגליון, photoreceptors amacrine, אופקי, תאים דו קוטביים, ותאי גליה מולר) מסודרים בשכבות סטריאוטיפיות, דפוס הנשמר במידה רבה בין כל החוליות 12,14-18. בעוד לומד רשתית בעובר מתפתח בשלמות נדרשה באופן ברור להבנה כיצד האיבר המורכב הזה מתפתח מבליטה של ​​המוח הקדמי למבנה שכבתי, ישנן שאלות רבות שתועלנה לכאן ולכאןמ העסקת גישות באמצעות תרבית תאים ראשוניות של תאי רשתית משוערים 7,19-23. לדוגמה, ניתוח תאים מרקמות שהוסרו וניתקו בשלבים שונים מאפשר לאדם להבחין במצב של מפרט של תאים בודדים בשלבי התפתחות שונים, כלומר, גורלם של התאים בהיעדר אינטראקציות עם רקמות שכנות 8,19-22 ,24-33. תרבית תאים עיקרית גם מאפשרת לחוקר לטיפול בתרבות עם חומרים כימיים מסוימים ולנתח את התוצאות ברמת תא בודדה 5,8,21,24,27-30,33-39. Xenopus laevis, מערכת מודל קלסית ללימוד התפתחות עצבית מוקדמת 19,27,29,31-32,40-42, משמשת כמערכת מתאימה במיוחד לתרבות הראשונית של תאי רשתית 10,38,43-45. רקמת רשתית משוערת היא נגישה מהשלבים המוקדמים של פיתוח, מייד לאחר השראה עצבית 25,38,43. בנוסף, ניתן הבכל תא בעובר מכיל אספקה ​​של חלמון, תאי רשתית יכולים להיות מתורבתים בטכניקה פשוטה מאוד שהוגדרה בהיקף של תמיסת מלח שנאגר, וכך להסיר את ההשפעות המבלבלות של דגירה או מוצרים אחרים המבוססים על סרום 10,24,44-45 . עם זאת, הבידוד של רקמת הרשתית מרקמות סובבות ועיבוד שלאחר מכן מאתגר. כאן, אנו מציגים שיטה לנתיחה והניתוק של תאי רשתית בXenopus laevis שישמשו להכנת תרביות תאים ראשוניות שיהיו, בתורו, להיות מנותחים לפעילות הסידן וביטוי גנים ברזולוציה של תאים בודדים. בעוד הנושא שהוצג במאמר זה הוא הניתוח של הארעיים סיד ספונטניים, הטכניקה היא רחב ישימה למגוון רחב של שאלות מחקר וגישות (איור 1).

דוגמאות לשלפוחית ​​נתחה בהצלחה אופטית (שלב 25) ורשתיות עיניים (שלב 35) מוצגות באיורי 2E וי 2. בעוד שניתן להשתמש בפרוטוקול זה בשלבים שונים של פיתוח, זה הוא קריטי להשגת רקמת רשתית רק כדי להבטיח דיוק לניסויים נוספים. מוציא בזהירות את האפידרמיס בכל השלבים ולהבטיח כי המלקחיים שלך לא לנקב את רקמת הרשתית. בשלב 35 ומעלה, העדשה ניתן לראות כשכבה ברורה על גבי הרשתית וניתן להסיר על ידי גירוד זהיר באמצעות מלקחיים. <p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:...

Xenopus laevis מספק מערכת מודל אידיאלית ללימוד מפרט גורל תא ותפקוד פיסיולוגי של תאי רשתית בודדים בתרבית תאים ראשוניות. כאן אנו מציגים טכניקה לביתור רקמות רשתית ויצירת תרביות תאים ראשוניות שהם צלמו לפעילות הסידן ונותחו על ידי כלאה באתר.

Dissection, תרבות וניתוח של<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; רקמת רשתית עוברית

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

המטרה הכללית של הליך זה היא להכין תרבית תאים ראשונית של תאי רשתית של xenopus. הדבר מבוצע תחילה על ידי הסרת הרקמות המקיפות כדי לחשוף את הרשתית. השלב השני הוא חיתוך רקמת הרשתית.בשלב הבא, רקמת הרשתית מופרדת לתאים בודדים. השלב הסופי הוא זריעת תאי הרשתית על צלחת UnCloned והוספת flu oh 4:00 AM לצורך דימוי סידן. לבסוף, נעשה שימוש במיקרוסקופיה קונפוקלית כדי לזהות פעילות סידן בתרבית תאי הרשתית.שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחומי הביולוגיה ההתפתחותית, הנוירוביולוגיה והביולוגיה התאית, כגון תפקידם של הסידן והפעילות החשמלית בהתפתחות הרשתית, כמו גם ביטוי גנים ברמה של תא בודד. באופן כללי, אנשים שאינם מנוסים בפרוצדורה זו יתקלו בקשיים, מכיוון שנדרשת מוטוריקה עדינה לצורך ביצוע דיסקציות מדויקות ובזמן. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן שלבי הדיסקציה הם מורכבים ודורשים תיאום עין-יד מדויק.כדי להתחיל את הפרוצדורה בתוך המCחלוץ, הכינו וסמנו את הפריטים הבאים: צלחת פטרי פלסטית אחת בקוטר 60 מילימטר המכילה 10 מיליליטר מצע גידול תאים, שתשמש כצלחת ניתוח. באופן רשות, ניתן להוסיף לצלחת הניתוח 10 מיליגרם collagenase B כדי להגיע לריכוז סופי של 1.0 מיליגרם למיליליטר, במטרה לסייע בהפרדת שכבות הרקמה בעת ניתוח של עוברי שלב 25 או שלבים מוקדמים יותר.בנוסף, הכינו צלחת השתקפות של 35 מילימטר המכילה 2 מיליליטר מצע גידול לתאים, שתשמש כצלחת תרבית. הכינו שפופרת מיקרוצנטריפוגה ריקה של 1.5 מיליליטר שתשמש כשפופרת לפירוק האקספלאנט (explant) ושפופרת פאלקון קונית של 15 מיליליטר המכילה 15 מיליליטר.מדיום לתרבית תאים. לאחר מכן, הכין שתי צלחות פטרי פלסטיק בקוטר 35 מילימטר המכילות 2 מיליליטר CMF לצורך הדיסקציה, אחת שתשמש כצלחת לפירוק האקספלנט (explan dissociation plate), והשנייה כצלחת לשטיפת האקספלנט מחוץ למCב. הכן שתי צלחות פטרי פלסטיק בקוטר 60 מילימטר המכילות 10 מיליליטר.0.1 XMMR, אחד ישמש כלוחית החזקה, השני כלוחית אחות, וצלחת פטרי פלסטיק אחת נוספת בקוטר 60 מילימטר המכילה 10 מיליליטר 0.1 XMMR בתוספת 0.5 מיליגרם למילילטר MS 2 22. לאחר מכן, הוסף 40 מיקרוליטר 5% tripsin ב-CMF ללוחית הדיסוציאציה של האקספלנט.סובבו את המבחנה לערבוב, ולאחר מכן הניחו בצד. כעת, המשיכו לניתוח באמצעות מיקרוסקופ ניתוח, תוך שימוש בשני זוגות של פינצטות עדינות. בצעו חתך סגיטלי מרכזי בצד הוונטרלי של העובר, החל מהקצה האחורי, והמשיכו דרך בלוטת הסימנט (cement gland) בחלק הקדמי של העובר.פתחו בזהירות את העובר על ידי הרחבה של שני צדי החתך. פעולה זו תביא לכך שהצד הגבי של העובר יפנה כלפי לוח הניתוח. לאחר מכן, פתחו את האקטודרמה הבנטרלית כדי לחשוף את האנדודרמה והמזודרמה.בשלב הבא, הסירו את האנדודרם והמזודרם, שהם השכבה הראשונה והגדולה ביותר של רקמה זו. האנדודרם בעל מראה מאוד פלומי, עם תאים גדולים וארגון שאינו ניכר. לאחר הסרת שכבה זו, הסומיטים וה-Noor יהיו גלויים.לשיפור הניגודיות, העבירו את העובר לפיתרי (Petri dish) פלסטיק נפרד בנפח 60 מילימטר המכיל 10 מיליליטר של מצע לתרבית תאים ו-100 מיקרוליטר של תמיסת Nile blue sulfate בריכוז 1%, והדגירו למשך שתי עד שלוש דקות. לאחר מכן, העבירו אותו בחזרה לצלחת הדיסקציה. פעולה זו תצבע את האקטודרם, הסומריטים ואת ה-Noor כדי להקל על הזיהוי וההתמצאות.תוך התמקדות בחלק הקדמי של העובר, הסירו בזהירות את ה-Noor ואת שאריות המזoderm כדי לחשוף את המוח ואת השקיקים האופטיים. לאחר שהמוח והשקיקים האופטיים נחשפו לחלוטין, השתמשו בפינצטה כדי לחתוך את צינור העצבים ואת האקטודרם שמתחתיו, מיד מאחורי המוח. הפכו חלק זה כך שהאקטודרם יהיה למעלה.יש לנקוט בזהירות כדי למנוע פגיעה בבקעות האופטיות (optic vesicles) שמתחתיהן, ולהסיר בזהירות את האקטודרמה. לבסוף, הפרד את הבקעות האופטיות מהמוח באמצעות פינצטה במידה ומדובר בעובר השלים שלב 25. ראשית, הסר את החלק הוונטרלי של העובר באמצעות פינצטה בלוח ההרדמה.לניגודיות טובה יותר, העבירו את העובר לצלחת פטרי פלסטית של 60 מילימטר המכילה 10 מיליליטר של 0.1 XMMR ו-100 מיקרוליטר של 1% Nile blue sulfate למשך שתי עד שלוש דקות כדי לצבוע את האקטודרם. לאחר מכן העבירו אותו ללוח הדיסקציה. לאחר מכן, תוך כדי החזקת העובר במקומו, הסירו בזהירות את הרשתית או את השקיק האופטי הנמצאים ישירות מתחת לאקטודרם העוטף.לאחר השלמת הדיסקציה של שלפוחית העין (optic vesicle) או הרשתית, העבירו אותה בזהירות ללוח שטיפת ה-X explan באמצעות מיקרופיפט P 100 עם טיפ עמיד לארטוזולים. הימנעו ממגע של הרקמה עם ממשקי אוויר-נוזל. לאחר מכן, המתינו 30 שניות.שעתה, העבירו 80 µL של 0.1% trypsin ב-CMF מלוח הפירוק של הרקמה (explan dissociation plate) אל מבחנה הפירוק של הרקמה. לאחר מכן, העבירו את הרשתית או את השלפוחית האופטית מלוח השטיפה של הרקמה אל מבחנה הפירוק של הרקמה. יש להימנע מהעברת תמיסת השטיפה של הרקמה.לאחר מכן, יש להמתין שעה אחת בטמפרטורת החדר כדי לאפשר לרקמה להתפרק בתוך מבחנת הפירוק של האקספלאנט. אם בכוונתכם לצלם מספר תמונות של התאים במהלך הניסוי, הצמידו רשת לצד התחתון של פלטת התרבית בעזרת טיפות קטנות של דבק מהיר. פעולה זו תאפשר צילום של תאים זהים באוריינטציות זהות בנקודות שונות במהלך הליך זריעת התאים.ראשית, הוצאו באיטיות 40 µL מהתמיסה משפופרת הדיסוציאציה של ה-explan והשליכו אותה. לאחר מכן, השתמשו ב-P 100 עם טיפ עמיד לארוסולים כדי להעביר את התאים באיטיות לצלחת התרבית. בעת שאיבת התאים אל הצלחת, בצעו פיפטור באיטיות ושמרו את התאים בשטח קטן במרכז הצלחת.איור זה מציג דוגמה לפעילות הסידן של תא בודד במהלך שעת דימות אחת. איורים אלו מספקים תוצאות מייצגות של ניסויי דימות סידן בתאי רשתית עובריים, כפי שנותחו בשלבים התפתחותיים שונים. בקצרה, התוצאות מראות כי הסידן מוסדר התפתחותית עם שיאי פריקה (spiking peaks) בשלב 35, במונחים של מתאם בין פעילות הסידן לבין תאים חיוביים לגשש ספציפי.בניסויים בדגים, למרות שלא נמצאו הבדלים מובהקים סטטיסטית, נצפתה מגמה שבה תאים חיוביים לסמן GABAergic הראו רמות גבוהות יותר של פעילות calcium spiking מאשר תאים חיוביים לסמן glutamatergic או לקידוד של הגן PT F1 A.A, גורם שעתקת הקשור לקידום הפנוטיפ GABAergic. לאחר רכישת המיומנות, ניתן להשלים טכניקה זו בערך שלושה וחצי שעות עבור פלטה אחת, בביצוע נכון. בעקבות הליך זה, ניתן להשתמש בשיטות אחרות כגון תרביות תאים, C two hybridization או הקלטות אלקטרופיזיולוגיות כדי לענות על שאלות נוספות, כגון אילו תאים מביעים סמנים פנוטיפיים ספציפיים, או כדי לנתח הקלטות אלקטרופיזיולוגיות. לאחר צפייה בסרטון זה, תהיה לכם הבנה טובה של אופן הדיסקציה של רקמת רשתית, פירוק רקמת הרשתית לתאים בודדים (dissociation) והזרעת תאי רשתית על פלטה.

dissection-culture-analysis-xenopus-laevis-embryonic-retinal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

Xenopus עובריים epithelia הם מערכת מודל אידיאלי ללמוד התנהגויות התא כגון פיתוח הקוטביות ולשנות צורה במהלך המורפוגנזה אפיתל. היסטולוגיה מסורתית של דגימות קבוע ויותר כהשלמה הדמיה לחיות תאים confocal. כאן אנו מדגימים שיטות לבודד ברקמות הצפרדע לדמיין לתאי האפיתל לחיות לחיות cytoskeleton שלהם באמצעות תאים מיקרוסקופיה confocal.

Live-תא הדמיה וניתוח כמותי של תאים אפיתל עובריים ב Xenopus laevis</em

מאמר זה מתאר גישה microdissect הרשתיות דג הזברה עם ובלי אפיתל הפיגמנט ברשתית מחוברת, 1-3 עוברים ימים postfertilization.

Microdissection של רקמות דג הזברה העין עובריים

נתיחה ואימונוהיסטוכימיה של זחל, גלמים ומבוגרים<em&gt; דרוזופילה</em&gt; רשתיות

סרטון זה מתאר כיצד לנתח ולבודד את קומפלקס עין-מוח מגלמי דרוזופילה. הפרוטוקול המוצג מדגים את ההליך המניב רקמות באיכות גבוהה, התואמות, למשל, immunostaining, כמו גם, ניסויים אחרים ביטוי גנים.

דיסקציה של קומפלקס עין-מוח מגלמי זבובים: שיטה לבידוד רקמת רשתית

פרוטוקול זה מתאר כיצד לנתח פסגת premigratory גולגולת עצבית (NC) מneurulas laevis Xenopus. יכול להיות מצופה explants אלה בפיברונקטין ותרבית במבחנה, או מורכב בחזרה לעוברי מארח. טכניקה זו מאפשרת חקר המנגנונים של מעבר NC האפיתל לmesenchyme, הגירה, ובידול.

Dissection של<em&gt; Laevis Xenopus</em&gt; העצבי קרסט עבור<em&gt; במבחנה</em&gt; Explant תרבות או<em&gt; In vivo</em&gt; השתלות

פרוטוקול זה מתאר שיטה לנתח, ניסוי לתפעל וexplants רשתית תרבות שלם מעוברי תרנגולת. תרבויות explant הן שימושיות כאשר שיעור הצלחה גבוהה, יעילות ושחזור יש צורך לבדוק את ההשפעות של פלסמידים לelectroporation ו / או חומרים מגיב, כלומר, מעכבים האנזימטית.

Explants רשתית שלם מעוף עוברים לטיפולי Electroporation וכימיים מגיב

מאמר זה מציג שיטה כירורגית ניקוד דרוזופילה הרשתיות הגולמי יחד עם פרוטוקולים עיבוד רקמה אימונוהיסטוכימיה, ניתוח המערבי של RNA-חילוץ.

דיסקציה של הרשתית הגולמי דרוזופילה אימונוהיסטוכימיה, ניתוח המערבי של RNA בידוד

מחקר זה נועד לפתח מודל תרבות רשתית אורגניוטיפית אנושית חדשנית (HORC) המונעת פגיעה בשלמות הרשתית במהלך טיפול בהסבר. זה מושגת על ידי פולחן הרשתית עם הזגוזית יתר על המידה ואת אפיתל הפיגמנט ברשתית הבסיסית-choroid (RPE-choroid) ו sclera.

אפיון טכניקה חדשנית של תרבות רשתית אורגניוטיפית אנושית

פרוטוקול זה, אשר דווח במקור על ידי פרננדז-Godino ואח '. בשנת 20161, מתאר שיטה לבודד ביעילות ותרבות העכבר RPE תאים, אשר יוצרים מונולייר RPE פונקציונלי מקוטב בתוך שבוע על לוחות Transwell. ההליך לוקח בערך 3 שעות.

ניתוח יעיל ותרבות של תאי אפיתל פיגמנט רשתית העכבר הראשי

פרוטוקול זה מציג ומתאר שלבים לבידוד, דיסקציה, התרבות והכתמה של צמחי רשתית המתקבלים מעכבר בוגר. שיטה זו מועילה כמודל ex vivo לחקר מחלות נוירו-וסקולריות שונות ברשתית כגון רטינופתיה סוכרתית.

השתלת הרשתית של הרשתית של עכבר בוגר כמודל ex vivo לחקר מחלות נוירו-וסקולריות ברשתית

הרשתית מציגה ארגון מרחבי מורכב על פני המבנה הלמינרי שלה. טכניקות מודרניות של טרנסקריפטומיקה מרחבית וריצוף דורשות קטעי רקמה בעובי &lt; 20 מיקרומטר, מה שמגביל את תחולת מחקר הרשתית. שיטת הקפאה טרייה זו מייצרת קטעי פנים דקים של רשתית העכבר תוך שמירה על יחסים מרחביים מישוריים, ומאפשרת מיפוי מולקולרי מקיף על פני הלמינות.

פנים פנים הקפאה של רשתית עכבר לניתוח מרחבי מרחבי בממדים גבוהים

למד כיצד לבצע ניתוח, תרבית וניתוח של רקמת רשתית עוברית מ-Xenopus laevis באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית. שיטה זו מאפשרת חקר פעילות סידן בתאי רשתית ומסייעת להבנת פיזיולוגיה עינית.

Dissection, תרבות וניתוח של

גלה סרטונים נוספים