Name: גזירה האוסטאוקלסטים מעכבר מח עצם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: למדו לבודד אוסטאוקלסטים ממח עצם עכבר בכמויות גדולות באמצעות הפרדת צפיפות וגידול תאים. שיטה זו מאפשרת חקר ביולוגיית עצם ומחלות כגון אוסטאופורוזיס.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מכירים את התמיכה של מענקי NIH R01 DE021683, R01 DE019434, U01 HL099776, קרן Oak והמעבדה Hagey לילדי רפואת רגנרטיבית.

הערה: הצהרה אתית: כל המחקר מעורב בעלי חיים בעלי חוליות בוצע בפרוטוקולים בהתאם אושרו על ידי אוניברסיטת סטנפורד המנהלית הלוח במעבדת טיפול בבעלי חיים (APLAC). 1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שלו 10 מיליליטר של תקשורת הפרדת תא שיפוע צפיפות זמינה מסחרי (המכילה diatrizoate polysucrose ונתרן, מותאם לצפיפות של 1.077 גר &#39;/ מיליליטר) לבוא לRT בצינור חרוטי 50 מיליליטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן cytometry זרימה (FACS) חיץ עם פוספט 1x סליין (PBS) ו- 2% עוברי עגל בסרום (FCS). קח aliquot 50 מ&quot;ל ולשמור aliquot זה ב RT לשימוש במהלך שלב תקשורת הפרדת תא שיפוע צפיפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יש לי דלי הקרח מוכן כדי לשמור על רקמה מבודדת ותאים בבמהלך הליך הבידוד. </li></ol> 2. הכן תרבות מדיה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תקשורת בסיסית: ממ (בינוני חיוני מינימאלי), ללא פנול אדום (500 מיליליטר), גלוטמט (1x), FCS (10x), 10,000 יחידות / מיליליטר penicillin (1x). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סנן תקשורת בסיסית עם מסנן 0.22 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תקשורת האינדוקציה מקרופאג מח עצם: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 50 מיליליטר של התקשורת הבסיסית מוכנה בשלב 2.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף פרוסטגלנדין E2 (PGE2, ז מר 352.465 / mol) בשעה 10 -7 ריכוז סופי M. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף מקרופאג-מושבה מגרה פקטור (M-CSF) בשעה 10 ng / ml. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תסנן את הפתרון הסופי של מקרופאג מח עצם גירוי תקשורת. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן תקשורת אינדוקציה האוסטאוקלסטים: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 50 מיליליטר של התקשורת הבסיסית מוכנה בשלב 2.1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף פרוסטגלנדין E2 (PGE2, ז מר 352.465 / mol) בשעה 10 -7 ריכוז סופי M </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף מקרופאג-מושבה מגרה פקטור (M-CSF) בשעה 10 ng / ml. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף RANKL ב 10 ng / ml. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אל תסנן את הפתרון הסופי של תקשורת אינדוקציה האוסטאוקלסטים. </li></ol></li></ol> בידוד 3. מח העצם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים C57BL עכבר אחד / 6בשיטת שאיפת פחמן דו חמצני, ואחריו נקע בצוואר הרחם. הערה: מכרסמים חייבים להיות מורדמים על ידי צוות מיומן תוך שימוש בטכניקה, ציוד וסוכנים מתאימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עמדה ולאבטח את העכבר על לוח לנתיחה ולרסס עם אלכוהול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנתח את עצמות הירך, tibiae, humeri ועמוד השדרה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תתחיל עם העכבר במצב שכיבה. עושה חתך אנכי לאורך הגפה התחתונה ולהתחיל לנתח לאורכו של עצם הירך ועצם השוק על ידי חלוקת קבצים מצורפים רקמות רכות. לבסוף, לנקוע עצמות ממפרק הברך והירך לשחרר עצמות באופן מלא מהשלד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך לעשות חתך לאורכו של האיבר העליון לבודד את הזרוע. לנקוע הקרסול במפרקי כתף ומרפק ידי לנתח קובץ מצורף קופסית רקמה רכה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבסוף, להפוך את העכבר מעל, כך שהעכבר שכובה פרקדן. לעשות חתך בעור לאורכו של עמוד השדרה, בקו האמצע. שים לב הרך ליד חוליות עמוד שדרהרקמה בכל צד של עמוד השדרה ולַחתוֹך לאורך הקצה הגרמי של עמוד השדרה, לנתח באמצעות מסת הרקמה הרכה ליד חוליות עמוד השדרה. בעזרת מספריים, לעשות חתך אופקי על פני עמוד השדרה בבסיס הצוואר, ובסופו של עמוד השדרה, רק הפרוקסימלי להחדרת הזנב, לשחרר את עמוד השדרה מקובץ מצורף רקמות רכות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ברגע שהעצמות נקצרים, לשמור אותם במאגר FACS על קרח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בנייר טישו כדי לנקות שרירים ורקמות רכות מהעצמות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח את העצמות ניקו למכתש ועלי עם 3 מיליליטר של חיץ FACS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרסק את העצמות בעדינות במכתש ועלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את הנוזל מוכתם בדם ולהעביר לתוך צינור 50 מיליליטר חרוטי על ידי העברת הפתרון דרך מסננת תא 70 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מיליליטר FACS חיץ עד לשד העצמות המרוסקים ולמחוץ נוסף. שוב, להסיר את הנוזל בעזרת פיפטה ולהעביר לצינור חרוטי 50 מיליליטר דרך מסננת 70 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדרך כלל לרסק את השפה טווית עצמותce עד שלוש פעמים במאגר FACS טרי, בעזרת מכתש ועלי, בכל פעם מוסיפה 5 מיליליטר נוסף של חיץ FACS הטרי, עד שהנוזל לא כתם אדום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה פתרון מח העצם ב XG 200 במשך 5 דקות ב 4 ° C כדי להניב תא גלולה. </li></ol> 4. הפרדת צבע של תאי מח העצם <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב supernatant וגלול ב 10 מיליליטר של חיץ FACS (שמרו על RT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח את צינור חרוטי 50 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של תקשורת זמינה מסחרי הפרדת תא שיפוע צפיפות (RT). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שכבת פתרון מח עצם על תקשורת הפרדת תא שיפוע צפיפות. לעשות זאת באמצעות פיפטה חשמלית לאט. זווית קצה פיפטה כנגד המשטח הפנימי בחלקו העליון של צינור חרוטי ולהטות את צינור חרוטי לכ -30 מעלות. שימוש בהגדרת מהירות איטית בפיפטה, בעדינות לגרש את פתרון מח עצם כדי שלא להפריע לתקשורת הפרדת תא שיפוע צפיפות. הערה: בסופו של יהיולהיות הגדרה ברורה בין שני הפתרונות (פתרון סלולארי ופתרון תקשורת הפרדת תא שיפוע צפיפות). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות צנטריפוגות RT, צנטריפוגות תקשורת הפרדת תא שיפוע צפיפות ופתרון תא בצנטריפוגה מאוזנת ב XG 200 במשך 15 דקות. בנוסף, להסיר את האצה ההאטה בצנטריפוגות כדי להבטיח הפרדה פאזות נאותה באמצעות שיפוע תקשורת הפרדת תא שיפוע צפיפות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר צנטריפוגה, לשאוב את השכבה האמצעית מעונן המכילה את תאי מח עצם של עניין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את התאים האלה לתוך צינור חרוטי חדש. להוסיף 20 מיליליטר של חיץ נוסף FACS (שמר על קרח) כדי לשטוף את התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צנטריפוגה ב XG 200 במשך 5 דקות ב 4 ° C כדי להניב תא גלולה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend גלולה תא הסופי ב1ml של מקרופאג גירוי תקשורת, כדי לאפשר ספירת תאים באמצעות hemocytometer. </li></ol> ספירת 5. תא <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח 10 μl של פתרון התא ומערבביםעם 10 μl של trypan כחול. טען 10 μl של תמהיל התוצאה על hemocytometer ולהשיג את ספירת תאים לכל מיליליטר של תמיסה. </li></ol> Culturing 6. הנייד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום 2 מיליליטר של תקשורת מקרופאג גירוי לבאר כל צלחת 24 גם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 200,000 תאים היטב כל אחד. הערה: מניסיוננו, צפיפות תאי ציפוי היא אחת הדרישות החשובות ביותר עבור נאות בתרבית במבחנה של osteoclasts. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להתסיס את הצלחת ומניחים בחממה רגילה על 37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לא לשנות את התקשורת במשך 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי 3 ימים בתקשורת מקרופאג גירוי, לשנות את התקשורת לתקשורת האוסטאוקלסטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכאן והלאה, לשנות את התקשורת מדי יום במשך 5-7 ימים, ובשלב זה, osteoclasts הגדול, multinucleated צריך להיות גלוי על צלחת התרבות. </li></ol> 7. צביעה עם Tartrate עמיד החומצה phosphatase (TRAP) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 5-7 ימים של במבחנה רחוב ללא מוצאמכשור, לשאוב את התקשורת מהתרבות היטב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הבארות בעדינות עם פעמים PBS שלוש 1x. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את התאים על ידי הוספת 4% פתרון paraformaldehyde ולהשאיר למשך שעה 1 על 4 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך תקופה זו, להכין את כתם המלכודת (שהוא זמין באופן מסחרי) על ידי התחממות מראש ל -37 מעלות צלזיוס. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שעה 1 בparaformaldehyde, לשאוב את paraformaldehyde ולשטוף בעדינות 3 פעמים עם 1X PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 1 מיליליטר של כתם מלכודת מראש חימם לבאר כל הצלחת להיות מוכתם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הצלחת באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס במשך שעה 1, מוגן מפני אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחרי שעה 1, לשאוב את כתם TRAP. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הבארות 3 פעמים עם מים ללא יונים מחוממים מראש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Counterstain היטב עם Hematoxylin של גיל (זהירות) ל1-2 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> osteoclasts תמונה באמצעות מיקרוסקופ שדה הבהיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף בארות עם מים ללא יונים עד עוצמת צבע מספקת של הכתם מושגת, בדרך כלל, כאשר גרעינים מופיעים Bluדואר. </li></ol> 8. האוסטאוקלסטים הספיגה Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בצלחת תרבות קלקר 24 גם זמינה מסחרי שהיא מראש מצופה גם עם מצע עצם או ציפוי גבישי סידן זרחה אי-אורגני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקום 2 מיליליטר של תקשורת מקרופאג גירוי לכל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף 200,000 תאי מח עצם מבודדים טרי שהושגו בסופו של שלב 2 זה טוב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעדינות להתסיס את הצלחת לפני הצבתו באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס במשך 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום 3, לשנות את התקשורת לתקשורת בידול האוסטאוקלסטים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע שינויי תקשורת יומיומיים עם תקשורת בידול האוסטאוקלסטים 5-7 ימים. </li></ol> 9. כימות האוסטאוקלסטים ספיגת הפעילות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 5-7 ימים של תרבות במבחנה בתקשורת בידול האוסטאוקלסטים על מצע mineralized, לנתח את פני השטח mineralized, כפי שיתואר להלן, על מנת להעריך את יכולתו של osteoclasts כדי ליצור resorptiעל בורות, אינדיקציה לפעילות osteoclastic. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקשורת לשאוב מצלחת assay הספיגה ולהוסיף 10% פתרון אקונומיקה 100 μl היטב כל אחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה התאים עם פתרון אקונומיקה 10% במשך 15 דקות ב RT. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף את הבארות 3 פעמים במים מזוקקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את כל מים שנותרו ולהתנער ממים עודפים מהצלחת ולאפשר לאוויר יבש במשך 3-5 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Counterstain הצלחת עם ערכת צביעת פון Kossa זמינה מסחרי כדי לאפשר להדמיה קלה יותר של המצע-resorbed האו&quot;ם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש במיקרוסקופ שדה הבהיר לקחת תמונות של חלקי נציג של פני השטח resorbed. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שימוש בתוכנת ניתוח תמונה, לחשב את אחוז שטח resorbed כדי לאפשר כימות של פעילות resorptive osteoclastic. </li></ol>

<ol><li>Sims, N. A., Martin, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+the+activities+of+bone+formation+and+resorption%3A+a+multitude+of+signals+within+the+basic+multicellular+unit%5BTitle%5D)+AND+%22BoneKEy+reports%22%5BJournal%5D)">Coupling the activities of bone formation and resorption: a multitude of signals within the basic multicellular unit.</a> BoneKEy reports. 3, 481 (2014).</li>
<li>Kahn, A. J., Simmons, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+cell+lineage+in+bone+using+a+chimaera+of+chick+and+quial+embryonic+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Investigation of cell lineage in bone using a chimaera of chick and quial embryonic tissue.</a> Nature. 258, 325-327 (1975).</li>
<li>Walker, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+resorption+restored+in+osteopetrotic+mice+by+transplants+of+normal+bone+marrow+and+spleen+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Bone resorption restored in osteopetrotic mice by transplants of normal bone marrow and spleen cells.</a> Science. 190, 784-785 (1975).</li>
<li>Burger, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+formation+of+osteoclasts+from+long-term+cultures+of+bone+marrow+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+experimental+medicine%22%5BJournal%5D)">In vitro formation of osteoclasts from long-term cultures of bone marrow mononuclear phagocytes.</a> The Journal of experimental medicine. 156, 1604-1614 (1982).</li>
<li>Underwood, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+where+comes+the+osteoclast%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">From where comes the osteoclast.</a> The Journal of pathology. 144, 225-226 (1984).</li>
<li>Lacey, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bench+to+bedside%3A+elucidation+of+the+OPG-RANK-RANKL+pathway+and+the+development+of+denosumab%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Drug+discovery%22%5BJournal%5D)">Bench to bedside: elucidation of the OPG-RANK-RANKL pathway and the development of denosumab.</a> Nature reviews. Drug discovery. 11, 401-419 (2012).</li>
<li>Brown, J. E., Coleman, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Denosumab+in+patients+with+cancer-a+surgical+strike+against+the+osteoclast%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Clinical+oncology%22%5BJournal%5D)">Denosumab in patients with cancer-a surgical strike against the osteoclast.</a> Nature reviews. Clinical oncology. 9, 110-118 (2012).</li>
<li>Khosla, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minireview%3A+the+OPG%2FRANKL%2FRANK+system%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Minireview: the OPG/RANKL/RANK system.</a> Endocrinology. 142, 5050-5055 (2001).</li>
<li>Boyle, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+MAPK+kinases+MKK3+and+MKK6+in+osteoclastogenesis+and+bone+loss%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Differential roles of MAPK kinases MKK3 and MKK6 in osteoclastogenesis and bone loss.</a> PloS one. 9, (2014).</li>
<li>Hofbauer, L. C., Heufelder, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+receptor+activator+of+nuclear+factor-kappaB+ligand+and+osteoprotegerin+in+bone+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+molecular+medicine+%28Berlin%2C+Germany%29%22%5BJournal%5D)">Role of receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand and osteoprotegerin in bone cell biology.</a> Journal of molecular medicine (Berlin, Germany). 79, 243-253 (2001).</li>
<li>Teramachi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+IL-6+Expression+in+Osteoclasts+is+Necessary+but+not+Sufficient+for+the+Development+of+Paget%27s+Disease+of+Bone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bone+and+mineral+research+%3A+the+official+journal+of+the+American+Society+for+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Increased IL-6 Expression in Osteoclasts is Necessary but not Sufficient for the Development of Paget's Disease of Bone.</a> Journal of bone and mineral research : the official journal of the American Society for Bone and Mineral Research. , (2013).</li>
<li>Catalfamo, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+induced+and+intrinsic+alterations+in+type+2+diabetes-derived+osteoclast+function%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+diseases%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia induced and intrinsic alterations in type 2 diabetes-derived osteoclast function.</a> Oral diseases. 19, 303-312 (2013).</li>
<li>Schueler, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratibial+injection+of+human+multiple+myeloma+cells+in+NOD%2FSCID+IL-2Rgamma%28null%29+mice+mimics+human+myeloma+and+serves+as+a+valuable+tool+for+the+development+of+anticancer+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Intratibial injection of human multiple myeloma cells in NOD/SCID IL-2Rgamma(null) mice mimics human myeloma and serves as a valuable tool for the development of anticancer strategies.</a> PloS one. 8, (2013).</li>
<li>Xing, L., Boyce, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RANKL-Based+Osteoclastogenic+Assays+from+Murine+Bone+Marrow+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+molecular+biology+%28Clifton%2C+N.J%29%22%5BJournal%5D)">RANKL-Based Osteoclastogenic Assays from Murine Bone Marrow Cells.</a> Methods in molecular biology (Clifton, N.J). 1130, 307-313 (2014).</li>
<li>Weischenfeldt, J., Porse, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+Marrow-Derived+Macrophages+%28BMM%29%3A+Isolation+and+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+protocols%22%5BJournal%5D)">Bone Marrow-Derived Macrophages (BMM): Isolation and Applications.</a> CSH protocols. , (2008).</li>
<li>Yamamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblasts+provide+a+suitable+microenvironment+for+the+action+of+receptor+activator+of+nuclear+factor-kappaB+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Osteoblasts provide a suitable microenvironment for the action of receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand.</a> Endocrinology. 147, 3366-3374 (2006).</li>
<li>Yasuda, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast+differentiation+factor+is+a+ligand+for+osteoprotegerin%2Fosteoclastogenesis-inhibitory+factor+and+is+identical+to+TRANCE%2FRANKL%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Osteoclast differentiation factor is a ligand for osteoprotegerin/osteoclastogenesis-inhibitory factor and is identical to TRANCE/RANKL.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95, 3597-3602 (1998).</li>
<li>Lacey, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoprotegerin+ligand+is+a+cytokine+that+regulates+osteoclast+differentiation+and+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Osteoprotegerin ligand is a cytokine that regulates osteoclast differentiation and activation.</a> Cell. 93, 165-176 (1998).</li>
<li>Teitelbaum, S. L., Ross, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+regulation+of+osteoclast+development+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic regulation of osteoclast development and function.</a> Nature reviews. Genetics. 4, 638-649 (2003).</li>
<li>Agas, D., Sabbieti, M. G., Marchetti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+disruptors+and+bone+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+toxicology%22%5BJournal%5D)">Endocrine disruptors and bone metabolism.</a> Archives of toxicology. 87, 735-751 (2013).</li>
<li>Manolagas, S. C., O'Brien, C. A., Almeida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+estrogen+and+androgen+receptors+in+bone+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The role of estrogen and androgen receptors in bone health and disease.</a> Nature Reviews Endocrinology. 9, 699-712 (2013).</li>
<li>Martin, T. J., Udagawa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormonal+regulation+of+osteoclast+function%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+endocrinology+and+metabolism%22%5BJournal%5D)">Hormonal regulation of osteoclast function.</a> Trends in endocrinology and metabolism. 9, 6-12 (1998).</li>
<li>Nakamura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+prevents+bone+loss+via+estrogen+receptor+alpha+and+induction+of+Fas+ligand+in+osteoclasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Estrogen prevents bone loss via estrogen receptor alpha and induction of Fas ligand in osteoclasts.</a> Cell. 130, 811-823 (2007).</li>
<li>Bellido, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+interleukin-6%2C+osteoclastogenesis%2C+and+bone+mass+by+androgens.+The+role+of+the+androgen+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+clinical+investigation%22%5BJournal%5D)">Regulation of interleukin-6, osteoclastogenesis, and bone mass by androgens. The role of the androgen receptor.</a> The Journal of clinical investigation. 95, 2886-2895 (1995).</li>
<li>Roato, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+among+cells+of+bone%2C+immune+system%2C+and+solid+tumors+leads+to+bone+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica.%2C+%26+developmental+immunology%22%5BJournal%5D)">Interaction among cells of bone, immune system, and solid tumors leads to bone metastases.</a> Clinica., & developmental immunology. 2013, (2013).</li>
<li>Autio, K. A., Morris, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+bone+physiology+for+the+treatment+of+metastatic+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+advances+in+hematolog.%2C+%26+oncology%22%5BJournal%5D)">Targeting bone physiology for the treatment of metastatic prostate cancer.</a> Clinical advances in hematolog., & oncology. 11, 134-143 (2013).</li>
<li>Sottnik, J. L., Keller, E. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+and+targeting+osteoclastic+activity+in+prostate+cancer+bone+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Current+molecular+medicine%22%5BJournal%5D)">Understanding and targeting osteoclastic activity in prostate cancer bone metastases.</a> Current molecular medicine. 13, 626-639 (2013).</li>
</ol>

אף אחד מהמחברים יש גילוי או ניגוד העניינים להכריז.

יכולת לבודד בקלות ולטפח מספר גדול של osteoclasts במבחנה הייתה אחראית על סיוע לקידום הבנה של ביולוגיה עצם ומחלות תיווך האוסטאוקלסטים. זה היה זיהוי של RANKL שיובילו לכך, בעת שזוהה לאחרונה כרגולטור העיקרי של היווצרות האוסטאוקלסטים, בידול והישרדות 16-18. זה היה הניסיון שלנו כי הטיפוח במבחנה של osteoclasts ממח עצם תלוי במידה רבה בצפיפות זריעה. הבחנו כי כישלון של פרוטוקול זה כדי להניב osteo...

שיפוץ עצם הוא דינמי וכרוך בצימוד של יצירת עצם עם ספיגת עצם 1. תהליך חוזקה מוסדר זו הוא אחראי לשמירה על השלד במהלך הומאוסטזיס נורמלי, ובתגובה לפציעה ומחלה. Osteoclasts הם תאים ייחודיים, multinucleated המסוגלים resorbing שתי מטריצות אורגניות ואי-אורגניות של עצם. Osteoclasts נגזרים משושלת מונוציטים / מקרופאג של מח עצם 2-5. ליקויים בתפקוד או ההיווצרות של osteoclasts יכולים לגרום למגוון רחב של פתולוגיות קליניות, כוללים מצבים שכיחים כמו אוסטאופורוזיס. היכולת ליצור osteoclasts במבחנה אפשרה להתקדמות משמעותית בהבנה של ביולוגיה עצם 6. כתוצאה מכך, סוכנים טיפוליים חדשים צצים לטיפול במחלות הקשורות להאוסטאוקלסטים אשר אחראים על תחלואות ותמותה משמעותיות של 7 </sעד&gt;. תחזוקת homeostatic של מסת עצם וכוח דורשת פעולה מתואמת של osteoblasts יוצרי העצם וosteoclasts resorbing עצם 8,9. הומאוסטזיס העצם משתנה במספר המחלות, כוללים אוסטאופורוזיס לאחר גיל מעבר, שבו פעילות מוגברת האוסטאוקלסטים מובילה לאובדן פתוגניים של מסת עצם וצפיפות 10. עם עלייה בזמינות של דגמים עכבריים מהונדסים של מחלות בבני אדם, יש יותר הזדמנות לפענח את התפקיד של osteoclasts במחלת עצם אנושי 11-13. פרוטוקולים רבים לטכניקות culturing האוסטאוקלסטים מופיעים בספרות, בוריאציות רבות תיארו 9,12,14. Xing ועמיתיו מתארים שיטה דומה לפרוטוקול מתואר להלן, בתיאורם של מבחני osteoclastogenic מתאי מח עצם עכבריים. עם זאת כדי לשחרר את תאי מח העצם הבאים קציר עצם ארוך, Xing לשטוף et al. העצם חלול בתקשורת מלאה α ממ14. Catalfamo בוחן את ההשפעה של היפרגליקמיה על תפקוד האוסטאוקלסטים ומתאר שיטה שבה כל התאים מגויסים על ידי שטיפת מוח עצם בתרבית למשך 24 שעות, ובנקודה שאינם חסיד התאים מבוטלים 12, טכניקה המשמשת גם על ידי בויל אח &#39; . 9 פרוטוקולים שפורסמו בעבר אלה מחייבים את הנוהג של שטיפת מוח העצם, תרגול מייגע, שגם מציג את הסיכון לפגיעת מחט מקל ואובדן מח עצם יקר, כאחד חייב לחתוך את שני הקצוות של העצם. הפרוטוקול, שאנו מתארים, מיישם את השימוש במכתש ועלי כדי לבודד osteoclasts, שהוא דומה לשיטה של בידוד מקרופאג שתואר על ידי et Weischenfeldt אל. 15 הניסיון שלנו, לעומת זאת, הוא שבידוד האוסטאוקלסטים ובתרבות חוץ גופית באמצעות תוצאות טכניקות שפורסמו בעבר בתוצאות משתנים במונחים של ייצור האוסטאוקלסטים, ופעמים רבות תוצאהבחוסר יכולת לטפח osteoclasts. לכן, אנו פיתחנו פרוטוקול המאפשר לבידוד העקבי של מח עצם עכבר כדי לייצר מספר גדול של osteoclasts multinucleated במבחנה, עם תשואה של כ 70-80% מתאים בתחילה מצופים יוצר מקרופאגים ולאחר מכן osteoclasts, בנוכחות תקשורת אינדוקציה האוסטאוקלסטים.

<table><tbody><tr><td>MEM, ללא גלוטמין, ללא פנול אדום</td><td>Gibco</td><td>51200-038</td><td></td></tr><tr><td>M-CSF, עכבר רקומביננטי</td><td>Gibco</td><td>PMC2044</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Mouse TRANCE/RANK L/TNFSF11 (E. coli מבוטא)</td> <td>R& D Systems</td><td>462-TEC-010</td><td></td></tr><tr><td>Prostaglandin E2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Histopaque-1077</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10771</td><td></td></tr><tr><td>חומצה פוספטאז, ערכת לקוציטים (TRAP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>387A</td><td></td></tr><tr><td>Osteoassay לוחות ספיגת עצם, 24 צלחות באר</td><td>Corning Life Sciences</td><td>3987</td><td></td></tr></tbody></table>

גזירה האוסטאוקלסטים מעכבר מח עצם

Osteoclast Derivation from Mouse Bone Marrow

<html> Osteoclasts הם תאים מאוד מיוחדים שנובעים משושלת מונוציטים / מקרופאג של מח העצם. היכולת הייחודית שלהם לנספגות שוב שני מטריצות אורגניות ואי-אורגניות של עצם משמעות הדבר היא כי הם משחקים תפקיד מפתח בויסות שיפוץ שלד. יחד, osteoblasts וosteoclasts אחראים לתהליך הצימוד הדינמי שכולל גם ספיגת עצם ויצירת עצם פועלת יחד כדי לשמור על השלד הנורמלי במהלך מחלה ובריאות. כתא resorbing-העצם העיקרי בגוף, שינויים בבידול האוסטאוקלסטים או פונקציה יכולים לגרום להשפעה עמוקה בגוף. מחלות הקשורות לתפקוד האוסטאוקלסטים שינה יכולים טווח חומרת מחלה בילוד קטלנית עקב אי ליצור חלל מוח לhematopoiesis, לנצפתה יותר בכינוי פתולוגיות כגון אוסטאופורוזיס, שבו ספיגת עצם osteoclastic מוגזמת לתשומה כדי לשבר היווצרות. אף אוזן גרון &quot;&gt; יכולת לבודד osteoclasts במספרים גבוהים במבחנה אפשרה להתקדמות משמעותית בהבנה של מחזור שיפוץ עצם וסללה את הדרך לגילוי של אסטרטגיות טיפוליות חדשניות שמאבק במחלות אלו. כאן, אנו מתארים פרוטוקול לבודד ולטפח osteoclasts ממח העצם של עכבר שיניב מספר גדול של osteoclasts.

מטרתה של שיטה זו הייתה לבודד בקלות מספר רב של osteoclasts במבחנה, בדרך כלל בשבוע אחד. בידוד מוצלח של מספר רב של osteoclasts אושר באמצעות מכתים tartrate עמיד phosphatase החומצה (איור 1 א). osteoclasts גדול הם דמיינו כתאים סגולים גדולים עם גרעינים רבים (בדרך כלל ≥ 3 גרעינים). שימוש בפרוטוקול זה, זה נפוץ לבודד osteoclasts עם כ -30 גרעינים להאוסטאוקלסטים (איור 1). שימוש במשט...

Osteoclasts הוא תא resorbing-עצם העיקרי בגוף. יכולת לבודד osteoclasts במספרים גדולים הביאה התקדמות משמעותית בהבנה של ביולוגיה האוסטאוקלסטים. בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה לבידוד, טיפוח וכימות פעילות האוסטאוקלסטים במבחנה.

Osteoclasts are highly specialized cells that are derived from the monocyte/macrophage lineage of the bone marrow. Their unique ability to resorb both the ...

המטרה הכוללת של הליך זה היא לבודד אוסטאוקלסטים ממח עצם עכבר במספרים גדולים. זה מושג על ידי קצירת עצמות מעכברים שעברו המתת חסד. לאחר מכן, התאים משוחררים ממח העצם על ידי שימוש במכתש ועלי כדי לרסק את העצמות במאגר עובדות.לאחר מכן תמיסת מח העצם מונחת על מדיום הפרדת התאים של שיפוע הצפיפות ומתבצעת הפרדת תאים בשיפוע הצפיפות. לבסוף, השכבה המכילה את התאים המעניינים נשאבת והתאים ממוקמים במדיום אינדוקציה של מיקרופאג' מח עצם. בסופו של דבר, מכתים מלכודות משמשים כדי להראות את נוכחותם של מספר רב של אוסטאוקלסטים.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על מחלות הקשורות לשינוי בתפקוד האוסטיאוקלסט, שיכולות לנוע בחומרתן ממחלת יילודים קטלנית עקב כישלון ביצירת מרחב מח להמטופואיזיס ועד להיתקל בשכיחות גבוהה יותר בפתולוגיות כגון אוסטאופורוזיס מכיוון שהיא מייצרת שיטה אמינה לבידוד מספר רב של אוסטאוקלסטים ממח עצם העכבר. כדי להתחיל, הביאו 10 מיליליטר של הפרדת תאים בצפיפות זמינה מסחרית, בינונית עד טמפרטורת החדר בצינור חרוטי של 50 מיליליטר. הנח מאגר פקס של 50 מיליליטר בטמפרטורת החדר לשימוש עם מדיום הפרדת התאים של שיפוע הצפיפות.לאחר הכנת מדיה נוספת והמתת חסד של עכבר C 57 Black Six, על פי פרוטוקול הטקסט, מקם את העכבר על לוח חיתוך והשתמש באתנול 70%. כדי לרסס אותו, קצרו את העין ועמוד השדרה. לאחר מכן הנח את העצמות בעובדות חוצץ על קרח.לאחר מכן, בעזרת נייר טישו נקי, הסר את השריר והרקמות הרכות מהעצמות. מניחים את העצמות במכתש ועלי עם שלושה מיליליטר של עובדות חוצץ ומועכים אותן בעדינות. לאחר מכן שאפו את הנוזל המוכתם בדם והעבירו אותו דרך מסננת של 70 מיקרומטר לתוך צינור חרוטי של 50 מיליליטר.הוסף חמישה מיליליטר נוספים של חיץ אפקטים לעצם המרוסקת ומועך עוד יותר לפני העברת הנוזל דרך המסננת לצינור של 50 מיליליטר. המשיכו בתהליך זה עד שהנוזל כבר לא מכתים באדום לפני כדור מח העצם ב-200 גרם למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. כדי לבצע הפרדת שיפוע, שאפו את הסופרנטנטים מכדורית התא והשתמשו ב-10 מיליליטר של מאגר פקס כדי להחיות אותם.תלו את הגלולה, הטו את הצינור החרוטי של מדיום הפרדת התאים בצפיפות טמפרטורת החדר לכ-30 מעלות, והשתמשו בפיפטה חשמלית עם קצה הפיפטה כנגד המשטח העליון הפנימי של הצינור. שכבו לאט את תמיסת מח העצם על המדיום באמצעות צנטריפוגה בטמפרטורת החדר ללא האצה או האטה. סובב את השיפוע ב -200 גרם למשך 15 דקות.לאחר מכן שאפו את השכבה האמצעית העכורה, המכילה את התאים המעניינים והעבירו אותם לצינור חרוטי חדש. הוסף 20 מיליליטר של מאגר פקס קר כקרח כדי לשטוף את התאים. לאחר מכן השתמש במיליליטר אחד של מדיום מגרה מיקרופאג' מח עצם כדי להשעות מחדש את כדור התא הסופי לאחר ספירת התאים.הניחו שני מיליליטר של מדיום מגרה מיקרופאג' בכל באר של צלחת 24 בארות. לאחר מכן הוסף 200,000 תאים לכל באר, צפיפות תאים שתבטיח תרבית אוסטאוקלסט מספקת במבחנה. מערבבים בעדינות את הצלחת ומדגרים בחום של 37 מעלות צלזיוס מבלי להחליף את המדיום למשך שלושה ימים.לאחר היום השלישי, החלף את המדיום למדיום אינדוקציה אוסטאוקלסט מח עצם והתחל להחליף אותו מדי יום למשך חמישה עד שבעה ימים. בנקודה זו אמורים להיות גלויים אוסטאוקלסטים מרובי גרעינים גדולים. עיין בפרוטוקול הטקסט לצביעה ולבדיקת הספיגה כפי שניתן לראות כאן.ניתן לאשר מספר גבוה של אוסטאוקלסטים באמצעות מבחן עמיד לטטרט. אוסטאוקלסטים מצביעים פוספוטטים מוצגים כתאים סגולים גדולים עם גרעינים מרובים באמצעות הפרוטוקול המודגם בסרטון זה. מקובל לבודד אוסטאוקלסטים עם עד 30 גרעינים לתא.שימוש במשטח מינרלי נחשב לשיטת תקן הזהב להערכת פעילות ספיגה של אוסטאוקלסטים במבחנה. באיור זה, מיקרוסקופ שדה בהיר בהגדלה של פי 10 מדגים אחוז של משטח מינרלי או בורות ספיגה הנוצרים כמתואר בשחור, מה שמאפשר קביעת יכולת הספיגה של אוסטאוקלסטים. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לבודד באופן אמין מספר רב של אוסטאוקלסטים ממח עצם העכבר.

osteoclast-derivation-from-mouse-bone-marrow

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

בסרטון זה אנו מדגימים את הבידוד והתרבית של תאי סטרומה ממח עצם מהעצמות הארוכות של עכברים. ניתן להשתמש ב- BMSCs הדבקים המבודדים לניתוח נוסף.

בידוד ותרבית של תאי סטרומה ממח עצם משוקה עכברית

איתות חריץ הוא צורה של תקשורת סלולרית המסתמכת על מגע ישיר בין תאים. כדי לגרום כראוי לאיתות Notch במבחנה, יש להציג ליגנדים של Notch לתאים במצב משותק. פרוטוקול זה מתאר שיטות לגירוי חוץ גופי של איתות Notch במבשרי אוסטאוקלסטים של עכברים.

גירוי של מערכת איתות Notch עכבר osteoclast המבשר

פרוטוקול זה מתאר את התפתחות במבחנה האנושי פרה מודל של osteoclastogenesis של דם היקפיים ומונוציטים תרבותי עם שורות תאים של סרטן השד כדי לחקות את האינטראקציה תא-אוסטאוקלסט סרטן. המודל יכול לשמש כדי לקדם את ההבנה שלנו של עצם היווצרות גרורות ולשפר את אפשרויות טיפוליות.

התפתחות מודל פרה האנושית של Osteoclastogenesis של דם היקפיים ומונוציטים תרבותי משותף עם שורות תאים של סרטן השד

כתב יד זה מתאר פרוטוקול כדי לנתק את ותרבות osteoclasts במבחנה ממח העצם העכבר, וכדי ללמוד את התפקיד של מטרת מידע יונקים/מכניסטית rapamycin 1 מורכבים במבנה אוסטאוקלסט.

מבוסס רנקל אוסטאוקלסט תרבות וזמינותו של העכבר מח העצם כדי לחקור את התפקיד של mTORC1 במבנה אוסטאוקלסט

במאמר זה, נציג שיטות כדי לבודד, להבדיל תאי סטרומה מח עצם של תאי גזע hematopoietic עצמות ארוכות העכבר. שני פרוטוקולים שונים מוצגים מניב אוכלוסיות תאים שונים עבור הרחבת ובידול לתוך תאי העצם, adipocytes ו osteoclasts.

בידוד, תרבות, התמיינות של תאי סטרומה מח עצם ו אוסטאוקלסט אבות של עכברים

המספר של הרומן biomaterials מתוכנן עבור תיקון גדול עצמות נגעים מתרחבת באופן רציף, במטרה לשפר את עצם ריפוי ולהתגבר על הסיבוכים עם השתלת עצם. כאן, אנו מציגים אסטרטגיה רב תחומיים לניסויים קליניים הביו של biomaterials לתיקון העצם.

פרופיל תאימות ביולוגית על Biomaterials עבור התחדשות העצם

אוסטאופנוקיים הם מקרופאג polykaryons רקמות שמקורם השושלת המונציט מקרופאג של תאי גזע המטפאות. פרוטוקול זה מתאר כיצד לבודד את התאים מח עצם כך כמויות גדולות של אוסטאוקלמות מתקבלים תוך צמצום הסיכון של תאונות שנמצאו בשיטות מסורתיות.

בידוד, טיהור, והבידול של אוסטאוקלסט מקדים של מח עצם חולדה

אוסטאוקלסטים הם תאי מפתח סופחי עצם בגוף. פרוטוקול זה מתאר שיטה אמינה להבחנה חוץ גופית של אוסטאוקלסטים ממונוציטים של דם היקפי אנושי. שיטה זו יכולה לשמש ככלי חשוב להבנה נוספת של הביולוגיה של אוסטאוקלסטים בהומאוסטזיס ובמחלות.

הבחנה של אוסטאוקלסטים פונקציונליים ממונוציטים של דם היקפי אנושי CD14+

פרוטוקול זה מציג את ההתמיינות של אוסטאוקלסטים אנושיים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (iPSCs) ומתאר שיטות לאפיון אוסטאוקלסטים ומבשרי אוסטאוקלסט.

התמיינות ואפיון אוסטאוקלסטים מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה חסכונית לטיהור, הרחבה ואפיון תאי גזע מזנכימליים הומוגניים ביותר של מח עצם (BMSCs) מעכברים. גישה זו מאפשרת רכישה של כמויות גדולות של BMSCs עם פוטנציאל התפשטות והתמיינות גבוה, תמיכה במודלים של עכברים וקידום מחקר פרה-קליני.

טיהור, הרחבה ופנוטיפ מבוסס ציטומטריה של תאי גזע מזנכימליים במח עצם שמקורם בעכבר

מודל הפגיעה במח העצם של העכברים הוא כלי שימושי לחקר אוסטאוגנזה לאחר לידה באמצעות התעצמות פנימית. פרוטוקול כירורגי פשוט זה מתאר את הליך אבלציה של מח העצם להערכה במורד הזרם של היווצרות עצם חדשה ותגובות תאיות לאחר פציעה.

מתודולוגיה משופרת לחקר אוסטאוגנזה לאחר לידה באמצעות אוסיפיקציה אינטרמברנית במודל פגיעה במח עצם של עכברים

למדו לבודד אוסטאוקלסטים ממח עצם עכבר בכמויות גדולות באמצעות הפרדת צפיפות וגידול תאים. שיטה זו מאפשרת חקר ביולוגיית עצם ומחלות כגון אוסטאופורוזיס.

גזירה האוסטאוקלסטים מעכבר מח עצם

גלה סרטונים נוספים