Name: מניפולציה וניתוח של תהליכים תלויי מחזור התא בשמרים ניצנים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: חקור מניפולציה של מחזור התא בשמרים ניצנים באמצעות סנכרון alpha-factor ומיקרוסקופיית פלואורסצנציה. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר שינויים בלוקליזציית חלבונים במהלך מיטוזה וחלוקת כרומוזומים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>?-גורם</td><td>מתקן הסינתזה המרכזית של אוניברסיטת יוטה</td><td></td><td>רצף: WHWLQLKPGQPMY</td></tr><tr><td>צינורות אפנדורף 1.5 מ"ל</td><td>אקסיגן</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>תערובת dNTP של 10mM</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>R0193</td><td></td></tr><tr><td>צינורות קוניים של 50 מ"ל</td><td>גריינר ביו-וואן</td><td>227 261</td><td></td></tr><tr><td>5x בופר תגובת Phusion HF</td><td>מעבדות ביולוגיות של ניו אינגלנד</td><td>B0518S</td><td></td></tr><tr><td>חומצה אצטית, קרחונית</td><td>פישר כימיקל</td><td>BP2401C-212</td><td></td></tr><tr><td>מלח המיסולפט אדנין</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>A9126-100G</td><td></td></tr><tr><td>אגר, גרגר</td><td>כימיקלים ותגובות של אפקס</td><td>20-275</td><td></td></tr><tr><td>אגרוזה</td><td>אפקס ביוריסרץ' פרודקטס</td><td>20-102GP</td><td></td></tr><tr><td>אוטוקלב Amsco Century Steam Strailizer</td><td>סטריס</td><td>SV-1262</td><td></td></tr><tr><td>מי DI מאוטוקליבים</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>אוקסין</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>קטגוריה#I3750-5G-A; CAS: 87-51-4</td><td></td></tr><tr><td>נוזל לייזר קרגיל</td><td>מעבדות קרג'יל</td><td>20130</td><td></td></tr><tr><td>D-סורביטול</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>S1876-500G</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (40,6-דיאמידינו-2-פנילינדול, דיהידרוכלוריד)</td><td>גשושיות מולקולריות</td><td>Cat#D1306</td><td></td></tr><tr><td>מלח נתרן מחומצה דאוקסיריבונוקלאית מאשכי סלמון</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>D1626</td><td></td></tr><tr><td>דקסטרוז</td><td>פישר כימיקל</td><td>D16-10</td><td></td></tr><tr><td>די-סודיום אתילנדיאמין טטראצטט</td><td>פישר כימיקל</td><td>S811-10</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>20688</td><td></td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ2 לעומת 2.14.0/1.54f</td><td>ImageJ2</td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td><td></td></tr><tr><td>מערבל מערבולת במהירות קבועה</td><td>VWR</td><td>https://dabos.com/product/vortex-mixers-vwr-fixed-speed-vortex-mixer-00001-24763?srsltid=AfmBOoo5TH0aoExvrrrphDaFt8XAsDqLvkjxtEUj1QWlFbWh7_gwzMObLT4&gQT=2</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי DV Ultra</td><td>לייקה</td><td>https://www.leica-microsystems.com/c/am/lsr-w/fluorescence-microscope-wf/?nlc=20250214-SFDC-022570&utm_source=google&utm_medium=cpc&utm_campaign=25-AM-LSR-L3-LSPO-LSWF-SE-Google-Ads-WF-Thunder-Search&utm_content=text_ad&utm_term=fluorescence%20microscopes&gad_source=1&gad_campaignid=170130111&gbraid=0AAAAADrbsAF-dGDbxzgT8m_cvXSlf4BB0&gclid=CjwKCAjwmenCBhA4EiwAtVjzmkMJUGFksaHezZvlBUlbbS1tR8RqXP24dbSRzcRgTT8RmJy7nyeThBoC3yQQAvD_BwE</td><td>סריאל #: NV01063. לא נתמך עוד</td></tr><tr><td>פורמלדהיד</td><td>פישר כימיקל</td><td>Cat#F79-500</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר ג'ל</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>אול איזיקאסט B1</td><td></td></tr><tr><td>תערובת סולם DNA של GeneRuler</td><td>פרמנטאס</td><td>SM0333</td><td></td></tr><tr><td>חרוזי זכוכית</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>11312A</td><td></td></tr><tr><td>שקופיות זכוכית</td><td>VWR</td><td>48300-026</td><td></td></tr><tr><td>מנער פלטפורמה אינובה 2300</td><td>ניו ברונסוויק</td><td>NB-2300</td><td></td></tr><tr><td>קימווייפס</td><td>קימטק</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה מעבדה לצינורות 1.5 מ"ל</td><td>אפנדורף</td><td>2525</td><td></td></tr><tr><td>צנטריפוגה מעבדה לצינורות 50 מ"ל</td><td>אפנדורף</td><td>5804</td><td></td></tr><tr><td>ליתיום אצטט דיהידרט</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>L4158-250G</td><td></td></tr><tr><td>מאסטר סייקלר נקסוס X2</td><td>אפנדורף</td><td>https://www.eppendorf.com/us-en/Products/PCR/Thermocyclers/Mastercycler-nexus-X2-p-PF-82586</td><td></td></tr><tr><td>מיקרופיפטות p2, p20, p200 ו-p1000 והקצוות המתאימים</td><td>ריינין</td><td>L-2XLS+R, L-20XLS-R, L-200XLS-R, L-1000XLS-R</td><td></td></tr><tr><td>זכוכית כיסוי מיקרוסקופ</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12541014</td><td></td></tr><tr><td>נוקודאזול</td><td>קלביוכימיה</td><td>Cat#487928; CAS: 31430-18-9; מגרש#B35705</td><td></td></tr><tr><td>אורנג' G</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>O7252</td><td></td></tr><tr><td>יתד</td><td>המפטון ריסרץ'</td><td>HR2-591</td><td></td></tr><tr><td>פפטון גרעיני &nbsp;</td><td>ביוריאגנטים של פישר</td><td>BP9725-5</td><td></td></tr><tr><td>פולימראז DNA של פיוזיון HF</td><td>מעבדות ביולוגיות של ניו אינגלנד</td><td>M0530L</td><td></td></tr><tr><td>פיפט-X</td><td>ריינין</td><td>PX-100R</td><td></td></tr><tr><td>פוספט אשלגן, די-בסיסי</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>424195000</td><td></td></tr><tr><td>פוספט אשלגן, מונובסיסי</td><td>תרמו-סיינטיפיק</td><td>424200025</td><td></td></tr><tr><td>מקור כוח</td><td>ביו-ראד</td><td>23786</td><td></td></tr><tr><td>Start Acquire Ultra 1.2.2</td><td>softWoRx Cytiva</td><td>השגה עם DV Ultra</td><td></td></tr><tr><td>בסיס טריס</td><td>ביוריאגנטים של פישר</td><td>BP152-10</td><td></td></tr><tr><td>טריטון X-100</td><td>סיגמא-אלדריץ'</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>סיבוב צינורות</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>VWR</td><td>WBE10A11B</td><td></td></tr><tr><td>מים, אולטרה טהור</td><td>אפקס ביוריסרץ' פרודקטס</td><td>18-194</td><td></td></tr><tr><td>תמצית שמרים גרנולטיבית</td><td>ביוריאגנטים של פישר</td><td>BP9727-5</td><td></td></tr></tbody></table>

מניפולציה וניתוח של תהליכים תלויי מחזור התא בשמרים ניצנים

Manipulation and Analysis of Cell Cycle-Dependent Processes in Budding Yeast

Eukaryotic cells follow a conserved cell cycle that regulates diverse processes, including DNA maintenance and organelle homeostasis. Studying cellular ...

manipulation-analysis-cell-cycle-dependent-processes-budding

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

המחיקה ין overexpression חלבון שיטות משותף ללימוד פונקציות של חלבונים. במאמר זה, אנו מתארים פרוטוקול לניתוח התפתחות פנוטיפ כפונקציה של ריכוז החלבון על האוכלוסייה תא בודד...

ניתוח ופיתוח של הפנוטיפ מורפולוגי כפונקציה של ריכוז חלבון שמרים הנצה

קביעת המיקום של מחזור התא אוכלוסייה של תאים, או להבין כיצד להשפיע על התפשטות אותות, ניתן למדוד בקלות על ידי זרימת cytometry בפרוטוקול זה. אנו מדווחים על גישה ניסויית פשוטה מכתים תאים לכימות עמדתם מחזור התא.

ניתוח של עמדת מחזור התא בתאי יונקים

אנו מציגים פרוטוקול פשוט להשיג סרטי הקרינה מיקרוסקופיה של תאי שמרים גדלו, וחבילת תוכנה מבוססת GUI כדי לחלץ את נתוני זמן סדרת תא בודד. הניתוח כולל שושלת אוטומטית והקצאת זמן החלוקה משולבת עם בדיקה חזותית ואוצרות ידני של נתונים מסומנים.

רכישת זמן לשגות סרטים הקרינה של שמרים להנץ וניתוח Dynamics תא בודד באמצעות שתלי

שמרי הביקוע, שמר החלוקה היא מערכת מודל מצוינת ללמוד cytokinesis, השלב הסופי חלוקת תא. כאן אנו מתארים גישה מיקרוסקופ לנתח אירועים cytokinetic שונים בתאי שמרים ביקוע חי.

ניתוח Spatiotemporal של אירועים Cytokinetic שמרים ביקוע

ניצני שמרים הוא מודל יתרון לחקר הדינמיקה microtubule in vivo עקב גנטיקה חזקה שלה ואת הפשטות של שלד התא microtubule שלה. הפרוטוקול הבא מתאר כיצד להפוך ותאי שמרי התרבות, לרכוש תמונות מיקרוסקופיה confocal, וגם כמותית לנתח דינמיקת microtubule בתאים חיים שמרים.

הדמיה ברזולוציה גבוהה וניתוח של Dynamics microtubule אסטרל הבודד שמרים ניצנים

Visualizer Dynamics Inherent היא חבילת ויזואליזציה אינטראקטיבית המתחברת לכלי הסקת רשת רגולטורית גנטית ליצירה משופרת ויעילה של מודלי רשת פונקציונליים. visualizer יכול לשמש כדי לקבל החלטות מושכלות יותר עבור parameterizing כלי ההסקה, ובכך להגביר את האמון במודלים המתקבלים.

Visualizer דינמיקה אינהרנטית, יישום אינטראקטיבי להערכה והדמיה של יציאות מצינור הסקת רשת רגולטורית גנטית

מיקרוסקופיה בהילוך מהיר היא כלי רב ערך לחקר מיוזה בשמרים ניצנים. פרוטוקול זה מתאר שיטה המשלבת סנכרון מחזור התא, מיקרוסקופיה בהילוך מהיר ודלדול מותנה של חלבון מטרה כדי להדגים כיצד לחקור את תפקודו של חלבון מסוים במהלך הפרדת כרומוזומים מיוטיים.

שימוש במיקרוסקופיה של קיטועי זמן ודלדול גרעיני ספציפי לשלב של חלבונים כדי לחקור מיוזה ב- S. cerevisiae

אחד האתגרים בניתוח ניסויים מסונכרנים בסדרות זמן הוא שהניסויים נבדלים לעתים קרובות זה מזה במשך ההתאוששות מסנכרון ובתקופת מחזור התא. לפיכך, המדידות מניסויים שונים אינן ניתנות לניתוח מצטבר או להשוואה בקלות. במאמר זה אנו מתארים שיטה ליישור ניסויים כדי לאפשר השוואות ספציפיות לפאזה.

יישור נתוני סדרות זמן מסונכרנות באמצעות מודל אפיון אובדן מחזור התא לצורך השוואות בין ניסויים

במאמר זה אנו מציגים את פרוטוקול כללי למדידת חיים replicative טווח של תאים אמא שמרים.

מדידת תוחלת החיים בשמרים replicative הנצה

כמותי תא חי פלואורסצנטי, מיקרוסקופ ניתוח של שמרים ביקוע

חקור מניפולציה של מחזור התא בשמרים ניצנים באמצעות סנכרון alpha-factor ומיקרוסקופיית פלואורסצנציה. שיטה זו מאפשרת מעקב אחר שינויים בלוקליזציית חלבונים במהלך מיטוזה וחלוקת כרומוזומים.

מניפולציה וניתוח של תהליכים תלויי מחזור התא בשמרים ניצנים

גלה סרטונים נוספים