בידוד יעיל של תאי גזע ושומנים שמקורם בשומן מרקמת שומן חזיר
May 26th, 2026
כאן אנו מציגים שיטה סטנדרטית לבידוד יעיל של תאי גזע ומגדלי שומן שמקורם בשומן, המאופיינת בהפחתה של >90% בזמן העיבוד, חיוניות תאית גבוהה ותאימות רחבה.
מטרת המחקר הזה היא לבודד תאים מרקמת שומן ביעילות ובמהירות. עיכול מסורתי הוא עלות זמן ועלולה לעכל יתר על המידה. מדידת הגלים המכנית והאנזימטית שלנו מציעה פיזור עדין ומקצרת את זמן הבידוד.
כדי להתחיל, שים חתיכת רקמת שומן תת-עורית של חזיר שהושמד בצלחת תרבית. נתח לאורך המישור הטבעי בין רקמת השומן לדרמיס כדי לקבל שכבת ULB שלמה בעובי שניים עד שלושה מילימטרים. שטוף את ה-ULB פעם אחת במי מלח קר וסטרילי.
לאחר קריעת תבנית תרבית סטרילית, שקלו את הרקמה בצלחת הסטרילית על מאזן סטרילי מראש. על כל 1.8 גרם רקמה, הוסף 10 מיליליטר של בופר D-Hank קר, ושמור על הרקמה טבולה לחלוטין. השתמשו במספריים כירורגיים סטריליים לזיהוי וכריתת כל כלי הדם הנראים מהרקמה.
הסר כל רקמת חיבור ורכיבים פיברוטיים. השליכו את החומרים שנכרתו למיכלים מסוכנים לביולוגיה. שטוף את הרקמה בתוך הבופר של D-Hank כדי להסיר שאריות דם ופסולת.
שקלו את הרקמה בצלחת התרבית הסטרילית על מאזן סטרילי מראש לאחר קריעת המנה. העבר 1.8 גרם מחלקי הרקמה לצינור מיקרו צנטריפוגה סטרילי בנפח 1.5 מיליליטר. הוסיפו 800 מיקרוליטר של בופר פירוק רקמות מסוג A לצינור.
השתמשו במספריים עיניים סטריליים כדי לטחון את הרקמה בצינור לחתיכות בגודל של מילימטר עד שניים מעוקבים. העבר את רקמת הטחון יחד עם הבופר שמסביב לצינור מיקרוצנטריפוגה חדש. הוסף 200 מיקרוליטר של חומר ניתוק רקמות מסוג A לצינור.
סובבו בעדינות ונערו את הצינור ביד שלוש פעמים כדי לערבב את התכולה. ודאו שחלקי השומן טבולים לחלוטין בתמיסת הדיסוציאציה. בדוק אם פקק הצינור סגור היטב.
הניחו את הצינור באמבט מתכת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ודגרו במשך חמש עד עשר דקות. העבר את רקמת השומן המעכלת חלקית בבופר לצינור מיקרו צנטריפוגה סטרילי בנפח 1.5 מיליליטר המיועד למערכת הדיסוציאציה המכנית. הרץ את התוכנית המוקדמת לרקמת השומן לביצוע דיסוציאציה מכנית באמצעות גל סינוסואידלי של 200 הרץ.
אסוף את מתלי התא והעבר אותו דרך מסננת תאים של 200 מיקרומטר לצינור צנטריפוגה חדש בנפח 50 מיליליטר. הוסיפו חמישה מיליליטר של תמיסת D-Hank לפני קירור בארבע מעלות צלזיוס למסננת. שטוף את המסננת פעמיים עם תמיסת D-Hank.
צנטריפוגה את מתלה התא המסונן בטמפרטורה של 500 גרם למשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס. השתמשו בפיפטה סטרילית של פסטור כדי לשאוב ולהשליך את שכבת השומנים הסופרנטנטית, תוך השארת מיליליטר אחד של בופר להגנה על שכבת הדיפוציטים. אספו את השכבה השנייה המכילה את הדיפוציטים מבלי להפריע לשכבות השלישית והרביעית.
שאופים והשליכו את השכבה השלישית. הוסיפו מיליליטר אחד של בופר D.Hank לכדור התחתון המכיל את החלק הווסקולרי סטרומלי (SVF). החזירו את כדור התא בעדינות לבופר כדי להגיע לריכוז תא של שניים עד חמש פעמים 10 לכוח של שישה תאים למיליליטר.
הכינו את מתלה תא ה-SVF בצינור מיקרו צנטריפוגה בנפח 1.5 מיליליטר. תשאיר את המתלה על הקרח עד השימוש. הוסיפו 10 מיקרוליטרים של מתלה תא SVF ו-10 מיקרוליטרים של תמיסת 0.4% Trypan Blue בצינור מיקרו צנטריפוגה סטרילי בנפח 0.5 מיליטר.
בעדינות פיפט למעלה ולמטה שלוש פעמים. העבר 10 מיקרוליטרים מתערובת התאים המוצבעת לשקף ספירה, המתאימה למונה התאים האוטומטי. ודאו שהדגימה ממלאת את התא לחלוטין מבלי להציף.
הכנס את שקופית הספירה למונה התאים האוטומטי. בחר את סוג המבחן הכחול של Trypan והתאם את טווח הריכוז של התאים במידת הצורך. לחץ על ספירה כדי להתחיל ספירה אוטומטית של תאים.
עקבו אחרי תמונות תא הספירה וצפו בהבחנה האוטומטית בין תאים חיים לתאים מתים. רשמו את אחוז העמידות של התאים ואת מספר התאים הקיימים הכולל המוצגים על מסך המכשיר. בצע שלוש מדידות עצמאיות לכל דגימה.
חשב את החיוניות הממוצעת ואת תפוקת התאים לגרם רקמת שומן. הכינו תמיסת צביעה עם חמש מיקרוגרם למיליליטר הוקס ו-BODIPY מיקרומולרית אחת ב-D.Hank's. דגרו את הדיפוציטים המבודדים בתמיסת הצביעה למשך 15 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
השתמשו במערכת זכוכית כיסוי שקופית ידידותית לדיפוציטים לייצור עצמי להכנת שקופיות המתאימות למיקרוסקופיה פלואורסצנטית. מערכת ההרכבה הביתית הידידותית לשומנים אפשרה פיזור אחיד של שדיפוציטים שלמים להדמיה ברורה. בניגוד לשיטות מסורתיות שיצרו סידורים צפופים ורב-שכבתיים, השומניות שהופקו הציגו מבנה שלם ומורפולוגיה נורמלית.
קצב ההישרדות של שומניות שהושג בשיטת הדיסוציאציה המכנית היה גבוה משמעותית בהשוואה לשיטת הידרוליזה אנזימטית מסורתית. תאי הגזע המטוהרים והתורבתים שמקורם בשומן הציגו מורפולוגיה אחידה דמוית פיברובלסטים עם תאים מוארכים בצורת ציר המסודרים בצורה מסודרת. רוב התאים נותרו ללא צבע, מה שמעיד על כשירות, בעוד שרק אחוז קטן מהם נצבע בכחול, המייצגים תאים מתים.
פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים להשוות את תכונות התאים המבודדות ברחבי מחסן השומן. ה-SVFים המבודדים מהפרוטוקול יכולים לשמש לבניית אורגנידים ולטיהור תאי גזע שומני. מחקר עתידי עשוי לייעל עוד יותר את שיטת הבידוד, תוך התחשבות בשינויים ברקמת השומן במטריקס החוץ-תאי ברחבי המחסן.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Overview
This article presents a rapid and efficient protocol for isolating adipose-derived stem cells (ADSCs) from adipose tissue using a combination of enzymatic digestion and mechanical wave-based dissociation. The method, exemplified by the SoniConvert system, significantly reduces processing time, improves cell viability, and yields high-quality single-cell suspensions suitable for downstream applications in regenerative medicine and research.
Key Study Components
Area of Science
- Regenerative medicine
- Cell biology
- Stem cell isolation
Background
- ADSCs are valuable for tissue repair, disease modeling, and cell therapy due to their multipotency and immunomodulatory properties.
- Traditional isolation methods are time-consuming (1–3 hours), yield low cell viability (<70%), and suffer from batch variability.
- Efficient, reproducible isolation of high-viability ADSCs is critical for research and clinical translation.
- Mechanical wave-based dissociation offers a potential solution to these limitations.
Purpose of Study
- To develop and demonstrate a rapid, gentle, and reproducible protocol for isolating ADSCs from adipose tissue.
- To compare the new method's efficiency and cell viability with traditional enzymatic digestion protocols.
- To provide a platform compatible with various downstream applications, including organoid construction and cell culture.
Methods Used
- Harvesting and preparation of subcutaneous adipose tissue from euthanized pigs.
- Enzymatic digestion using a tissue-specific dissociation buffer and agent.
- Mechanical dissociation via a preset program using a 200 Hz sinusoidal wave (SoniConvert system).
- Filtration, centrifugation, and separation of stromal vascular fraction (SVF) and adipocytes.
- Cell viability assessment using trypan blue staining and automated cell counting.
- Fluorescence staining and microscopy to assess adipocyte morphology and integrity.
Main Results
- The core isolation process is completed in approximately 30 minutes, representing a >90% reduction in processing time compared to conventional methods.
- Cell viability of isolated ADSCs is 80–95%, significantly higher than traditional protocols.
- The method yields intact, morphologically normal adipocytes and uniform, viable ADSCs.
- Single-cell suspensions are suitable for primary culture, flow cytometry, cytotoxicity assays, and organoid construction.
Conclusions
- The combined enzymatic and mechanical wave-based protocol enables rapid, high-viability isolation of ADSCs.
- This approach reduces variability and preserves cell integrity, facilitating adipose tissue research and clinical applications.
- Future optimization may further improve isolation efficiency across different adipose depots.
Frequently Asked Questions
Chapters in this video
0:00
Introduction
0:27
Porcine Adipose Tissue Harvesting and Preparation
1:36
Dissociation of Adipose Tissue for Cell Isolation
3:08
Isolation of Adipocyte and Stromal Vascular Fractions (SVF)
4:21
Analysis of SVF Cell Suspension and Adipocyte Samples
6:16
Results
7:23
Conclusion
