שלב ניגודיות הפרעות דיפרנציאלי ניגודיות (DIC) מיקרוסקופית

מיקרוסקופ אור הוא אחד הכלים המאפשרים ביותר בתחום המחקר הביו-רפואי. בהתאם ליישום שלך, מצבי תאורה שונים רצויים לצפייה בדגימות. סרטון זה ידגים שני מצבים אופטיים של תאורת אור מועברת, ניגודיות פאזה ו-DIC או מיקרוסקופ ניגודיות הפרעות דיפרנציאליות.

שלום, אני ויקטוריה סן פרוליק ממתקן הליבה להדמיה אופטית במרכז מדעי הבריאות של אוניברסיטת טקסס בסן אנטוניו. היום אראה לך כיצד להציג כראוי דגימות באמצעות מיקרוסקופיה של ניגודיות פאזה והפרעות דיפרנציאליות. אז בואו נתחיל.

מיקרוסקופיה סטנדרטית של Brightfield אינה מתאימה לצפייה בדגימות שקופות וחסרות צבע. מיקרוסקופ ניגודיות פאזה משמש לעתים קרובות לייצור ניגודיות עבור דגימות ביולוגיות שקופות שאינן סופגות אור. הטכניקה התגלתה על ידי ציריך בשנת 1942 שקיבל פרס נובל על הישגו.

מיקרוסקופ ניגוד הפאזה הוא מיקרוסקופ אור שדה בהיר בתוספת מטרות ניגודיות פאזה מיוחדות, המכילות צלחת פאזה או טבעת, וטבעת מעבה במקום דיאפרגמה. הטבעת ממוקמת בדרך כלל בצריח המעבה ויש לבחור את גודל הטבעת למטרות שונות. לאחר הגדרת תאורת קוהלר, בחר את מטרת הפאזה המתאימה ולאחר מכן סובב את טבעת הפאזה המתאימה למקומה במעבה.

לאחר שטבעת שלב המטרה וטבעת המעבה יושרו כראוי כך שיהיו קונצנטריים וחופפים, נוכל להציג את הדגימה ולהתאים כראוי את המיקוד. אז בואו נדגים איך נראית ניגודיות פאזה דרך המיקרוסקופ. הנה מבט על פרוסת כבד של חולדה.

תחת ניגודיות פאזה. שיטה זו משפרת את מראה החומר הביולוגי על ידי שינוי הניגודיות מגוונים שונים של אפור לגוונים משחור ללבן. עם זאת, תבחין שהדגימות מוקפות בהילה, המסתירה מבנה עדין.

הילה זו היא חפץ של הארה על ידי טבעת הפאזה. עכשיו תבחין שכאשר נעבור לשדה בהיר, הדגימה הזו קשה מאוד לצפייה. אם נחזור לניגודיות פאזה, אנו יכולים לראות בבירור את המבנה והצורה של התאים ברקמת הכבד של החולדה מאז הצגתה בסוף שנות ה-60.

ניגודיות הפרעות דיפרנציאליות או מיקרוסקופיית DIC הייתה פופולרית במחקר ביו-רפואי מכיוון שהיא מייצרת תמונות ברזולוציה גבוהה של מבנים עדינים על ידי שיפור הממשקים המנוגדים, התמונה המופקת היא של חתך אופטי דק מאוד. למעשה, היכולת של DIC לייצר קטעים אופטיים הפכה אותו למצב שימושי של תאורת אור מועברת למיקרוסקופיה קונפוקלית של החברה. מיקרוסקופ DIC הוא מיקרוסקופ אור שדה בהיר בתוספת האלמנטים הבאים, מקטב בין מקור האור למעבה.

מנסרת פיצול קרן DIC בטארט המעבה, קרן DIC המשלבת פריזמה ממש בחלק האחורי של המטרה ומנתח במרחב האינסוף לפני שני המיזוגים. על מנת להשיג את הביצועים הטובים ביותר מאופטיקת DIC, חשוב ליישר תחילה את מיקרוסקופ האור לתאורת קוהלר ולאחר מכן למקם את רכיבי ה-DIC בנתיב האופטי. אור מהמקור עובר דרך מקטב ואז מתפצל על ידי המנסרה הראשונה.

אלומות זוגיות אלה נעות קרוב זו לזו. אם שניהם עברו דרך אותו חומר בדגימה, אז כשהם משולבים מחדש על ידי המנסרה השנייה, הם לא מפריעים זה לזה ולכן נראים אפורים. עם זאת, בקצה מבנה, קרן אחת של האגס עוברת דרך חומר שונה מבן זוגה ומשתנה.

כאשר אלומות אלה משולבות מחדש על ידי המנסרה השנייה, הן יפריעו ליצירת נקודה בהירה באופן קונסטרוקטיבי או ליצירת נקודה כהה באופן הרסני. הנה מבט על צורניות תחת ניגודיות DIC. תבחין שפרטים עדינים של מבנה הצורנית נראים בקלות.

עם זאת, אם האופטיקה של DIC מוסרת, פרטים אלה נעלמים. הניגודיות על פני הדגימה בהירה מצד אחד וכהה יותר מצד שני. זה נותן רושם של טופוגרפיה, אבל למעשה, זו אשליה.

ניתן להפוך את כיוון אפקט הטלת הצל על ידי סיבוב המקטב דרך נקודת הצלבה לניגודיות ההפוכה. זה עתה סקרנו את המצבים האופטיים של ניגודיות פאזה ו-DIC. רק כדי להזכיר לך, ביטול ניגודיות פאזה משפר את הדגימות המנוגדות משחורים ללבנים ושימושי לצפייה בדגימות חסרות צבע ושקופות כאחד.

DIC גם מייצר ניגודיות לדגימה. הוא עושה זאת על ידי יצירת תמונה ברזולוציה גבוהה של קטע אופטי דק. אז זהו.

תודה על הצפייה ובהצלחה עם המיקרוסקופיה שלך.