Name: שלב ניגודיות הפרעות דיפרנציאלי ניגודיות (DIC) מיקרוסקופית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: למדו את עקרונות המיקרוסקופיה של ניגודיות דיפרנציאלי ניגודיות (DIC) וניגודיות פאזה לצפייה בדגימות ביולוגיות שקופות. שיטות אלו משפרות משמעותית את הדימוי של מבנים תאיים ומאפשרות מחקר מתקדם במדעי החיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

קטעי וידאו מספר מפגינים בניגוד פאזה מיקרוסקופיה DIC נלקחו מהמאמר וידאו אחר, זכאי <a href="details.stp?ID=197">שכבות של סימביוזה</a> . יופיטר באדיבות מכירה זו תרומתן של המעבדה לידבטר.

פרוטוקול טקסט מלא לגישה זו ניסיוני זמין <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">הפרוטוקולים נוכחי בביולוגיה של התא.</a>

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

שלב ניגודיות הפרעות דיפרנציאלי ניגודיות (dic) מיקרוסקופית

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Phase-contrast מיקרוסקופיה משמש לעתים קרובות כדי לייצר בניגוד עבור שקוף, שאינו סופג אור, דגימות ביולוגיות. הטכניקה התגלה על ידי Zernike, בשנת 1942, אשר קיבל פרס נובל על ההישג שלו. מיקרוסקופיה DIC, הציג בשנות ה -1960 המאוחרות, היה פופולרי במחקר ביו כי זה מדגיש את הקצוות של פרט הדגימה מבניים, מספק רזולוציה גבוהה של דגימות קטעים אופטי בעובי כולל תאים ורקמות, ביצים, עוברים לא סובלים הילות שלב טיפוסי של שלב בניגוד תמונות. פרוטוקול זה מדגיש את עקרונות היישומים המעשיים של טכניקות אלה במיקרוסקופ.

פרוטוקול זה מדגיש את עקרונות יישומים מעשיים של שלב והפרעה ניגודיות דיפרנציאלי (DIC) מיקרוסקופית

שלב ניגודיות הפרעות דיפרנציאלי ניגודיות (DIC) מיקרוסקופית

מיקרוסקופיה בניגודיות פאזה משמשת לעיתים קרובות ליצירת ניגודיות עבור דגימות ביולוגיות שקופות שאינן בולעות אור. הטכניקה התגלתה על ידי...

מיקרוסקופיה של אור היא אחד הכלים המאפשרים ביותר, ואולי אף המוביל, בתחום המחקר הביו-רפואי. בהתאם ליישום שלכם, מצבי תאורה שונים הם הרצויים לצפייה בדגימה. סרטון זה ידגים שני מצבים אופטיים של תאורה באור תC(transmitted light), מיקרוסקופיית ניגודיות פאזה (phase contrast) ו-DIC או מיקרוסקופיית ניגודיות התאבכות דיפרנציאלית (differential Interference contrast).שלום, אני ויקטוריה סן פרוליק מהמרכז למסורת דימות אופטי באוניברסיטת טקסס, המרכז למדעי הבריאות בסן אנטוניו. היום אראה לכם כיצד לצפות בדגימות בצורה נכונה באמצעות מיקרוסקופיה בניגוד מופע (phase contrast) ובניגוד הפרשתי (differential interference contrast). בואו נתחיל.מיקרוסקופיה בשדה בהיר (Brightfield) סטנדרטית אינה מספיקה לצפייה בדגימות שקופות וחסרות צבע. מיקרוסקופיית ניגוד מופע (Phase contrast) משמשת לעיתים קרובות ליצירת ניגודיות עבור דגימות ביולוגיות שקופות שאינן סופגות אור. הטכניקה התגלתה על ידי זוריך בשנת 1942, שקיבל את פרס נובל על הישגו.מיקרוסקופ ניגודי פאזה (phase contrast microscope) הוא מיקרוסקופ אור בבסיס שדה בהיר, בתוספת עדשות אובייקטיביות מיוחדות לניגוד פאזה המכילות פלטה או טבעת פאזה, וטבעת קונדנסור (condenser annulus) במקום דיאפרגמה. הטבעת ממוקמת בדרך כלל במגדל הקונדנסור, ויש לבחור את גודל הטבעת המתאים עבור עדשות אובייקטיביות שונות. לאחר הגדרת תאורת קולר (Kohler illumination), בחר את עדשת הפאזה המתאימה ולאחר מכן סובב את טבעת הפאזה הרלוונטית למקומה בקונדנסור.לאחר שטבעת הפאזה של העדשה והטבעת של המעבה כוילו כראוי כך שיהיו קונצנטריות וחופפות, ניתן לצפות בדגימה ולכוון את המיקוד באופן מדויק. נדגים כעת כיצד נראה ניגוד פאזה דרך המיקרוסקופ. להלן מבט על פרוסה של כבד חולדה.תחת מיקרוסקופ ניגודיות פאזה (phase contrast). שיטה זו משפרת את מראה החומר הביולוגי על ידי שינוי הניגודיות מגוונים שונים של אפור לגוונים של שחור ולבן. עם זאת, תבחינו כי הדגימות מוקפות בהילה, המסתירה מבנים עדינים.הילה זו היא תוצר לוואי של התאורה על ידי טבעת הפאזה (phase annulus). כעת תבחינו כי כאשר נחזור למצב של שדה בהיר (brightfield), הדגימה הזו קשה מאוד לצפייה. במעבר חזרה לניגודיות פאזה (phase contrast), אנו יכולים לראות בבירור את המבנה והצורה של התאים ברקמת כבד של חולדה, מאז שהשיטה הוצגה בסוף שנות ה-60.מיקרוסקופיית ניגודיות הפרעה דיפרנציאלית, או DIC, הפכה לנפוצה במחקר ביו-רפואי מכיוון שהיא מייצרת תמונות ברזולוציה גבוהה של מבנים עדינים על ידי הגברת הניגודיות בממשקים; התמונה שנוצרת היא של חתך אופטי דק מאוד. למעשה, היכולת של DIC להפיק חתכים אופטיים הפכה אותה למצב שימושי של תאורת אור חודר המשלימה מיקרוסקופיה קונפוקלית. מיקרוסקופ ה-DIC הוא מיקרוסקופ אור בשדה בהיר עם תוספת של האלמנטים הבאים: פולריזטור בין מקור האור לבין הקונדנסור.פריזמה לפיצול קרן DIC בחלק המעבה, פריזמה לאיחוד קרן DIC ממש מאחורי העדשה, ואנלייזר במרחב האינסוף לפני שתי השילובים. כדי להשיג את הביצועים הטובים ביותר מאופטיקת DIC, חשוב תחילה לכייל את מיקרוסקופ האור לתאורה מסוג Kohler ולאחר מכן להציב את רכיבי ה-DIC בנתיב האופטי. אור מהמקור עובר דרך מקטב ולאחר מכן מפוצל על ידי הפריזמה הראשונה.אלומות זוגיות אלו נעות קרוב אחת לשנייה. אם שנייה האלומות עברו דרך אותו חומר בדגימה, הרי שבזמן שהן מאוחדות שוב על ידי המנסרה השנייה, הן אינן מפריעות זו לזו ולכן הן נראות בצבע אפור. עם זאת, בקצה של מבנה, אחת האלומות מהזוג עוברת דרך חומר השונה מזה של בן זוגה ועוברת שינוי.כאשר קרניים אלו משולבות מחדש על ידי המנסרה השנייה, הן יחוללו התאבכות בונה שתביא להיווצרות נקודה בהירה, או התאבכות הורסת שתביא להיווצרות נקודה כהה. להלן מבט על דיאטומים תחת ניגודיות DIC. ניתן להבחין כי פרטים עדינים של מבנה הדיאטום נראים בבירור.עם זאת, אם האופטיקה של ה-DIC מוסרת, פרטים אלו נעלמים. הניגודיות לאורך הדגימה בהירה בצד אחד וכהה יותר בצד השני. דבר זה יוצר רושם של טופוגרפיה, אך למעשה, מדובר באשליה.ניתן להפוך את כיוון אפקט הצללית על ידי סיבוב המקטב דרך נקודת הצטלביות (crossover point) לניגודיות ההפוכה. סקרנו כעת את המצבים האופטיים של ניגודיות פאזה ו-DIC. לצורך תזכורת, ביטול ניגודיות הפאזה מדגיש את הדגימות בניגודיות שבין שחור ללבן, והוא שימושי לצפייה בדגימות שהן חסרות צבע ושקופות כאחד.DIC יוצרת גם ניגודיות בדגימה. היא עושה זאת על ידי יצירת תמונה ברזולוציה גבוהה של חתך אופטי דק. וזהו זה.תודה שצפיתם ובהצלחה במיקרוסקופיה שלכם.

phase-contrast-and-differential-interference-contrast-dic-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Neisseria meningitidis (ננומטר), שלילי גרם אדם ספציפי פתוגן הנשימה, ניתן לאגד את האדם α-actinin. כאן אנו מציגים פרוטוקול להדמיה של colocalisation של החיידק עם תאיים α-actinin לאחר כניסת חיידקים לתוך כלי הדם לתאי המוח האנושי האנדותל (HBMECs).

Visualisation וכימות של אינטראקציות תאיים של Neisseria meningitidis ואת האדם α-actinin על ידי הדמיה confocal

אנו מדגימים את השימוש במיקרוסקופ לוקליזציה של הפעלת פוטו פלואורסצנטי (FPALM) כדי לדמות בו זמנית סוגים מרובים של מולקולות המסומנות באופן פלואורסצנטי בתוך התאים. הטכניקות המתוארות מניבות לוקליזציה של אלפי עד מאות אלפי חלבונים בודדים המסומנים בסימון פלואורסצנטי, עם דיוק של עשרות ננומטרים בתוך תאים בודדים.

הדמיה סימולטנית רב-צבעונית של מבנים ביולוגיים עם מיקרוסקופ לוקליזציה של פוטו-אקטיבציה פלואורסצנטית

אנו מתארים את השימוש במיקרוסקופ אופטי סטנדרטי לביצוע מדידות כמותיות של המסה, הנפח והצפיפות של התא באמצעות שילוב של תמונות ניגודיות של שדה בהיר והפרעות דיפרנציאליות.

מיקרוסקופיה אופטית כמותי: מדידה נייד Biophysical תכונות עם תקן מיקרוסקופ אופטי

מיקרוסקופיה confocal משמשת לתערובות תמונה שקטה וזורמים קולואיד פולימר, הנלמדים כמערכות מודל להשעיות אטרקטיביות. אלגוריתמי ניתוח תמונה משמשים לחישוב מדדים מבניים ודינמיים לחלקיקי colloidal המודדים שינויים עקב כליאה גיאומטרית.

ההדמיה confocal של רגיעה מרותקת ותערובות קולואיד פולימר מזרימים

כאן אנו מציגים מדריך מעשי של בניית מערכת משולבת מיקרוסקופ, אשר ממזג הדמיה epi-פלורסנט קונבנציונלי הדמיה המבוססת על זיהוי סופר-ברזולוציה מולקולה בודדת, גילוי מולקולה בודדת צבע רב, כולל מולקולה בודדת פלורסצנטיות תהודה העברת האנרגיה הדמיה, לתוך הגדרת אחד באופן יעיל.

ניצוח מספר מצבי הדמיה עם מיקרוסקופ זריחה אחת

המטרה של פרוטוקול זה היא לפרט גישה מוכחת להכנת דגימות הפלמונית ננו-חלקיק ולביצוע ספקטרוסקופיית חלקיקים בודדים עליהם בעזרת מיקרוסקופ בניגוד להפרעות דיפרנציאליות (DIC).

מבצע ספקטרוסקופיית על חלקיקי פלמונית עם מיקרוסקופ ניגוד מבוסס שידור מסוג Nomarski הפרעות דיפרנציאליות

כתב יד זה מתאר שיטה לשימוש במיקרוסקופיה פלואורסצנטית חד-תאית כדי לדמיין ולתמת תחרות חיידקים בקוקולטורה.

כימות של תחרות בין-בקטריאלית באמצעות הדמיית פלואורסצנטיות חד-תאית

מיקרוסקופיה דינמית דיפרנציאלית (DDM) משלבת תכונות של פיזור אור דינמי ומיקרוסקופיה. כאן מוצג התהליך של שימוש ב- DDM כדי לאפיין רשתות שלד ציטוסקטון משוחזרות על ידי כימות הדינמיקה התת-מפוזרת והכלוב של חלקיקים ברשתות וימנטין והתנועה הבליסטית של מרוכבים פעילים המונעים על ידי מיוזין אקטין-מיקרוטובול.

כימות דינמיקת שלד ציטוסקלטון באמצעות מיקרוסקופיה דינמית דיפרנציאלית

פרוטוקול זה מפרט את יישומי ההדמיה המתקדמים ואת ניהול המשאבים המשותפים של מערכת מיקרוסקופ קונפוקלי סורקת לייזר, המשולבת עם גלאי מערך מרובה לעיבוד ברזולוציה גבוהה להדמיה תאית ותת-תאית ברזולוציה גבוהה. תהליך העבודה מאפשר הדמיה מולטימודלית מקונפוקלי לרזולוציה סופר (~120 ננומטר) בתוך פלטפורמה אחת, מה שמקל על הדמיה בקנה מידה ננומטר.

דימות ברזולוציה גבוהה וניהול משותף: פרוטוקול למיקרוסקופיה קונפוקלית עם זיהוי מולטיפלקס

להערכת טיפולים בתאי גזע חדש חשוב הלא פולשני המסלול התאים מוזרקים in vivo. סרט הווידאו הזה יראה לכם כיצד לתייג אדם בתאי גזע mesenchymal ו עובריים עם סוכני תחמוצת ברזל מבוסס בניגוד in vivo עבור הבאים MR הדמיה in vivo.

תיוג hESCs ו hMSCs עם ברזל אוקסיד חלקיקים עבור פולשני של מעקב vivo עם MR Imaging

למדו את עקרונות המיקרוסקופיה של ניגודיות דיפרנציאלי ניגודיות (DIC) וניגודיות פאזה לצפייה בדגימות ביולוגיות שקופות. שיטות אלו משפרות משמעותית את הדימוי של מבנים תאיים ומאפשרות מחקר מתקדם במדעי החיים.

שלב ניגודיות הפרעות דיפרנציאלי ניגודיות (DIC) מיקרוסקופית

גלה סרטונים נוספים