Summary
Protocol
- Kuyruk parçaları (3mm) ve işareti kulakları kesin.
- 720 m l STE ve 30 m l Proteinaz K (10 mg / ml stok) ekleyin.
- 55 inkübe ° C ısıtma bloğu ve vorteks her saat 3 saat için 10 saniye boyunca en yüksek hızda.
- 70 ° C'de 5 dakika proteinaz K inaktive.
- 5 dakika boyunca buz üzerinde Quench.
- Tam hızda 10 dakika kuyruk DNA santrifüjleyin.
- 720 m l Isopropanol içeren yeni bir tüp içine süzün .
- Çökelme DNA tersini tüp veya vorteks.
- 5 dakika tam hızda DNA aşağı spin. Süpernatantı.
- Pelet% 70 etanol ile yıkayın.
- Genomik DNA 5 dakika tam hızda dönerler. Süpernatantı.
- DNA 1-2 dakika kurumasını bekleyin.
- Pelet boyutuna bağlı olarak 100-200 m l DNA süspanse edin.
- Yeri tüp 55 ° C 'de 1 saat süreyle DNA çözülme kolaylaştırmak.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
STE | Buffer | 100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / in H2O | ||
TE | Buffer | 100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl |