ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Abstract
Работа в лаборатории сдерживания уровня биологической безопасности 4 (BSL-4) требует времени и большого внимания к деталям. Та же работа, которая проводится в лаборатории BSL-2 с не высоким следствие патогенов будет занять значительно больше времени в условиях BSL-4. Это увеличило потребность во времени из-за множества факторов, которые направлены на защиту исследователя от лабораторных инфекций, рабочей среды от возможного загрязнения и местного сообщества от возможного выброса высокого следствие патогенов. Внутри лаборатории, движение ограничено из-за воздушных шлангов, прикрепленных к обязательным костюмы безопасности всего тела. Кроме того, дезинфекция каждого элемента, который удаляется из шкафов класса II биобезопасности (БББ) требуется. Специалисты лаборатории должны быть обучены в практике лаборатории BSL-4 и должны показать высокий профессионализм в навыки, которые они выполняют. В центре внимания этой статьи состоит в том, чтобы наметить надлежащие процедуры и методы для обеспечения лабораторной бiosafety и точность эксперимента с использованием стандартного вирусного анализа бляшек в качестве примера процедуры. В частности, собственные методы для безопасной работы в среде BSL-4 при проведении эксперимента будет визуально подчеркнуты. Эти методы включают в себя: создание BSC класса II для проведения экспериментов, надлежащая очистка BSC класса II, когда закончили работу, по обращению с отходами и безопасной утилизации отходов, образующихся внутри BSL-4 лаборатории, а также удаление инактивированных образцов изнутри BSL- 4 лаборатории в лабораторию BSL-2.
Introduction
Как безопасность персонала лаборатории обработки высокого следственные патогенных микроорганизмов (нет инфекции профилактика, ни варианты лечения не существует) имеет первостепенное значение, У. С. Департамент здравоохранения и социальных служб США установило руководящие принципы для строительства объекта и передовых методов для безопасного проведения работы с патогенными микроорганизмами в биомедицинской и клинические лаборатории с точки зрения биологической безопасности 1. Посредством законодательства и регулирования, многие из практики и процедур стали обязательные требования, которые должны соблюдаться при работе с этими возбудителями. В США, патогенные микроорганизмы, которые легко передаются от человека к человеку, привести к высокому уровню летальности, и / или потенциально способных оказать значительное воздействие общественного здравоохранения и биотерроризма, классифицируются как Национальный институт здравоохранения / Национального института аллергии и инфекционных Болезнь (NIH / NIAID) Приоритет патогены и или центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) Bioterrorism категории а Агенты 2. Кроме того, чIGH-следствие патогенных микроорганизмов классифицируются как Tier 1 Выберите агентов , если эти патогены являются потенциальными агентами биотерроризма, имеют потенциал для массовых потерь или разрушительных последствий для экономики, жизненно важной инфраструктуры, или общественного доверия 3.
BSL-4 операции, в том числе доступ к институтам с BSL-4 лаборатории, более высоко, чем контролируется BSL-2/3 операций. Например, он значительно сложнее получить доступ к лаборатории BSL-4 по сравнению с лабораторией BSL-2 или BSL-3 из-за существенных требований костюма подготовки, обширные требования наставничества, а также дополнительные предпосылки медицинской биобезопасности. Кроме того, существуют , как правило , чем больше физических барьеров безопасности в BSL-4 в сравнении с объекта BSL-2 или BSL-3 объекта 4-6. Как указано в нашей первой статье о процедурах BSL-4 входа и выхода, сотрудники лаборатории проходят интенсивную подготовку и психологическое обследование , чтобы претендовать на вход в BSL-4 лаборатории 7. Within лаборатории BSL-4, риск инфекции и ошибок можно избежать или смягчить соответствии с установленными процедурами. Исследования должны действовать осторожно и сознательно, с минимальным многозадачности или отвлечений. Наклонившись в положительных скафандры трудно, и лицевые щитки могут ограничивать такие процедуры, как микроскопии. Громоздкие перчатки препятствовать выполнению тонких моторных задач, таких как обработка мелких предметов или маркировки труб. Чтобы свести к минимуму время, проведенное в BSL-4 лаборатории, специалисты лаборатории должны пересмотреть процедуры работы с целью определения шагов, которые могут быть сделаны заранее в лаборатории BSL-2, а затем транспортировать эти материалы в лаборатории BSL-4 для завершения задачи (ов). При удалении материалов для дальнейшей обработки в BSL-2 лаборатории, материалы фиксируются и удаляются из лаборатории BSL-4 в герметичном контейнере вторичного. Примеры образцов, которые, возможно, должны быть удалены, включают: фиксированные пластины или трубки зараженного материала, который будет проанализирован связанный с ферментом immunosorbeнт анализа (ИФА), иммунофлюоресценции (РИФ), или полимеразной цепной реакции (ПЦР).
В дополнение к большим физическим ограничениям, налагаемым средств индивидуальной защиты, требуемой в BSL-4 лаборатории сравнению с теми в BSL-2 лаборатории, процедуры инактивации высокого следствие патогенов в клеточной культуре пластин и утилизации отходов являются более жесткими, чем те, которые необходимы для менее патогенных вирусов учился в лаборатории BSL-2. Как минимум, эти методы должны соответствовать CDC требованию. Например, загрязненными клеток культуральные планшеты и другие материалы могут быть инактивированы с химическими реагентами, такими как нейтральные-буферном растворе формалина. Обработанные клеточных культур пластин или труб должны быть помещены в мешочки уплотнения тепла, содержащие формалин и удалены из лаборатории через замочить бак, заполненный жидким дезинфицирующим средством. ведра мусора заполнены дезинфицирующими растворами и распылить дезинфицирующие средства используются для временного приема отходов, образующихся во время эксперимента и для DISInfecting перчатки, чистка кабинета биологической безопасности поверхностей и инструментов, соответственно. Четвертичные дезинфицирующий раствор аммония в концентрации перечисленных считается золотым стандартом для всех США BSL-4 лаборатории (Barr J, личное сообщение, 2015). Твердые отходы из ведра отходов автоклавируют, чтобы устранить возможность загрязнения.
В попытке наглядно продемонстрировать рабочий процесс и ограничения общих процедур BSL-4, мы использовали стандартный вирусный анализ зубного налета в качестве примера обычно используемой вирусной процедуры. В то время как вирусная процедура анализа описана в общем, мы подчеркиваем процедуры по биологической безопасности, используемые для обеспечения безопасности персонала лаборатории в данном протоколе. Пожалуйста , обратитесь к предыдущим классическим визуализаций анализа бляшек для дополнительного фона на бляшка анализа техники 8,9.
Процедуры , представленные здесь следовать спецификации BMBL намеченные CDC 1. Тем не менее, представленные протоколыспецифичные для IRF-Фредерик. Каждый BSL-4 объекта имеет различные стандартные операционные процедуры (СОП) и методы работы, которые влияют на выполнение экспериментов в лаборатории BSL-4. Альтернативные процедуры управления потоком отходов и выполнения анализов бляшки могут отличаться в зависимости от управления и функционирования этих лабораторий. Тем не менее, общее понимание установки костюма лаборатории и процедуры для выполнения работы с классом II шкафов внутри среды BSL-4 BSL-4 поможет ученым понять ограничения и последствия для безопасности при рассмотрении исследования высокого риска патогенов. Повышение информированности внешних сотрудников за трудностей, окружающих работу в лаборатории BSL-4 может привести к скорректированным ожиданий и большей легкостью в разработке медицинских контрмер против в научном сообществе.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Лаборатория Вход
- Соберите все поставки из лаборатории BSL-2 для эксперимента (например, клетки, средств массовой информации, а также расходные материалы ) до вступления в лаборатории BSL-4.
- Завершите процедуру входа в BSL-4 (подробно описан в работе 7).
2. Подготовка кабинета биологической безопасности II класса в лаборатории BSL-4
- Оказавшись внутри лаборатории BSL-4, обеспечить ежедневный внутренний контрольный список (рис 1) была завершена. Заполните контрольный список, если контрольный список не был предварительно заполнена и указать, какие будут использоваться вирусы. Если контрольный перечень уже завершено, добавьте его имя и какой вирус будет использоваться в списке.
- Почистите BSC класса II путем распыления вниз всю внутреннюю часть BSC (включая створке) с 5% -ным раствором двойной четвертичной дезинфицирующим аммония (например, н-алкил диметил бензил хлорида аммония, н-алкил диметил этил бензил аммонийхлоридом или другим дезинфицирующим подходящим для агента используется) и вытирают бумажным полотенцем 10,11. Спрей 70% раствор этанола внутри шкафа и створкой, чтобы удалить липкий дезинфицирующий раствор.
- Если сидеть, установите кресло перед BSC класса II на удобной высоте , чтобы гарантировать , что задняя часть корпуса может быть достигнуто и что лицо лабораторного специалиста расположено выше переднего отверстия (рисунок 2) 11.
- Подготовьте контейнер для отходов для кабинета биологической безопасности. Убедитесь, что конечная концентрация двойного четвертичного аммония дезинфицирующего раствора в контейнер для отходов не менее чем на 5%. План и сделать так, 10% -ный раствор, к которому отходы будут добавлены, что будет разбавлять дезинфицирующее средство. Кроме того, поместите пульверизатор с 5% двойным четвертичного дезинфицирующим раствором аммония внутри класса II BSC для распыления все детали перед удалением и руки в перчатках во время и после завершения анализа. <li> Поместите соответствующие материалы , необходимые для всего эксперимента в BSC класса II еще в шкафу , как это возможно , чтобы избежать повторных введений материала в BSC класса II и нарушению воздушного потока 11.
3. Пример: Налет Анализ
- Получить вируссодержащих образцы и контролировать вирус из места хранения вручную и оттаивать материалов в термостате при 37 ° С.
- Добавьте лунки 6-луночные планшеты, которые будут использоваться в соответствии с разведениями вируса запланированным. Отметьте крышки и тело пластин для обеспечения успешного согласования, если крышки и тело разделены.
- Принесите материалы из шагов 3,1-3,2 в II BSC класса. Поместите все элементы, которые имеют или не будет вступать в контакт с вирусом на одной стороне ( «чистую сторону») и отходов на другой стороне ( "грязная сторона"). Если это возможно, сохранить "чистые предметы" по крайней мере 30 см друг от друга от "грязных предметов" во время аэрозольного видов деятельности 11.
- Работать как можно ближе к внутреннему центру класса II BSC , как это возможно, так как внутри центр предназначен для наиболее эффективного положения , чтобы защитить себя 11.
- Удалить 50 мкл образца вируса и управления вируса и помещают в 450 мкл модифицированной среды Игла Дульбекко с 2% фетальной бычьей сыворотки. Продолжайте делать серийные разведения , как далеко по мере необходимости (рис 3А).
- В разведениях, смешать образцов вирусов по крайней мере 5 раз с наконечником пипетки медленно и осторожно, пытаясь свести к минимуму образование пузырьков воздуха в образцах. Изменение пипеток после каждого добавления к следующему разбавлении скважины.
- В последнем разведении, после смешивания образца 5 раз, отказаться от 50 мкл образца вируса в контейнер для отходов, чтобы обеспечить равные объемы разведений.
- При утилизации наконечников, промойте каждый наконечник с дезинфицирующим раствором из ведра отходов обеззараживать внутри и снаружи наконечника перед тем expellING наконечник в ведро для отходов.
- После того, как разведений сделаны, установить Разрежающий скважины в сторону и начать отсасывание носитель из лунки для культивирования клеток пластин, в результате чего 500 мкл среды в каждую лунку 6-луночного планшета.
- Закончив с наконечником пипетки, аспирация дезинфицирующий раствор из ведра отходов в верхнюю часть пипетки с помощью ручного, регулируемой громкостью, кнопочный дозаторов, чтобы обеспечить надлежащее обеззараживание внутри пипетки. Оставьте кончик в ведро с отходами до конца эксперимента.
- После того, как средства массовой информации были удалены из пластин, добавьте 100 мкл правильного образца в соответствующую лунку в предварительно меченных пластин в двух экземплярах, каждый изменяя советы для каждого образца.
- После завершения анализа бляшек прививках, спрей от руки в перчатках с дезинфицирующим раствором и использовать бумажное полотенце, смоченное дезинфицирующим раствором, чтобы вытереть наружную поверхность всех пластин перед установкой пластины обратно в инкубатор вручную. реторфа этот процесс, пока все пластины не возвращаются в инкубатор.
- Раскачивать пластины в движение по фигуре 8, чтобы обеспечить надлежащее рассеивание образца над клетками каждые 15 мин в течение 1 часа.
- После завершения качалки пластин, возвращают листы в BSC класса II вместе со смесью минимальной необходимой среды 2x Игла и 1,6% трагакант, полутвердого накладкой, что легче манипулировать, чем агароза, используемый для наложения тесту с посевом.
- Добавляют 2 мл накладываемого смеси в каждую лунку в 6-луночного планшета и рок еще раз в движении по фигуре 8 для равномерного распределения наложения по всей поверхности скважины. Повторите этот процесс, пока все хорошо используется не перекрывается с наложенной смеси.
- Убедитесь в том, что кончик серологической пипетки не касается какой-либо жидкости в скважинах, чтобы избежать перекрестного загрязнения при выполнении процедуры наложения.
4. Удаление отходов и очистки приборов и биологической безопасности кабинета
<ол>- После удаления микропипетки из BSC, протрите их отдельной бумажным полотенцем с 70% -ным раствором этанола, чтобы избежать липкого осадка продукта на инструментах. Спрей любые инструменты, которые не могут быть эффективно протирать 5% дезинфицирующего и оставить в контакте с раствором в КБС в течение 10 мин.
5. автоклавирование отходов
- Удалите сумку биологической опасности из контейнера для биологически опасных отходов и поместить в автоклав лоток на тележке.
- Оставьте биологически опасных открытыми мешки и поместить часть автоклава ленты на внешней стороне сумки, соединяя сторон лотка автоклавный, чтобы держать сумку, прикрепленную в лотке.
- Поместите две части автоклава ленты на серологического лотке пипетку и пометьте его со своими инициалами и датой. Поместите серологические пипетки поднос на тележке с подносом в автоклаве.
- Откройте автоклав. Подключите входящий в комплект автоклав погрузка / разгрузка окRT в автоклав и вывести складную автоклавного платформу для отдыха на тележке.
- Извлеките металлический стержень из автоклава и открыть верхнюю часть. Поместите флакон биологический индикатор , содержащий споры Geobacillus stearothermophilus в металлический стержень , чтобы проверить , что цикл стерилизации в автоклаве был успешно завершен.
- Установите металлический стержень в центре мешка отходов в лотке автоклава, но убедитесь, что металлический стержень по-прежнему легко доступны.
- Поместите автоклавный поддон, заполненный отходами и серологических пипеток лоток на выдвигающейся автоклавного платформы и толкать его обратно в автоклав.
- Отсоединение автоклав загрузки / разгрузки тележки из автоклава и закройте автоклавной дверцу.
- Запустите автоклав.
- Не оставляйте автоклав до начала цикла. Операционный экран автоклава будет показывать время, оставшееся для этого запуска.
- После того, как автоклав запуска завершена, удалите биологическую INDicator и оценки для роста путем нагревания в указанном инкубаторе. Если рост обнаружен на биологический индикатор, повторно запустить мусор в автоклаве, а также оценить заново индикатор. Если никакого роста не обнаружено, удалить мусор с объекта.
6. Пример: Фиксация и Окрашивание зубной налет Assays
- После того, как соответствующее количество дней (который зависит от вируса, используемого) прошло, возвращают обратно в лабораторию и выполнять действия из секций 1 и 2 еще раз.
- Осторожно удалите анализа бляшек пластины из инкубатора завершено на шаге 3.1.2, и поместить в класс II BSC вручную.
- Пипетировать от всех средств массовой информации и наложения материала и разлить в контейнер дезинфицирующим раствором и заменить смесью 10% нейтральном забуференном формалине и 0,8% кристаллическим фиолетовым 12,13. Пусть смесь остается на пластинах в течение 30 минут для инактивации вируса на пластинах.
- После инактивации, осторожно удалите нейтральныйбуферном растворе формалина / кристаллический фиолетовый смесь и поместить в отдельный контейнер для отходов должны быть нейтрализованы перед утилизацией.
- Спрей руки в перчатках с дезинфицирующим средством и протрите внешнюю поверхность пластин перед передачей их из II BSC класса, как описано выше.
- Перейдите к раковине, сполоснуть пластины, чтобы удалить избыток пятно, а затем поместить тарелки на тележке, чтобы высохнуть.
- После того, как пластины полностью высохли, используйте светлую коробку для подсчета бляшек. Запишите все счетчики и вычислить титр вируса из стандартного уравнения (рис 3B).
7. Удаление образцов из лаборатории BSL-4
- Инактивирует любые образцы, которые будут манипулируют под BSL-2 лабораторных условиях. Выполните один из двух методов , утвержденных внутренней офис по биологической безопасности в IRF-Фредерик , используя 10% нейтральный забуференный формалин (НСБ) или Trizol LS (фенол, гуанидинизотиоцианата, тиоцианат аммония, ацетат натрия, глицерин) 1,14. Передача саmples в новую чистую пробирку или пластины за пределами BSC перед упаковкой для удаления из лаборатории BSL-4.
- Термосвариваемого инактивированных образцов в трубах или пластин в термосвариваемого мешочек, содержащий достаточное количество 5% дезинфицирующий раствор или Фиксирующий раствор для дезинфекции внутри мешка и наружную поверхность образца труб, проходящих передачу из лаборатории BSL-4. Поместите этот мешок в другой сумке следуя той же процедуре.
- Уплотнение второй мешочек и поместите термосвариваемый пакет в данк бак, содержащий 5% дезинфицирующий раствор в течение по крайней мере 10 минут для дезинфекции за пределами термосвариваемый пакет.
- Заполните книгу журнала данк бак внутри лаборатории путем очерчивания количество и размер труб, объем в пробирках, агент, используемый метод инактивации используется, и комната, где образцы будут переданы.
- Координата с коллегой по внешней стороне лаборатории BSL-4, чтобы получить мешочек из замочить резервуара и берут пробы в лабораторию BSL-2.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
После соответствующих процедур в лаборатории BSL-4 имеют решающее значение для обеспечения безопасного и эффективного завершения анализов. Ссылаясь на заполненного ежедневного внутреннего контрольного списка (рисунок 1), сотрудники лаборатории убедитесь , что оборудование в полном объеме. Правильное расположение тела в центре BSC гарантирует , что эксперимент проводится при оптимальных условиях воздушного потока (рисунок 2). Образец вируса серийно разводили для получения пластин , которые имеют 30-300 бляшек на пластину (фиг.3А) , и для определения титра вируса (фигура 3В). Ряд факторов влияет на формирование бляшек, в том числе вирус тропизм для линий клеток - хозяев, техника прививка, условия для роста вируса, соответствующего диапазона разбавления и выбор наложения 8. Отходы, образовавшиеся в BSC во время процедуры правильно дезинфицировать перед удалением из BSC и снова автоклавированием передвыходя из среды BSL-4. Следуя этим процедурам, никаких лабораторных инфекций не зафиксировано в ходе исследования BSL-4 на IRF-Фредерик.
Рисунок 1:. Пример ежедневные внутренние системы Контрольный список Ежедневное пополнение этого перечня гарантирует , что сотрудники лаборатории проверил оборудование в лаборатории (самое главное BSC) до начала работы. Если BSC оказывается за пределами диапазона калибровки, не должен использоваться этот BSC, и техническое обслуживание должны быть уведомлены. Все БББ должны быть правильно откалиброван и функционирует. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
фигура 2:. Вид сзади и сбоку лабораторного специалиста пипетирования образцов в шкафу II класса биологической безопасности (А) ведро Отходы , содержащие желтый дезинфицирующий раствор и использовали пипетки справа от колодца пластин (В), и бутылка дезинфицирующее спрей право ведро отходов (A). Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3: Расчет вирусного титра образца Титр вируса выражают в виде бляшкообразующих единиц (БОЕ) на мл.. Для расчета титра вируса, подсчитывают количество четко определенных бляшек (БОЕ), и разделить на произведение коэффициента разбавления (г) раза объем разбавленной вирус, добавленный в лунку (V).d / 53600 / 53600fig3large.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Работа в лаборатории BSL-4 требует значительного времени и дополнительного внимания к деталям. Любой тип работы в этой среде требует хорошо подготовленных, тщательное и добросовестные лиц. Стандартный вирусный анализ бляшек дает точную модель общей процедуры для работы с высоким следствие патогенных микроорганизмов в лаборатории BSL-4, так как анализ включает несколько основных концепций, в которых должны быть обученные работники лаборатории.
Первая главная концепция является правильное использование и применение безопасных методов в BSC класса II, который функционирует в качестве первичной защитной оболочки для высоких следствие патогенов. Понимание того, как функционирует BSC класса II будет диктовать практики, которые в значительной степени ограничивают риски воздействия физическим лицам. Рабочий поток из чистой зоны ( "чистая сторона") в зоне радиоактивного заражения ( "грязная сторона") через рабочую зону в классе II BSC также помогает избежать перекрестного загрязнения 11. Чистые и загрязненные материалы и полняющемух годов должны быть отделены, чтобы ограничить перемещение загрязненных предметов более чистых предметов.
Вторая основная концепция физической и биологической обработки отходов. Правильные шаги по утилизации обоих типов отходов имеют важное значение в обеспечении того, чтобы специалисты лаборатории остается безопасной и окружающая среда не загрязняется. Действия во время эксперимента предназначены для инактивации и уничтожения патогенных микроорганизмов, прежде чем образцы выведены из BSL-4 лаборатории. Примеры таких критических шагов включают: пипеткой дезинфицирующее средство в каждый наконечник, что позволяет, по меньшей мере 10 мин Время потенциально загрязненных материалов с дезинфицирующими средствами, автоклавирование отходов контакта, и проверки стерильности во время автоклавных циклов. Эти шаги призваны быть избыточным, чтобы обеспечить уничтожение высокого следствие патогенов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Micro-Chem Plus | National Chemical Laboratories | 255 | |
Ethanol | Fisher | BP2818500 | |
2 ml 96-Deep Well Plates | Fisher | 278743 | |
10 ml Serological Pipette | Fisher | 13-678-11E | |
25 ml Serological Pipette | Fisher | 13-678-11 | |
6-well plates | Fisher | 140675 | |
Crystal Violet | Sigma | HT90132-1L | |
10% Neutral Buffered Formalin | Fisher | 22-050-105 | |
Tragacanth | Fisher | 50-702-2000 | |
20 μl Pipette Tips | Fisher | 21-402-550 | |
200 μl Pipette Tips | Fisher | 21-402-561 | |
1,000 μl Pipette Tips | Fisher | 21-402-581 | |
DMEM | Lonza | 12-604Q | |
FBS | Sigma | F2442-500mL | |
Penicillin/Streptomycin | Lonza | 17-602E | |
2x EMEM | Quality Biological | 115-073-101 | |
Pipettor | Drummond | 4-000-101 | |
1,000 μl Pipette | Rainin | L-1000XLS+ | |
200 μl Pipette | Rainin | L-200XLS+ | |
12-Well, Multichannel 200 μl Pipettor | Rainin | L12-200XLS+ | |
8-Well, Multichannel 1,000 μl Pipettor | Rainin | LA8-1200XLS | |
Attest | Express Medical Supplies | MMM12192 | |
Autoclave | Getinge | GEB 2404 AMB-2 | |
Autoclave Bag | Fisher | 01-828E | |
2,000 ml Beaker | Fisher | 02-591-10H | |
Autoclave Tray | Fisher | 13-359-20B | |
Pipette Tray | Fisher | 13-361-5 | |
37 °C Incubator | Fisher | WU-39321-00 | |
Biohazard Can | Rubbermaid Commercial | FG614500 RED | |
Autoclave Tape | Fisher | 15-903 | |
Autoclave Rod | Made by IRF Facility | N/A | |
Light Box | Fisher | S11552 | |
Heat Sealer | Fisher | NC9793612 | |
Heat Seal Pouches | Fisher | 01-812-25H | |
Biohazard Bag | Fisher | 01-828E |
References
- Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. 5th edn. Chosewood, L. C., Wilson, D. E. , , U.S. Dept. of Health and Human Services. Washington, D.C. Available from: http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/ (2009).
- Bioterrorism agents/diseases by category. , Centers for Disease Control and Prevention. Atlanta, GA, USA. Available from: http://emergency.cdc.gov/agent/agentlist-category.asp (2014).
- Executive order 13546 -- Optimizing the security of Biological Select Agents and Toxins in the United States. , The White House, Office of the Press Secretary. Washington, DC. Available from: http://www.whitehouse.gov/the-press-office/executive-order-optimizing-security-biological-select-agents-and-toxins-united-stat (2010).
- Shurtleff, A. C., et al. The impact of regulations, safety considerations and physical limitations on research progress at maximum biocontainment. Viruses. 4, 3932-3951 (2012).
- de Kok-Mercado, F., Kutlak, F. M., Jahrling, P. B. The NIAID Integrated Research Facility at Fort Detrick. Appl Biosafety. 16, 58-66 (2011).
- Keith, L., et al. Preclinical imaging in BSL-3 and BSL-4 envrionments: imaging pathophysiology of highly pathogenic infectious diseases. Pharmaco-imaging in drug and biologics development. Moyer, B. R., Cheruvu, N. P. S., Hu, T. , Springer-Verlag. New York, NY. (2014).
- Janosko, K., et al. Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 1. Laboratory Suite Entry and Exit Procedures. J Vis Exp. , (2015).
- Baer, A., Kehn-Hall, K. Viral concentration determination through plaque assays: using traditional and novel overlay systems. J Vis Exp. , e52065 (2014).
- Gonzalez-Hernandez, M. B., Bragazzi Cunha, J., Wobus, C. E. Plaque assay for murine norovirus. J Vis Exp. , e4297 (2012).
- Biosafety manual for Texas Tech University. , Texas Tech University. Lubbock, TX. Available from: http://www.depts.ttu.edu/ehs/web/docs/ttu_biosafety_manual.pdf (2005).
- Working safely in your NuAire biological safety cabinet. , NuAire. Plymouth, MN. Available from: http://ors.uchc.edu/bio/resources/pdf/3.2.3.A.3_nuaireBSC.pdf (2015).
- Alfson, K. J., et al. Particle to plaque-forming unit ratio of Ebola virus influences disease course and survival in cynomolgus macaques. J Virol. , (2015).
- Shurtleff, A. C., et al. Standardization of the filovirus plaque assay for use in preclinical studies. Viruses. 4, 3511-3530 (2012).
- Blow, J. A., Dohm, D. J., Negley, D. L., Mores, C. N. Virus inactivation by nucleic acid extraction reagents. J Virol Methods. 119, 195-198 (2004).
Tags
Инфекция выпуск 116 биологической безопасности уровень биологической безопасности 4 BSL4 BSL-4 класс II биозащитой BSC класса II высокая герметичность максимальное сдерживание средства индивидуальной защиты средства индивидуальной защиты базовый протоколErratum
Formal Correction: Erratum: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
Posted by JoVE Editors on 12/05/2016.
Citeable Link.
A correction was made to the authors section in: Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 2. General Practices
One of the authors names was corrected from:
Nicole Joselyn
to:
Nicole Josleyn