Summary
신장 구조 조직 설계 기관 부족 및 투 석의 해로운 효과 위한 솔루션을 제공합니다. 여기, 우리는 마이크로 프로토콜 설명 cortico 골 수 세그먼트의 격리 murine 신장 해 부. 이 세그먼트는 신장 organoids를 형성 세포 비 계 없는 구문으로 이식.
Abstract
신장 이식 이제 끝 단계 신장 질병을 위한 주류 치료 이다. 그러나, 대기자 명단 이식 달성이 환자의 단지 1 / 4에 대략 96000 명, 기관 실패와 그에 대 한 대안에 대 한 절박 한 필요가 있다. 그것은 지불 해야 하는 전체 의료 비용 함께 투 석의 해로운 결과 감소, 활성 조사 기관 이식에 대체 솔루션을 찾아 진행 중 이다. 이식 조직 설계 신장 세포 구조 등 가능한 방식을 한 손실된 신장 기능을 대체 있습니다. 여기, 처음으로 설명입니다 생활 corticomedullary의 격리 murine 신장 서 신장 세그먼트. 이러한 세그먼트 한번 이식 호스트 맥 관 구조와 신속한 연결 수 있는 비 계 없는 내 피-섬유 구조 내의 급속 한 합동 할 수 있다. 성인 마우스 신장 살아있는 기증자, 200-300 µ m 직경에서 신장 세그먼트를 stereoscope 서 뒤에서 조달 했다. 여러 신장 구조 한 신장에서 수확 기본 신장 세그먼트를 사용 하 여 조작 했다. 이 메서드는 기능 신장 조직 그렇지 않으면 삭제 될 것 입니다에서 구제할 수 있는 절차를 보여 줍니다.
Introduction
만성 신장 병 (CKD)는 현재 중요 한 공중 위생 도전 전세계1중 하나입니다. 미국에서 CKD의 보급은 가장 심각한 형태, 끝 단계 신장 질병 (ESRD)2에서 고통 이상 600000 미국인과 전체 인구의 14% 이상. ESRD 있는 사람들을 위해 사용할 수 있는 현재 치료 옵션 포함 투 석 및 신장 이식. 약 25000 환자가 신장 이식 매년 받아야, 비록 환자 수가 매년 인명 기관 및 그 수신 이식3를 기다리고 그 사이 큰 차이가 이어지는 추가 됩니다. 장 수 및 삶의 질에 심각한 부정적인 영향, 뿐만 아니라 투 석 놀라운 금융 부담으로 연결 됩니다. 2014, 메디케어 클레임을 지불 ESRD 환자2$30 십억 이상 합계 했다. 제한 된 장기 공급 및 환자 투 석 요구에 아무 명백한 하향 추세, 연구 노력 투를 대체 솔루션 식별 목적으로 하 고 이식도 중요 하다. 투에 대 한 필요에도 비교적 짧은 지연 투 석 관련 비용4,,56을 연기 하는 동안 환자 수 질 조정 된 생활 년 및 생산성을 실질적으로 증가 합니다.
있으 나 ESRD에서 그런 기능 조직 손실에 대 한 솔루션 전체 기관 공학 사용 하 여 비 계 기반 organoid 제조에서까지 널리 다양 한 접근법과 조직 공학 및 재생 의학 연구소에서 현재 공부 되 고 있다 오르간 구조 세포 이식7,,89,10,11decellularized 업과 한계 또는 폐기 신장에서 복잡 한 신장 구조는 부분적 으로만 조사. 사실, 거의 20% 신장 이식에 대 한 조달의 다양 한 이유로12,13에 대 한 삭제 됩니다. 이러한 상 상속 이식에서 신장 기능 조직 활용 고 하나 또는 여러 조직 설계 구조에 통합 될 수 있습니다. 사전 연구 신장 조직 공학 목적14,15엑스트라 세포 매트릭스를 활용 하 여 이러한 폐기 장기 사용의 타당성을 설명 했다. 그러나, 몇 가지는 사용 건강 한 신장에서 기본 nephronal 조직 조직 공학 목적16,,1718.
이전 김 그 외 여러분 에 의해 설명 하는 한 가지 방법은 다음 polyglycolic 산 (PGA) 건설 기계 구조물 제작16에 시드 했다 건강 한 쥐 신장에서 신장 "세그먼트"의 분리를 포함 한다. 그러나, 작은 정보 정확한 해 부 방법론에 관한 부여 되 고 세그먼트 잘 닦지 및 여과의 조합에서 입수 했다. 우리는 마찬가지로 그대로 nephronal 아키텍처, 개별 신장 세그먼트 하지만 기정 기법에 의존 하는 대신이 프로토콜의 설명. Nephrectomies는 살아있는 성인 생쥐, 신장 어디 신장 캡슐을 제거 하 고 조직을 더 해 부 해 부 현미경을 전송 후에 수행 됩니다. 작은-내경 30½ G 바늘 절삭 악기로 사용 되 고도 가이드 해 부에 은닉, 바늘으로 직경은 신장 세그먼트의 대상 직경. 격리 된,이 경우 murine, 신장 세그먼트 문화에서 생존을 유지 하 고 비 계 없는 내 피-fibroblast 세포 구조19통합. 이러한 구문은 이전 바이오 인공 췌 장20를 포함 하 여 다른 장기를 사용 되었습니다.
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Protocol
아래에 설명 된 모든 동물 수술 절차는 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) 의학 대학의 사우스 캐롤라이나에서 어떤 동물 수술 전에 또는 사용의 어떤 동물의 조직에 의해 승인 되었다.
1. murine 신
- 수술 용 마스크와 오염 위험을 최소화 하기 위해 bouffant 모자를 돈. 외과 영역의 설정 동안 불 임을 유지 합니다.
- 운영 테이블에 비 fenestrated 수술 커튼을 배치 합니다.
- 무 균 커튼에 압력가 악기의 팩을 엽니다. 신에 필요한 악기 3 작은 hemostats, 정밀한 집게 이빨, 이빨, 그리고 직선 아이리스가 위 없이 좋은 집게.
- 운영 테이블의 센터에 다른 비 fenestrated 외과 용 드 레이프를 배치 합니다.
- 5 mL의 Dulbecco의 인산 염 버퍼 염 분 (DPBS) 칼슘과 마그네슘, 1% 페니실린/스 살 균 15 mL 원뿔 튜브에 보충을 준비 합니다. 얼음 운영 테이블 옆에이 솔루션을 배치 합니다.
- 동물 주택 단지에서 8-12 주 오래 된 C57BL/6 마우스를 (남성 또는 여성)를 가져옵니다.
- 마 취 유도 챔버 내부 마우스를 놓고 3.5% 흡입 isoflurane로 유도 합니다. 코 콘 2 %isoflurane 마 취 유지 보수에 대 한 사용 하 여 마우스를 놓습니다.
- 주기적으로 페달 반사 (회사 발가락 핀치)에 대 한 평가 하 여 수술 내내 마 취의 적절 한 깊이 대 한 모니터.
- 제 모 크림을 사용 하 여 복 부 몸통에서 머리의 모든을 제거 합니다. 이 지역을 모든 머리에서 복 부 제거 되었습니다 되도록 증류수로 헹 구 십시오.
- 최고 비 fenestrated 드 레이프에서 부정사 자리에 무 균 운영 테이블에 마우스를 전송 합니다. 그냥 마우스 복 부를 overlying 드 레이프에 2 x 2 cm2 창문 내기를 잘라.
- Povidone-요오드 70% 에탄올 복 부 살 균 거 즈 또는 코 튼 볼을 사용 하 여 다음 적용 됩니다.
- 가 위 치아와 아이리스 미세 집게를 사용 하 여, 3-4 cm 수직 복 부 피부 절 개를 중간, 중간의 왼쪽에 0.5 cm에 평행 하 게
참고: 오른쪽 신장 제거 하려고,이 중간의 오른쪽에 0.5 c m 절 개 될 것입니다.- 아이리스가 위로 복 부 캐비티를 입력 incise을 치아 없이 좋은 집게와 복을 잡고. Hemostats 피부와 긴장을 옆으로 배치 하 고 노출 강화 복의 뛰어난 및 하 부 측면 가장자리에 적용 됩니다.
- 섬세 하 게 노출 왼쪽된 신장에 복 부의 오른쪽 장 내용 이동. 부드럽게 복 부의 상승 신장에 견인 장소.
- 왼쪽된 신장 hilum 걸쳐 hemostat 장소. 아이리스가 위를 사용 하 여 transect ureter과 신장 혈관.
- 1% 왼쪽된 신장 에서도 얼음에 페니실린/스 DPBS 솔루션.
- 포함 하는 메 마른 조직 문화 후드에 신장 튜브를 전송 합니다. 15 mL 원뿔 튜브의 신장 60 mm 페 트리 접시 (그림 1)에 전송. 칼슘과 마그네슘 5 mL DPBS를 사용 하 여 두 번으로 하는 린스 신장 5 ml DPBS 60 mm 접시에 일시 중지 하십시오.
- 5 mL DPBS 기정 프로토콜 중 사용할 수와 함께 추가적인 60 mm 페 트리 접시를 준비 합니다.
- 승인 된 IACUC 동물 프로토콜에 따라 thoracotomy와 신장, 조달 다음 exsanguination 마우스를 안락사.
2. murine 신장 서 신장 세그먼트 격리에 대 한
- 메 마른 기술 프로토콜, 메 마른 장갑, 수술 용 마스크를 포함 하 여의이 부분에 대 한 사용 하 여 계속 bouffant 오염 위험을 최소화 하 고.
- 장소 살 균 영역 왼쪽 및 오른쪽 현미경의 악기에 대 한 멸 균 분야에 뿐만 아니라 스테레오 현미경 플랫폼에 커튼. 현미경 초점 손잡이에 플라스틱 접착 시트를 배치 하 고 70% 에탄올 스프레이. 무대를 빛 듀얼 목이 조명 기를 켭니다.
- 오픈 소독된 악기 (치아, 메스 핸들, #15 메스 블레이드, 두 직선 hemostats, 두 30½ 없이 미세 집게 게이지 빈 구멍 바늘) 무 균 커튼에. 메스에 장소 #15 블레이드 지금 처리 하 고 각 바늘 어댑터/허브 그림 1에서 보듯이 나중 사용을 위한 바늘 절 개 악기를 만들려고 한 hemostat를 연결 합니다.
- 60 mm 페 트리 디쉬, 포함 하는 DPBS와는 다른 유일한 DPBS, 현미경 영역 조직 문화 후드에서 신장 하나를 이동 합니다.
- 목표 아래 60 mm 페 트리 접시를 놓고 신장 폭로 뚜껑을 제거 합니다. 나중에 사용에 대 한 멸 균 분야에 포함 하는 DPBS 접시를 옆에 둡니다.
- 만 신장의 앞쪽 또는 후부 표면 (즉, 접시의 바닥을만 지 다른 얼굴로 신장의 대형 평면 얼굴) 보기에 접시를 이동 합니다. 절차의이 부분에 대 한 3.2-4 배속 줌. 비 지배적인 손을 사용 하 여, 통과 하는 신장 신장 열 등 하 고 우량한 극 근처 요리에 대 한 핀 치아 없이 미세 집게를 사용 합니다.
- 신장 핀 장소에 비 지배적인 손을 계속. 지배적인 손을 가진 #15 블레이드를 사용 하 여 노출 된 표면에서 반투명 섬유 capsular 레이어를 제거 하. 신장 캡슐의 나머지를 제거의 노출 된 표면에서 가장 천박한 0.5 m m를 면도.
- #15 블레이드를 사용 하 여 조직의 약 2 m m3 크기에서, decapsulated 지역에서 거꾸로 피라미드 해 부. DPBS만을 포함 하는 60 m m 접시를 검색 하 고 깨끗 한 접시에 조직의 피라미드를 배치. 신장에의 나머지를 삭제 합니다.
- 해 부의 나머지 부분에 대 한 1.5-2.0 X 확대를 감소. 때까지 조직 세그먼트 바늘 팁의 직경 보다 작거나 조직 조각 점차적으로 작은 조각으로 슬라이스 절단 악기 두 hemostat 바늘 악기를 사용 하 여. 크기의 신장 조직 2 m m3 는 50 개 이상의 세그먼트를 한 번 완전히 해 부를 생산할 예정 이다.
- 조직 문화 후드에 신장 세그먼트와 60 mm 접시를 이동 합니다. 1000 µ L 피 펫 사용 DPBS를 제거 합니다. 5 mL DMEM, 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 1% 페니실린/스 보충을 추가 합니다.
- 문화 인큐베이터 또는 세포에 이식에서 37 ° C에서 3 일 동안 즉시 생성합니다.
3. 신장 세그먼트 세포질 구조 제조
- 문화 정상적인 인간 피부 섬유 아 세포 (NHDF) 그리고 인간의 지방 microvascular 내 피 세포 (HAMEC)를 105 fibroblasts x 7.2와 1.8 x 10 원하는 구조 당5 내 피 세포 몇 주 동안. 조직 문화 후드에서 agarose 금형 미리 혈관 비 계 없는 내 피 섬유 구조 (사양) 앞에서 설명한 Czajka 에 의해 형성에 막대 모양의 우물으로 (4:1) 내 피 세포를 섬유 아 세포의 적절 한 비율 씨 외 19.
- 멸 균된 hemostat, 30½ G 바늘 및 플랫 엔드 메 마른 주걱 얻을.
- 발음 및 신장 세그먼트를 제거 하지 않도록 주의 되 고 신장 세그먼트를 포함 하는 60 m m 플레이트에서 미디어의 대부분을 제거 합니다.
- 세그먼트의 주입을 시각화 하기 위해 외과 Loupes 장비.
- 10-15 세그먼트를 얻을, 주걱의 매우 끝에 따라 균등 하 게 퍼져 60 mm 접시의 바닥을 따라 부드럽게 주걱의 끝을 다쳤어요. 사양 시드 했다 잘의 입술에 최대한 가깝게 주걱의 끝을 놓습니다.
- 우물의 가장자리를 주걱 끝에서 각 개별 세그먼트를 이동 하려면 다른 손에 hemostat 30½ G 바늘 악기를 사용 합니다. 부드럽게 잘 사용 하는 약간 이전 시드 세포 현 탁 액에 빠져들 때까지 바늘 팁에 아래로 각 세그먼트를 이동 합니다.
- 2에서 신장 세그먼트 사양 문화: FGM-2/EGM-2/DMEM 매체 (2.5 mL 전체 볼륨)의 1:1 비율. 3 일 문화 미디어 모든 24 h를 변경 합니다. 구문에서 72 h 형에서 제거 하 고 수정 또는 플래시-동결 처리를 위해.
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Representative Results
설명 하는 프로토콜 신장 조직의 피라미드 2 mm3 섹션 당 약 50 신장 세그먼트를 생성 합니다. 처리 되 고 몇 군데 신장 세그먼트 다른 비율 ( 그림 2참조) 관 및 사 구성 요소에 있는. 그대로 세그먼트는 3 일 동안 다른 세그먼트 한 번 모든 24 h의 생존 능력을 결정 하기 위하여 분석 결과를 받게 했다. 그린 형광 calcein-오전은 세포내 esterase 활동, 살아있는 세포의 지표와 함께 존재 합니다. 레드-형광 브로민 homodimer-1 원형질 막의 무결성의 손실 볼 수 있다. 이러한 세그먼트는 그대로, 3 차원 구조, 중요 한 분석 결과 침투 confocal 현미경 검사 법으로 감지할 수는 ( 그림 3참조).
세그먼트는 동일한 세포 생존 능력 분석 실험을 사용 하 여 크기 균일성에 대 한 추가 특징 이었다. 불경기와 유리 슬라이드를 사용 하 여, 세그먼트 배치 했다 커버 아래 전표는 세그먼트의 모든 차원에 기계적인 힘 없이. 무료 부동, 세그먼트 셀 생존/독성 분석 결과에 배치 후 이미지 30 분 했다. 10 µ m 스텝 크기와 z-영상이 전체 세그먼트를 통해 찍은. 가장 큰 'X' 및 'Y' 차원 얻은 하 고 기록 했다. 'Z' 차원 마지막 처음부터 거리를 계산 하 여 얻은 표시 fluorophore. 주어진 세그먼트는 약 입방, 간단한 입방 볼륨 측정 얻은 고 플롯 한 기정 실험에서 10 무작위로 선택 된 세그먼트를 비교 하. 대상 볼륨 (300 µ m)3 의 = 0.027 m m3 막대 그래프(그림 4)에 빨간색 표시와 함께 표시 됩니다. 대표적인 'X' 및 'Y' 측정 그림 4B에 나와 있습니다. Outliers 있지만 대상 볼륨에 가까운 많은 세그먼트 있다. 반복 실험 일관 된 결과 보이고 있다 (n = 20). (여기에 표시 되지) 원시 측정 표시 세그먼트의 대다수에서 200-300 µ m를 측정 하는 하나 이상의 차원입니다. 이 보급 제한에 대 한 중요 한 의미를 갖는다.
신장 세그먼트 비 계 없는 내 피-섬유 구조에 포함 된 고 3 일 동안 경작. 신장 세그먼트 하루 3 ( 그림 5참조)에 의해 그대로 구조를 형성 하기 위하여 세포 구조와 통합 합니다. 구문을 미리 혈관 내 피 네트워크와 폰 Willebrand 요인 (그림 5E) 라벨 표시를 유지 합니다. 그러나, 그것은 네트워크 신장 세포 소재 침공 표시 되지 않습니다. 신장 상피 세포는 Cytokeratin-18 (그림 5B, 녹색)으로 표시 됩니다. 이러한 구문은 했다 생체 외에서 신장 기능을 테스트 하기 위해 FITC 표시 된 알 부 민 (그림 5C, 회색)으로 알을 품을. 동안에 잔여 알 부 민 발견 포함 된 신장 조직의 세그먼트에서 "핫스팟" 있다 신장 관 상피 세포 내부 luminally 통과 하는 알 부 민을 차지 하는 것으로 알려져 그의 지역에서. 이 알 부 민 재흡수 신장 세그먼트 세포질 구문에서 대표 생각 이다.
그림 1 : 대표 사진 신에서 고 신장 세그먼트 기정. Murine 신장은 제거, 씻어 서, 및 60 mm 접시에 놓이고 stereoscope 현미경 단계로 이동. 바늘 팁의 직경은 해 부를 안내 하는 데 사용 됩니다. Hemostats 해 부 악기에 대 한 팁을 바늘에 연결 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : Microdissected 신장 세그먼트. Microdissected 신장 세그먼트는 그들의 네이티브 배열에 glomeruli (왼쪽 아래, basophilic 구조) 및 tubules (이미지의 나머지)의 다양 한 비율을 포함 됩니다. 10 X 이미지, 눈금 막대를 표시 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 신장 세그먼트 생존. Microdissected 신장 세그먼트 라이브 및 죽은 직물의 부분을 포함합니다. 주로, 세그먼트는 살고, 하 고 자체 생존 능력 분석 결과 세포에 독성으로 72 h. 참고 다른 세그먼트 다른 시간 포인트 사용 했다에서 문화에 남아 있도록. 10 X 이미지, 스케일 바 = 200 µ m. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : 신장 세그먼트 볼륨 균일. (A) m m3 한 해 부 실험에서 입방 볼륨 세그먼트 (n = 10). 개별 세그먼트 대상 붉은 점 (대상 볼륨 0.027 m m3)에 비해 파란색 점으로 표시 됩니다. (B) 대표 X 및 Y 치수 살고 죽은 분석 결과, 10 X 이미지에서에서 측정. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5 : 조직 설계 비 계 없는 신장 세그먼트 구조. (A) 규격 (B) Cytokeratin-18-긍정적인 신장 관 상피 세포 (녹색)으로 신장 세그먼트의 설립을 표시 하는 병합 된 이미지. (C) FITC 표시 된 알 부 민. 핵에 대 한 (D) Hoescht 얼룩. (E) prevascular 네트워크를 강조 하는 폰 Willebrand 인자 (vWF) 양성. 10 X 이미지, 눈금 막대 = 200 µ m. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
메서드 구문 두 종류의 세포와 생체 재료 활용, 그리고 많은 경우에,에 관해서는 넓게 변화 신장 조직 생활 하는 데 사용 되는 오래 된 또는 하지 잘 성격을 나타낸 문학7. 많은 줄기 세포 접근을 사용 하는 또는 업과 고립에서 신장 아키텍처의 개별 구성 요소, 인위적으로 세포 현 탁 액에서 26 다른 차별화 된 세포 유형으로 전체 기관 재현의 전망 21고려를 압도. 이것은 아마 왜 다른 신장 조직의 세그먼트를 사용 하 여 조직 엔지니어링 응용 프로그램에에서 접근을 이동입니다. 위에서 설명한 대로 이전 작업은 PGA 건설 기계16에 시드를 위한 신장 세그먼트의 격리에서 수행 되었습니다. 그러나, 세그먼트의 격리를 설명 하는 데 사용 하는 방법 좀 자세하게에서 설명 했다 고 세그먼트 하지 어떤 일정 기간 생존 능력에 대 한 평가 대 한 교양 했다. 여기, 세포 생존 능력 분석 결과 사용 하 여 함께 설명 하는 방법을 보여줍니다, 최소 신장 세그먼트의 부분 전에 설명 하지는 72 h 마크를 생존 유지 하. 메서드는 또한 상당히 예측 가능한 크기 세그먼트 생성의 이점이 있다. 또한, 이러한 메서드 실패 신장 기능, 주로 그렇지 않으면 삭제 될 것 입니다에서 기본 신장 조직의 세그먼트의 격리에 대 한 가능한 방법 시연 보강 하는 임상 번역 접근 방식을 제공 합니다.
방법을 개발, 가장 큰도 전에, 먼저 적절 한 크기 및 절차 셀 문화 후드 이외의 많은 단계 참여로 불 임을 유지 하는 두 번째의 불 임 개체 식별 하 고. 30½ G 바늘 팁 유용한 측정 해 부 장치 것을 입증 했다. 무 균 실험, 주로 외과 설정 및 제어 murine 모피와 관련 된 초기에 도전 이었다.
절차의 한계는 신장 조직 세그먼트의 3 차원 특성으로 관련이 있습니다. 현미경 아래 하나의 뷰에서 세그먼트의 크기 바늘 직경, 0.260 m m의 크기 될 나타날 수 있습니다. 그러나, Z 치수는 stereoscope에 표시 되지 않습니다. 자체는 또 다른 한계는 서 손으로, 수행 됩니다. 미래에 로봇 표준화 이상적인 것입니다. 경우에 2 mm3 피라미드 신장 조직의 부분 절 개 하는 동안 올바른 방향에서 유지 되었다, 그대로 nephrons에 밖으로 해 부 되지 않을 것 이해할. 마지막으로, 이러한 구조는 섬 세포는 사양에 포함 했다 바이오 인공 췌를 비교 하나 키 차이20인정 해야 합니다. 신장 췌 장에서 기능적 및 구조적으로 독특한 이며 틀림 없이 더 복잡 한. 또한, 작은 섬 세포는이 방법에서는 신장 세그먼트와 격리 기능 세포의 재벌 반대로 췌 장 내의 기능 셀의 한 하위. 아키텍처와 신장과 특히 여과 기능에 큰 역할을 재생 방향을 구체적으로 구문 내 세그먼트의 균일 한 방향의 부족이이 방법론의 추가 약점입니다.
지속적인 연구의 신장 세그먼트 및 신장 구조 기능, 알 부 민 글귀 발생 범위를 명확히 하 고 다른 신장 기능을 평가 하는 평가 목적 이다. 미래 동물 실험의 방광 벽의 신장 구문 주입을 포함 것. 이 매우 혈관 신체 구조에는 구조를 포함 것 이다 급속 한 문 합을 허용으로 filtrate 방광에 직접 검출, 수집 시스템에 대 한 필요성을 제거. 신장 조직의 체 외에서 기능은 매우 제한 되어 고려, vivo에서 테스트는 중요 한입니다. 현재 문학에서 보고 된 유일한 생체 외에서 테스트는 알 부 민 글귀와 erythropoietin 식17,22를 중심으로. 어떤 외국 바이오에 의존, 기능, 생체 신장 조직 교체 쪽으로 이동에 약속을 표시 하는 기본 내 피 네트워크 구조에 포함 된 이러한 생활 세그먼트의 기본 아키텍처에 그대로 신장 조직의 .
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
NIH 박사 제도적 교육 부여, NIH-HL-007260
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Non-fenestrated Sterile Field | Busse Hospital Disposables | 696 | |
| Fenestrated Sterile Field | Busse Hospital Disposables | 697 | |
| Halsted Mosquito Forceps 5 Curved | Miltex | Mil-7-4 | "Hemostat" in manuscript |
| Extra Fine Graefe Forceps, Curved with teeth | Fine Science Tools | 11155-10 | Fine forceps with teeth |
| Extra Fine Graefe Forceps, Serrated (without teeth) | Fine Science Tools | 11152-10 | Fine forceps without teeth |
| Fine Scissors - Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14568-09 | Iris Scissors |
| Betadine Surgical Scrub with Pump, Povidone-iodine 7.5% | Purdue Products L.P. | 67618-151-17 | |
| Sterile Cotton Gauze Pad (4" x 4") | Fisher Healthcare | 22-415-469 | |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Solution | Corning | 21-030-CV | |
| Penicillin/Streptomycin Solution, 100X | Corning | 30-002-Cl | |
| Isoflurane, USP | Manufacturer: Piramal, Distributor: McKesson | 2254845 | |
| Nair Hair Remover | Nair | 22600-23307 | Hair Removal Cream in text |
| 200 Proof Ethanol | Decon Laboratories | 2705 | Diluted to 70% Ethanol Solution |
| BioLite 60mm Tissue Culture Dish | Themo-Scientific | 130181 | |
| Press'n Seal | Glad | 12587-70441 | Applied to Stereoscope |
| SZX16 Stereo Microscope | Olympus | SZX16 | |
| Fiber Optic Illuminator | Cole Parmer | 41720-20 | |
| Self-Supporting Dual-Light Pipe, 23" L Gooseneck | Cole Parmer | EW-41720-60 | |
| Scalpel Handle #3 | Miltex | Mil-4-7 | |
| Sterile Rib-Back Carbon Steel Blade, Blade Size 15 | Bard-Parker | 371115 | |
| 31 1/2 Gauge Needle | ThermoFisher Scientific | 14-826F | Becton Dickinson 305106 |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | Corning | 10-017-CV | |
| Fetal Select 100% Bovine Serum | Atlas Biologicals | FS-0500-AD | |
| Normal Human Dermal Fibroblasts | Lonza | CC-2511 | |
| Human Adipose Microvascular Endothelial Cells | Sciencell Research Laboratories | 7200 | |
| Surgical Loupes (2.5x) | Orascoptic | (N/A) Custom Order | |
| FGM-2 (Fibroblast Basal Medium with FGM-2 SingleQuots Added) | Lonza | CC-3131, CC-4126 | |
| EGM-2 (Endothelial Basal Medium with EGM-2 SingleQuots Added) | Lonza | CC-3156, CC-4176 | |
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit for Mammalian Cells | ThermoFisher Scientific | L3224 | |
| Anti-Cytokeratin-18 Antibody | Abcam | ab668 | |
| Goat anti-Mouse IgG, Alexa Fluor 633 | ThermoFisher Scientific | A-21052 | |
| Goat anti-Rabbit IgG, Alexa Fluor 546 | ThermoFisher Scientific | A-11010 | |
| Anti-Von Willebrand Factor Antibody | Abcam | ab6994 | |
| Albumin, Fluorescein isothiocyanate Conjugate | Sigma Aldrich | A9771-50MG | |
| Hoescht 33342 | BD Pharmingen | 561908 | |
| Background Buster | Innovex Biosciences | NB306 |
References
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