Congelamento dei nematodi: un metodo per esporre i tessuti interni dei vermi per la colorazione

- Trasferire C. elegans lavato in liquido su un vetrino precedentemente rivestito con polilisina, un composto che aiuterà le cuticole dei vermi ad aderire alla superficie del vetro. Premere delicatamente un altro vetrino verso il basso con un bordo che sporge dal vetrino inferiore. Per immobilizzare i vermi senza danni, comprimere gli animali evitando qualsiasi movimento laterale. Quindi, posizionare i vetrini con vermi a sandwich su un blocco di metallo all'interno di un contenitore da laboratorio isolato riempito con un agente congelante, come azoto liquido o ghiaccio secco.

Il metallo è un efficace conduttore di temperatura che garantisce che la superficie del blocco sia sufficientemente fredda da congelare rapidamente le cuticole del verme su entrambe le superfici di vetro. Una volta congelati, separare rapidamente i vetrini per separare o aprire le cuticole del verme. Procedere con la fissazione e la colorazione dei tessuti poiché la rottura della cuticola a bassa permeabilità consente ai fissativi chimici e agli anticorpi coloranti di accedere ai tessuti interni del verme. Nel seguente protocollo, vedremo una dimostrazione dettagliata della tecnica di freeze-cracking e fissaz