Fissazione dell'etanolo e colorazione DAPI: un metodo per visualizzare il DNA in C. elegans

- Iniziare con una goccia di soluzione tampone su un vetrino da microscopio e trasferire i vermi intatti nella gocciolina. Una volta che i vermi sono in posizione, usa un fazzoletto privo di lanugine per assorbire e rimuovere il tampone. Fissare il campione bagnando più volte i campioni con etanolo al 90%, lasciandolo evaporare dopo ogni applicazione.

Una volta che l'etanolo è evaporato dopo il risciacquo finale, aggiungere al campione una soluzione contenente il colorante dell'acido nucleico, DAPI. DAPI si lega preferenzialmente alle basi dell'adenina e della timina nel solco minore del DNA. Quando è legato, il complesso DAPI-DNA assorbe la luce UV ed emette luce blu visibile.

Successivamente, aggiungere un conservante anti-sbiadimento per prolungare la durata di conservazione del campione. Applicare un vetrino coprioggetti e sigillarlo sul vetrino. Quindi utilizzare un microscopio a fluorescenza con un filtro blu per visualizzare i corpi DAPI, che, a seconda della cellula e del suo stato di ciclo, possono rappresentare singoli cromosomi, coppie di cromatidi fratelli o interi nuclei. In questo esperimento, conteremo coppie di cromatidi fratelli colorati con DAPI negli ovociti, per