Montaggio dell'agar: un metodo di base per montare embrioni vivi di pesce zebra per l'imaging a lungo termine

- Inizia aggiungendo agarosio E3 con punto di fusione medio-basso e riscaldando fino a quando l'agarosio non si dissolve completamente. Raffreddare l'agarosio a 37 gradi Celsius e aggiungere la soluzione di tricaina. Successivamente, anestetizzare gli embrioni aggiungendo tricaina a una piastra di Petri contenente embrioni in terreno E3. Agitare la capsula di Petri per raccogliere gli embrioni al centro.

Utilizzando una pipetta di trasferimento, prelevare un embrione con una quantità minima di terreno. Tenere la pipetta in posizione verticale e far rimbalzare l'embrione per posizionarlo sulla punta della pipetta. Ora metti l'embrione nella soluzione di agarosio senza aggiungere alcun mezzo in eccesso, che diluirebbe l'agarosio e impedirebbe la gelificazione. Mescolare delicatamente l'embrione all'interno dell'agarosio e trasferire la soluzione nel pozzetto di una piastra ai fosfori utilizzando la pipetta.

Posizionare la piastra al microscopio e utilizzare la punta di una pipetta per posizionare l'embrione nell'orientamento desiderato. Una volta che l'agarosio si è solidificato, versarvi sopra del terreno E3 contenente tricaina per mantenere l'agar idratato e visualizzare l'embrione