Zebrafisk Kardiomyopati Model: Drug-induceret kardiotoksicitet

- Kardiomyopati er en tilstand, hvor hjertemusklen svækker og mister evnen til at pumpe blod. Denne tilstand kan gentages i zebrafisk. For det første fortyndes en bestandsopløsning af et lægemiddel, der er ansvarlig for kardiotoksicitet i Hanks 'Balanced Salt Solution for at forberede flere arbejdskoncentrationer.

Skub nu forsigtigt nålen 1 til 2 millimeter ind i peritonealhulen og injicerer langsomt lægemiddelopløsningen. Vent fem sekunder, før du trækker nålen ud for at forhindre opløsningen i at lække ud. Overfør straks fisken til en ren tank, der indeholder ferskvand. Registrer antallet af fisk, der dør hver dag på grund af alvorlig kardiotoksicitet, skade på hjertemusklen. Lægemidlet binder sig til dødsreceptorer, der er til stede på kardiomyocytcellemembranen og udløser apoptose, hvilket resulterer i alvorlig kardiotoksicitet.

Opret en overlevelseskurve, en graf, der viser sandsynligheden for overlevelse over tid for hver lægemiddelkoncentration. I eksemplet vil vi injicere doxorubicin eller DOX for at fremkalde kardiomyopati hos en voksen zebrafisk på to måder.

Inden fisken indsprøjtet med DOX, hurtigt fisken i 24 timer. Næste, gruppere fisk. Mens bedøvet, skal du bruge et rent filterpapir til at tørre hver fisk og måle sin kropsvægt. Lav grupper af fisk, der alle er inden for 10% af samme kropsvægt, så hver gruppe kan injiceres med samme dosis DOX. Næste, beregne arbejdskoncentrationen af DOX for hver gruppe, således at hver gruppe injiceres med fem mikroliter opløsning og modtager den samme dosis DOX efter kropsvægt.

Derefter fortyndes bestanden af DOX i 1x HBSS. Bland fortyndingen med en hvirvel og derefter puls spin fortyndingen for at holde den samlet i røret. Til injektionen skal du forberede en injektionsplatform. I en ren 100 millimeter petriskål skal du placere en svamp. Ved hjælp af et dissektionsmikroskop skal du skære et hulrum i svampen for at holde en fisk, fire centimeter fungerer normalt.

Derefter fastgøres en 10-mikroliter mikrosyringe på en 34-gauge nål. Skyl derefter nålen med 1x HBSS for at fjerne eventuelle bobler eller blokke fra sprøjten og slangen. Nu, kort bedøve den voksne fisk med tricaine. Derefter, suge svampen i fosteret vand med tricain og overføre en fisk på svampen med maven op til injektion. Nu intraperitoneally injicere DOX løsning ved hurtigt at indsætte nålen i en 45 graders vinkel i midterlinjen mellem bækken finnerne omkring 1 til 2 millimeter dyb.

Derefter frigives langsomt hele DOX-opløsningen. Før du trækker nålen tilbage, skal du vente fem sekunder. Alternativt kan fisken placeres sideværts med interiøret til højre. Derefter injiceres den laterale linje over bækkenfinnen med facetet opad, der peger mod kl. 7 i en 45 graders vinkel og 3 til 4 millimeter dyb. Hvis begge metoder til injektion var vellykkede, vil der være en rød farvetone i maven.

Efter injektionen skal du hurtigt overføre fisken til en ren krydsningstank fyldt med ferskvand, hvor den kan komme sig. Skyl derefter nålen med HBSS og fortsæt med at injicere den næste fisk. Senere returneres den injicerede fisk til et system med løbende cirkulation, men adskilt fra hovedsystemet for at undgå krydskontaminering. I de næste 24 timer skal du fortsætte med at faste fisken.