Zebrafisk Kardiomyopati Model: Drug-induceret kardiotoksicitet

Overview

Denne video beskriver teknikken til at skabe en zebrafisk kardiomyopati model med minimale variationer blandt eksperimentelle grupper og i prøven, skaber vi zebrafisk kardiomyopati model ved hjælp af stoffet doxorubicin.

Protocol

1. DOX Injektion i voksne fisk

1. Placer en ren 100 mm petriskål med en svamp inde i den, under et dissektionsmikroskop, og juster derefter fokus. Skær svampen for at lave et hulrum på ca. 4 cm i længden for at holde en fisk. Lav et længere hulrum til en større fisk.
2. Forbered en 34 G nål med en 10 μL mikrosprøjte. Skyl nålen med 1x HBSS buffer for at fjerne eventuelle bobler og blokke fra sprøjten og slangen.
3. Bedøve den voksne fisk i embryonvand indeholdende 0,16 mg/mL tricain i 2 min.
   BEMÆRK:Langvarig anæstesiisering over 5 minutter efterfulgt af DOX-injektion kan let forårsage fiskedød.
4. Blød svampen i embryovand med tricain, og overfør fisken på svampen til injektion.
5. Udfør IP DOX-injektion ved hjælp af en af de to metoder, der er beskrevet nedenfor.
   1. Klassisk IP-injektion
      1. Placer fisken med maven op i svampens hulrum. Sæt hurtigt nålen, med en 45° vinkel til fiskekroppen i midterlinjen mellem bækkenfinnerne, og træng ind ca. 1-2 mm. Slip alle DOX-løsninger langsomt. Vent 5 s, før du trækker nålen ud. Kontroller DOX levering af en synlig rød farve i fisken maven.
   2. Alternativ IP-injektion
      1. Placer fisken sideværts på svampen med den forreste til højre. Stabilisere fisken forsigtigt ved hjælp af en stump ende pincet med venstre hånd, og hold mikro-sprøjten med højre hånd.
      2. Placer nålen under sidelinjen over bækkenfinnen, mens facetten vender mod. Peg på klokken 7 position i en 45 ° vinkel, skal du indsætte nålen 3-4 mm til fisk hulrum placeret mellem bækken og anal finner, og derefter langsomt trykke stemplet. Kontroller DOX levering af en synlig rød farve i fisken maven.
6. Overfør hurtigt den injicerede fisk til en ren krydsningstank fyldt med ferskvand for at gøre det muligt for fisken at komme sig. Skyl nålen én gang med 1x HBSS buffer mellem injektionerne.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish