Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Кардиомиопатия является состояние, при котором сердечная мышца ослабевает и теряет способность перекачивать кровь. Это условие может быть воспроизведено в зебрафиш. Во-первых, разбавить фондовый раствор препарата, ответственного за кардиотоксичность в Хэнкса сбалансированной соли решение подготовить несколько рабочих концентраций. Далее, место трикаин анестезированной рыбы, брюшной стороны вверх, на проведение губки под рассечением микроскопа. Позиция иглы между тазовыми плавниками под углом 45 градусов от горизонтали.
Теперь осторожно нажмите иглу от 1 до 2 миллиметров в брюшную полость и медленно вводить раствор препарата. Подождите пять секунд, прежде чем вытащить иглу, чтобы предотвратить утечку раствора. Немедленно перенесите рыбу в чистый резервуар с пресной системной водой. Замит количество рыб, умирающих каждый день из-за тяжелой кардиотоксичности, повреждения сердечной мышцы. Препарат связывается с рецепторами смерти, присутствующими на мембране клеток кардиомиоцитов и вызывает апоптоз, что приводит к тяжелой кардиотоксичности.
Создайте кривую выживания, график, показывающий вероятность выживания с течением времени для каждой концентрации наркотиков. В примере, мы будем вводить доксорубицин, или DOX, чтобы вызвать кардиомиопатию у взрослых зебры двумя способами.
Перед инъекцией рыбы с DOX, быстро рыбы в течение 24 часов. Далее, группа рыбы. В то время как анестезированной, использовать чистую фильтровальную бумагу, чтобы высушить каждую рыбу и измерить ее вес тела. Сделать группы рыб, которые все в пределах 10% от той же массы тела, так что каждая группа может быть введена с той же дозой DOX. Далее, рассчитать рабочую концентрацию DOX для каждой группы, так что каждая группа вводится с пятью микролитров раствора и получает ту же дозу DOX по весу тела.
Затем разбавить запас DOX в 1x HBSS. Смешайте разбавление с вихрем, а затем пульс спина разбавления держать его объединились в трубку. Для инъекции, подготовить инъекционные платформы. В чистой 100-миллиметровой чашки Петри, поместите губку. С помощью микроскопа вскрытия, вырезать полость в губку, чтобы держать одну рыбу, четыре сантиметра обычно работает.
Затем, на 34-го калибра иглы, приложите 10-микролитер microsyringe. Затем, промыть иглу с 1x HBSS, чтобы удалить любые пузырьки или блоки из шприца и трубки. Теперь, кратко анестезировать взрослую рыбу с tricaine. Затем, замочить губку в воде эмбриона с трикайном и передачи рыбы на губку с животом для инъекции. Теперь, интраперитонически вводить DOX решение быстро вставив иглу под углом 45 градусов в средней линии между тазовыми плавниками около 1 до 2 миллиметров глубиной.
Затем, медленно отпустите все раствор DOX. Перед втягивание иглы, подождите пять секунд. Кроме того, рыба может быть расположена боковой с интерьером справа. Затем, вводили боковой линии над тазовым плавником с скошенной вверх указывая на 7 часов под углом 45 градусов и от 3 до 4 миллиметров глубиной. Если любой метод для инъекции был успешным не будет красного оттенка в животе.
После инъекции, быстро передать рыбу в чистый резервуар пересечения заполнены пресной системой воды, где он может восстановить.Затем, промыть иглу с HBSS и приступить к инъекции следующей рыбы. Позже, вернуть вводили рыбу в систему с проточной циркуляции, но отдельно от основной системы, чтобы избежать перекрестного загрязнения.
