Зебрафиш Кардиомиопатия Модель: Индуцированные наркотиками кардиотоксичность

Overview

Это видео описывает технику создания модели кардиомиопатии зебры с минимальными вариациями среди экспериментальных групп и в образце, мы создаем модель кардиомиопатии зебры с использованием препарата доксорубицин.

Protocol

1. Инъекция DOX во взрослую рыбу

1. Поместите чистую 100-мм чашку Петри с губкой внутри нее, под микроскопом вскрытия, а затем отрегулируйте фокус. Вырезать губку, чтобы сделать полость около 4 см в длину, чтобы держать рыбу. Сделайте более длинную полость для более большой рыбы.
2. Приготовьте иглу 34 G с микро-шприцем 10 йл. Промыть иглу с 1x HBSS буфера, чтобы удалить любые пузырьки и блоки из шприца и труб.
3. Обезболивать взрослую рыбу в эмбриональной воде, содержащей 0,16 мг/мл tricaine в течение 2 мин.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Длительная анестезия в течение 5 минут с последующим инъекцией DOX может легко привести к гибели рыбы.
4. Замочите губку в воде эмбриона с tricaine, и передать рыбу на губку для инъекций.
5. Выполните инъекцию IP DOX одним из двух методов, описанных ниже.
   1. Классическая инъекция IP
      1. Распоить рыбу с животом в полости губки. Быстро вставьте иглу, с углом 45 "к телу рыбы в средней линии между тазовыми плавниками, и проникнуть примерно 1-2 мм. Отпустите все решения DOX медленно. Подождите 5 с, прежде чем вытащить иглу. Проверьте доставку DOX видимым красным цветом в животе рыбы.
   2. Альтернативная инъекция IP
      1. Поместите рыбу боковой на губку с передней справа. Аккуратно стабилизуйте рыбу, используя тупые конечные типсы левой рукой, и держите микро-шприц правой рукой.
      2. Распоить иглу ниже боковой линии над тазовым плавником, с скошенной вверх. Указывая на положение 7 часов под углом 45 градусов, вставьте иглу 3-4 мм в полость рыбы, расположенную между тазовыми и анальными плавниками, а затем медленно угнетает поршень. Проверьте доставку DOX видимым красным цветом в животе рыбы.
6. Быстро перенесите впрыскиваемую рыбу в чистый резервуар для скрещивания, наполненный пресной системной водой, чтобы рыба можно было восстановиться. Промыть иглу один раз с 1x HBSS буфер между инъекциями.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish