Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Transcript
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Comece colocando um lado ventral do rato eutanizado em cima de um leito cirúrgico e protegendo os membros do animal. Usando uma tesoura, corte ao longo da linha média através da caixa torácica até as glândulas salivares. Coloque uma ponta de pipeta por baixo da traqueia para elevá-la e isolá-la. Gire o leito cirúrgico 180 graus. Insira uma agulha de seringa contendo uma mancha de tinta da Índia na traqueia e injete a tinta nos pulmões até sentir resistência.
As células cancerígenas secretam uma grande quantidade de ácido láctico que gera uma forte carga negativa na superfície celular. Quando essas células estão manchadas com tinta da Índia, uma mancha ácida, a superfície celular repele a mancha e permanece sem manchas.
Use uma tesoura para cortar a traqueia e deslize um par de pinças sob os pulmões. Puxe suavemente os pulmões para fora do corpo do animal. Enxágüe os pulmões na água e transfira-os para um frasco contendo a solução de Fekete para remover o excesso de mancha e fixar o tecido em um capô de fumaça. Os nódulos tumorais parecem brancos contra o fundo escuro.
No protocolo a seguir, executaremos a técnica de inflação de tinta da Índia para validar a metástase pulmonar.
Para validar a metástase do tumor primário no pulmão, primeiro coloque o rato na posição supina em uma placa de poliestireno e fixe as pernas para garantir um acesso desobstruído à traqueia. Pulverizar o mouse com 70% de etanol. Em seguida, use um par de tesouras para fazer uma incisão ao longo da linha média do abdômen médio do rato através da caixa torácica e até as glândulas salivares. Identifique a traqueia. Em seguida, use fórceps para remover os tecidos circundantes.
Em seguida, segurando uma ponta de pipeta em uma mão, rosque a ponta sob a traqueia e levante suavemente o tecido para cima e para longe do corpo. Mantendo a traqueia elevada, gire a plataforma de dissecação 180 graus. Em seguida, insira uma seringa tuberculina de meia cc de 27 bitolas na traqueia e infle completamente os pulmões com tinta da Índia até que uma forte resistência seja sentida.
Então, usando uma tesoura, corte a traqueia. Segurando o rato no lugar com um fórceps, insira outro fórceps sob os pulmões e puxe os lóbulos pulmonares para fora do rato. Enxágüe os pulmões brevemente em um béquer de água e transfira o tecido para um capô de fumaça. Em seguida, coloque os pulmões em um frasco de cintilação de vidro contendo 3 mililitros da solução de Fekete, tampando o frasco para evitar que a solução evapore. Depois de alguns minutos, transfira os pulmões para uma placa de Petri e conte o número de nódulos tumorais únicos, brancos e metastáticos.
