Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Начните с размещения усыпляемой мыши брюшной стороны на хирургической кровати и обеспечения конечностей животного. Используя ножницы, вырезать вдоль средней линии через грудную клетку до слюнных желез. Поместите наконечник пипетки под трахею, чтобы поднять и изолировать его. Поверните хирургическую кровать на 180 градусов. Вставьте шприц иглы, содержащие пятна чернил Индии в трахею и вводить чернила в легкие, пока вы не почувствуете сопротивление.
Раковые клетки выделяет большое количество молочной кислоты, которая генерирует сильный отрицательный заряд на поверхности клетки. Когда эти клетки окрашены чернилами Индии, кислые пятна, поверхность клетки отталкивают пятно и остаются неокрашенными.
Используйте ножницы, чтобы вырезать трахею и сдвиньте пару пинцетов под легкие. Аккуратно вытащите легкие из тела животного. Промыть легкие в воде и передать их во флакон, содержащий раствор Fekete, чтобы удалить избыток пятна и исправить ткани в дым капот. Опухолевые узелки выглядят белыми на темном фоне.
В следующем протоколе, мы будем выполнять Индии чернила инфляции техники для проверки метастазов легких.
Чтобы проверить метастазы первичной опухоли в легкие, сначала поместите мышь в положение на спине на полистирол борту и обеспечить ноги, чтобы обеспечить беспрепятственный доступ к трахее. Спрей мыши с 70% этанола. Затем используйте ножницы, чтобы сделать разрез вдоль средней линии среднего живота мыши через грудную клетку и вверх к слюнных желез. Определите трахею. Затем используйте типсы для удаления окружающих тканей.
Далее, держа кончик пипетки в одной руке, нить кончик под трахеей и осторожно поднимите ткань вверх и подальше от тела. Сохраняя трахею повышенной, поверните вскрытую платформу на 180 градусов. Затем вставьте половину cc 27-го калибра туберкулин шприц в трахею и полностью надуть легкие с чернилами Индии, пока сильное сопротивление ощущается.
Затем, используя ножницы, вырезать трахею. Удерживая мышь на месте одним типсом, вставьте еще один типс под легкие и вытащите легочные доли из мыши. Промыть легкие кратко в стакане воды и передачи ткани в дым капот. Затем поместите легкие в стеклянный сцинтилляционный флакон, содержащий 3 миллилитров раствора Фекете, укупорки флакона, чтобы предотвратить раствор от испарения. Через несколько минут перенесите легкие в чашку Петри и подсчитайте количество одиночных, белых, метастатических опухолевых узелков.
