Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
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Transcript
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Comience colocando un lado ventral de ratón eutanasiado en una cama quirúrgica y asegurando las extremidades del animal. Usando tijeras, corta a lo largo de la línea media a través de la caja torácica hasta las glándulas salivales. Coloque una punta de pipeta debajo de la tráquea para elevarla y aislarla. Gire la cama quirúrgica 180 grados. Inserte una aguja de jeringa que contenga una mancha de tinta india en la tráquea e inyecte la tinta en los pulmones hasta que sienta resistencia.
Las células cancerosas secretan una gran cantidad de ácido láctico que genera una fuerte carga negativa en la superficie celular. Cuando estas células están manchadas con tinta india, una mancha ácida, la superficie celular repele la mancha y permanece intacta.
Usa tijeras para cortar la tráquea y deslizar un par de pinzas debajo de los pulmones. Saque suavemente los pulmones del cuerpo del animal. Enjuague los pulmones en agua y transfiérelos a un vial que contenga la solución de Fekete para eliminar el exceso de manchas y fijar el tejido en una campana de humo. Los nódulos tumorales aparecen blancos sobre el fondo oscuro.
En el siguiente protocolo, realizaremos la técnica de inflación de tinta de la India para validar la metástasis pulmonar.
Para validar la metástasis del tumor primario en el pulmón, coloque primero el ratón en la posición supina en una tabla de poliestireno y asegure las piernas para garantizar un acceso sin obstáculos a la tráquea. Rocíe el ratón con un 70% de etanol. Luego, usa un par de tijeras para hacer una incisión a lo largo de la línea media del abdomen medio del ratón a través de la caja torácica y hacia las glándulas salivales. Identifique la tráquea. A continuación, utilice fórceps para extraer los tejidos circundantes.
A continuación, sosteniendo una punta de pipeta en una mano, enhebrar la punta debajo de la tráquea y levantar suavemente el tejido hacia arriba y lejos del cuerpo. Manteniendo la tráquea elevada, gire la plataforma de disección 180 grados. Luego, inserte una jeringa de tuberculina de medio cc y calibre 27 en la tráquea e infla completamente los pulmones con tinta india hasta que se sienta una fuerte resistencia.
Luego, usando un par de tijeras, corta la tráquea. Sosteniendo el ratón en su lugar con un fórceps, inserte otros fórceps debajo de los pulmones y tire de los lóbulos pulmonares del ratón. Enjuague los pulmones brevemente en un vaso de agua y transfiera el tejido a una campana de humo. A continuación, coloque los pulmones en un vial de centelleo de vidrio que contenga 3 mililitros de la solución de Fekete, limitando el vial para evitar que la solución se evapore. Después de unos minutos, transfiera los pulmones a una placa de Petri y cuente el número de nódulos tumorales únicos, blancos y metastásicos.
