Saggio di immunofluorescenza: un metodo per identificare le cellule tumorali catturate su un filo medico

- Prendi un filo funzionalizzato con una piccola porzione d'oro rivestita con un idrogel accoppiato con anticorpi di interesse. Immergere la parte d'oro del filo in una fiala contenente cellule tumorali. Chiuderlo con un tappo a filo e incubarlo in un rotatore di tubi. Le cellule tumorali circolanti o CTC che mostrano antigeni di superficie si legano agli anticorpi sul filo. Sciacquare il filo immergendolo in fiale contenenti soluzione salina tamponata con fosfato o PBS e asciugare all'aria. Ora immergi il filo in una soluzione di acetone per fissare le cellule disidratandole.

Successivamente, inserire delicatamente il filo attraverso una punta P200 con la parte funzionalizzata al suo interno. Riempire il nastro con un anticorpo coniugato con un fluorocromo per immergere il filo. Questi anticorpi marcati si legheranno ai rispettivi antigeni presenti sulle cellule. Sigillare l'apertura con una pellicola da laboratorio e incubare per una notte al buio a 4 gradi Celsius. Quindi, lavare il filo con PBS per rimuovere eventuali anticorpi non legati. Posizionare il filo in un portafilo e osservarlo al microscopio a fluorescenza. Le CTC legate dagli anticorpi emettono fluorescenza sul filo